探索性医学综合实验

1、探索性医学综合实验课 程 论 文（04针灸推拿英语专业）论文题目 探索药食配伍对高血脂大鼠的预防研究 作者姓名 奚贇虎 谢龙 方瑜 钮成迪 韩诗彦 指导老师姓名 黄 品 贤 2008年7月4日探索药食配伍对高血脂大鼠的预防研究04针灸推拿英语专业 【摘要】目的：寻找天然食物和中药间的最佳配伍对高血脂大鼠的预防作用。方法：将34只大鼠随机分为正常组、模型组和L8（27）正交试验组，以测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL-c）、高密度脂蛋白（HDL-c）等血清学指标，探索对高血脂大鼠具有预防作用的最佳药食配伍。结果：1.模型组与正常组的血清总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度

2、脂蛋白、肝重系数等指标比较，两组间有统计学意义（P<0.01）；2.正交试验大鼠的血清甘油三酯显著低于模型组 (P<0.01)，其余指标均无统计学差异；3.正交试验得出对高血脂大鼠预防作用的最佳配伍为泽泻24g，山楂36g，菊花36g，大枣24枚。结论：药食配伍具有降低高血脂大鼠血清甘油三酯的作用。【关键词】药食配伍，高脂血症大鼠，动物试验，正交设计目前，高脂血症已成为威胁人类健康的一个重要因素，随着人们生活水平的不断提高，高脂血症的发病率正日益增高。如何预防和治疗高脂血症已成为全世界共同关心的问题。然而目前西医临床上所应用的他汀类、贝特类降血脂药物大多有肝、肾损害的毒副作用。因此

3、，寻找无毒副作用的天然食物和某些中草药间的最佳配伍来预防高血脂，对防治心、脑血管疾病具有非常重要的意义。搜索大量文献后，发现已有一些作者对此课题作过相关研究，但大多局限于单味药的功效或治疗已发生的高血脂，而对于复方的配伍和预防作用则是少之又少。经查阅，发现前人已通过实验证明中药中的泽泻、山楂、菊花、大枣等有降血脂作用。本次试验旨在众多研究者实验研究的基础上，采用正交试验设计寻找泽泻、山楂、菊花、大枣等药食两用品的最佳配伍，应用于人们的日常生活，使预防高血脂及心脑血管疾病更加安全、简便、有效。1 材料与方法1.1试验动物 标准SD大鼠34只，6周龄，雄性，体重180200g，饲养温度：20，光照

4、：白天12h，晚上12h，昼夜交替，自由饮水、饮食。由上海中医药大学动物实验中心提供。1.2试验药物 采用L8（27）正交设计表，其降血脂中药的因素与水平见下表1。山楂、泽泻、菊花、大枣的水煎液，其干燥饮片购于上海养和堂药业连锁有限公司北蔡店。分别按照不同的药物配伍比，按照传统中药煎法，得到药物浓度各不相同的药液8瓶。具体配方如下：表1 降血脂中药的因素与水平因素水平A因素泽泻（g）B因素山楂（g）C因素菊花（g）D因素大枣（枚）12436127248723624药液1：泽泻24g，山楂36g，菊花12g，大枣7枚；药液2：泽泻24g，山楂36g，菊花36g，大枣24枚；药液3：泽泻24g，山

5、楂72g，菊花12g，大枣24枚；药液4：泽泻24g，山楂72g，菊花36g，大枣7枚；药液5：泽泻48g，山楂36g，菊花12g，大枣24枚；药液6：泽泻48g，山楂36g，菊花36g，大枣7枚；药液7：泽泻48g，山楂72g，菊花12g，大枣7枚；药液8：泽泻48g，山楂72g，菊花36g，大枣24枚。此配方中各药比例根据所查文献自拟而成，按传统中药煎法煎得每组300ml，各药的剂量已根据成人与大鼠0.018的比例换算。1.3分组与造模 将34只大鼠适应性喂养3天后，运用随机数字表，根据动物体重随机分为10组。正常组5只，喂食基础饲料；模型组5只，喂食高脂饲料。参与L8（27）正交试验的8

6、组，每组3只，喂食高脂饲料。饲料喂食9天后，8组正交试验组大鼠进行灌胃，给予相应浓度的中药药液。灌胃量为：每只大鼠相应药液2ml/天，于下午灌胃，每周6天，共45天。1.4饲料 基础饲料：由上海中医药大学动物实验中心提供。高脂饲料：含基础饲料78.8%、猪油10%、蛋黄粉10%、胆固醇1%，胆盐0.2%，由上海中医药大学动物实验中心提供。1.5检测指标 每2周称重1次，给药后的第46天，末次称重后，用10%水合氯醛以0.33ml/100g的剂量腹腔注射麻醉后，打开腹腔，腹主动脉取血8ml，经2500转/分离心后取血清，样本由上海中医药大学附属曙光东院检验科检验，测血清总胆固醇（TC）、甘油三酯

