国内外进展情况、研究目的及意义

1、国内外进展情况、研究目的及意义非典型肺炎是一种传染性极强的严重急性呼吸道综合症状（Severe acute respiratory syndrome, SARS），主要表现为高热、干咳、胸闷、头痛、关节酸痛、全身乏力、腹泄等症状。据世界卫生组织（WHO）正式确认，SARS是由冠状病毒的一个变种(SARS)引起的。SARS病毒是一种从未在人体发现过的全新的变种病毒，因此人类至今对其认识还很有限，对SARS病毒引起的非典型肺炎也还缺乏有效的治疗药物和措施。由于SARS发病急、传染性强，疫性发展快，因此成为当前国内外重点预防和治疗的传染性疾病。我国政府已将SARS列入法定管理传染病，采取了一系列重大

2、措施。做好SARS的防治工作直接关系到广大人民群众的身体健康和生命安全，关系到我国改革发展稳定的大局。从我国目前对SARS防治的情况看，SARS是可以预防也可以治疗的。既然SARS是传染病，对它的预防就显得十分重要，从某种意义上看，防大于治。目前对SARS的预防方法很多，其中中医药的预防占了很重要的位置。根据中医理论，SARS属于“温病”范畴，病因为感受疫毒时邪，病位在肺。基本病机为热毒痰瘀，壅阻肺络，热盛邪实，湿邪内蕴，耗气伤阴，甚者会出现气急喘脱的危象。因此，对该病的预防则需重在益气化湿，清热解毒，疏风透邪。本课题拟选用国家中医药管理局制定的非典型肺炎中医药防治技术方案中预防用中药处方（生

3、黄芪，败酱草，薏苡仁，桔梗，生甘草），对其进行初步的中药药理学研究，并与目前市面较流行的抗病毒中药板蓝根制剂对比。本课题的研究目的是要明确中药预防SARS复方在增强机体免疫功能、抗病毒、改善机体状态等方面的作用，为中医药抗SARS的应用提供科学的依据，也为预防SARS中药的选用提供药理学依据。四、研究内容及方法（研究对象、方法及技术路线）(一)研究内容:1中药复方对机体免疫功能的影响2中药复方的解热作用3中药复方对病毒感染动物的保护作用(二)实验方法：实验参照中药药理实验方法学（陈奇主编）,设立空白对照组中药复方高、低剂量组、板蓝板对照组，所有实验数据采用SPSS统计软件进行处理。预SARS中

4、药处方组成：生黄芪 10 g，败酱草 15 g，薏苡仁 15 g，桔梗 6 g，生甘草 3 g选自国家中医药管理局制定的非典型肺炎中医药防治技术方案中药制备：将上述中药按比例配方，水煎煮两次，合并药液浓缩到所需浓度。给药方法：灌胃给药（ig）1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的测定原理:噬细胞具有吞噬异物,处理抗原等多种功能.鸡红细胞作为一种异物(或抗原)注入小鼠腹腔后,巨噬细胞会将其吞噬并进行消化,卵育一定时间后观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的数量,可反映机体非特异性免疫功能状态.方法:取20只小鼠,随机分为2组,给药组每只小鼠按0.2ml/10g(体重).水煎液灌胃,对照组为等容积生理盐水,共1

5、0日.末次给药1h后每鼠腹腔注射5%鸡红细胞0.4ml,1014h后用劲椎脱臼法处死小鼠,仰位固定于鼠板,消毒腹部,前开腹部皮肤,注入生理盐水2ml,轻揉腹部,1min后抽出腹腔洗液1ml,滴涂于干净载玻片上.每片2ml,共2片,放在垫有湿纱布的搪瓷盆中,置37°c温箱内孵育30min,取出玻片用生理盐水漂洗,以除去未巾片的细胞,冷风吹干,1:1丙酮-甲醇固定5min,再用4%姬姆萨瑞特氏液染色510min,蒸馏水漂洗,晾干.在油镜下观察并计算巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数:吞噬百分率=吞噬鸡红细胞巨噬细胞数/100个巨噬细胞吞噬指数:被吞噬鸡红细胞数/100个巨噬细胞2.小鼠脾淋巴细

6、胞花结形成试验原理:淋巴细胞表面具有受体,可与不同种动物的红细胞结合,形成玫瑰瓣样的细胞团,称为玫瑰花结(RFC),而此形成率的高低,常可反映机体细胞免疫功能的强弱,故可作为药物影响免疫功能的指标之一.方法:取雄性小鼠20只,随机分为三组(.生理盐水组),每只小鼠腹腔注射5%绵羊红细胞(SRBC)0.4ml(约4 亿个SRBC),1 次免疫后,接着按组分别以0.4ml/20g量给与水煎剂及生理盐水灌胃,每日1 次,连续4次.末次给药后1小时处死小鼠,取出脾脏,按组分放,称重后放入平皿,剪成米粒大小,用Gey's液洗涤3次,用吸管将脾小粒移入瓦管捻转,使碎离成脾细胞.加入pH为7.6的G

7、ry's液2ml混匀,以细胞吸管取上层液,再将沉淀的组织块反复研磨,使能分散混悬于上层液,合并脾细胞悬液,静置5分钟使小块组织下沉,吸取上层液,以1000rpm离心3次,第一次10分钟,第2,3次为5分钟均在离心后弃去上层液(内含血浆成分,细胞碎片等).最后1次弃去上清液后,加入Gry's液2ml,取部分进行细胞计数,加1%台盼蓝检查活细胞数(一般为8095%).以上操作过程均应在冰水浴中和无菌条件下进行.将上述脾细胞悬液稀释成8×106个细胞/ml.取0.1ml加入1%SRBC及经SRBC吸取过的灭活小牛血清各0.1ml混匀,以1000rpm离心10分钟后放入4&#

8、176;C冰箱2 小时,然后每管加入1%甲苯蓝20µl染色.用尖咀吸管轻轻分散沉积细胞,再将均匀的细胞悬液滴于血球计数盘上,盍上盍玻片,在高倍镜下计数特异玫瑰花结形成的百分率。3大鼠发热试验：干酵母致热法原理:酵母混悬液皮下注射于大鼠,先引起动物体温下降,一段时间后动物体温明显升高,并持续较长时间,局部有明显炎症,动物全身表现与临床伴内脏或皮肤有明显炎症的里热证类似,故可用此作为发热动物模型以研究动物特别是清热药的解热功效.对此有明显的抑制作用.方法:1.酵母悬液制备:称取干酵母10g,置于报乳钵中,逐渐加入蒸馏水为均匀悬浆,最后定容为50ml(20%),此液须于临用前配制.2.大鼠

9、准备:大鼠于实验室环境适应34日,每日用水银体温计从肛内测体温12次,实验当日每小时测体温1次,连续23次,选取体温变化不超过0.3°C的动物供实验用.3.实验:将合格大鼠随机均分若干组,分别灌服不同剂量的药物或黄芪胶悬液(对照组),给药后各鼠立即于背部皮下注入20%酵母悬液10ml/kg,然后于0.5,1,2,4,6,8,10及12小时各测大鼠体温一次.4.病毒感染小鼠的死亡中保护试验原理:用流感病毒鼠肺适应株滴鼻感染小鼠,可使发生肺炎而互死亡,以动物的死亡率和存活时间,可作为观察药物有无抗病毒作用的指标.材料:动物:小鼠.病毒毒种:流感病毒亚甲型FM1鼠肺适应株.器材:灭菌的小试管,药品及试剂:方法:1.稀释病毒:用肉汤将病毒毒种稀释成2个LD50/0.05ml,置冰水浴中备用. 2.感染小鼠:选小鼠1416g健康小鼠,按体重随机分组,于乙醚轻度麻醉下滴鼻感染,每鼠0.05ml. 3.药物防治:于病毒感染前一天开始口饲给药,每天两次,每次0.5ml,直