7、（TG）、低密度脂蛋白（LDL-c）；并取肝脏，称重。1.6统计方法 资料经Excel整理后，采用SPSS15.0统计分析。1.所有的统计检验均用双侧检验，凡P值小于或等于0.05被认为所检验的差别有统计意义。2.计量资料：如正态分布资料，采用均数±标准差进行统计描述；非正态分布资料，采用中位数和最小值±最大值描述。组间比较：如数据符合正态分布，方差齐，则采用t检验、方差分析和LSD检验，方差不齐则采用校正t检验（t检验）或Dunnetts T3检验；不符合正态分布者采用Kruskal-Wallis H非参数统计和Mann-Whitney U检验。3.重复测量数据首先进行球

8、形检验，根据球形检验结果然后选择重复测量的方差分析结果。2 结果2.1正常组与模型组的血脂指标比较 模型组与正常组比较有统计学意义，模型组总胆固醇显著高于正常组（P<0.05）；模型组的低密度脂蛋白、肝重、肝重/体重比和高密度脂蛋白也显著高于正常组（P<0.01），甘油三酯两组间比较无统计学意义。具体结果见表2。表2 正常组与模型组的血脂指标比较（）组别n总胆固醇低密度脂蛋白甘油三酯肝重肝重/体重高密度脂蛋白（mmol/L）（mmol/L）（mmol/L）（g）（mmol/L）正常组51.50±0.120.22±0.021.22±0.220.53

9、77;0.080.13±0.010.61±0.04模型组52.26±0.39*0.87±0.16*1.48±0.320.75±0.10*0.17±0.01*0.43±0.07*合计101.88±0.480.55±0.361.35±0.290.64±0.140.15±0.020.52±0.11 备注：*与正常组比较P<0.05，*P<0.01。2.2正常组与模型组在不同时间的体重变化 球形检验P<0.05，故选择greenhouse-Gei

10、sser检验结果。不同时间比较P=0.000，正常组与模型组比较无统计学差异。结果见表3和图1。表3 正常组与模型组在不同时间的体重变化比较（）组别n第1天体重（g）第14天体重（g）第28天体重（g）第45天体重（g）正常组5185.80±14.62249.40±17.97332.00±17.54411.60±18.89模型组5186.80±12.76259.60±23.64342.60±34.87445.60±45.42合计10186.30±12.94254.50±20.51337.30&#

11、177;26.61428.60±37.37图1正常组与模型组不同时间体重变化比较2.3正常组与模型组的肝脏肉眼观比较 见图2，图中间为模型组肝脏，周围是正常组肝脏，模型组肝脏颜色和大小明显差异与正常组。图2 正常组与模型组的肝脏肉眼观比较2.4正常组、模型组与正交设计试验动物血清总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯的比较表4 三组血清指标的比较血清指标组别nFP总胆固醇正常组51.50±0.125.8160.007模型组52.26±0.39*试验组242.18±0.46*合计342.09±0.48甘油三酯正常组51.22±0.228.14

12、10.001模型组51.48±0.32试验组240.94±0.30#合计341.06±0.35低密度脂蛋白正常组50.22±0.022=12.4740.002模型组50.87±0.16*试验组240.90±0.29*合计340.79±0.35高密度脂蛋白正常组50.61±0.0412.2010.000模型组50.43±0.07*试验组240.43±0.07*合计340.45±0.09肝重正常组50.53±0.0812.0010.000模型组50.75±0.10*试验

13、组240.76±0.10*合计340.72±0.12肝重系数正常组50.13±0.0122.5530.000模型组50.17±0.01*试验组240.17±0.01*合计340.17±0.02备注：三种血清指标服从正态分布，且总体方差齐（除低密度脂蛋白正交试验组）。*表示与正常组比较P<0.01；#表示与模型组比较P<0.01。2.5正常组、模型组与正交设计试验动物不同时间体重的变化 经球形检验检验和重复测量数据的方差分析得出不同组别间无差异，同一组不同时间之间有统计学差异。表5 正常组、模型组与正交设计试验动物不同时间体

14、重的变化组别n第1天第14天第28天第45天正常组5185.80±14.62249.40±17.97332.00±17.54411.60±18.89模型组5186.80±12.76259.60±23.64342.60±34.87445.60±45.42正交试验组24185.58±5.09254.00±15.30335.75±27.24431.50±33.05合计34185.79±7.99254.15±16.67336.21±26.66430.65

15、±33.83图3 三组高血脂大鼠不同时间体重的变化2.6药食对高血脂大鼠肝重、肝重系数影响的试验结果 均无统计学意义，结果见表6 和图4。表6药食对高血脂大鼠肝重、肝重系数影响的试验结果试验号肝重（g）肝重系数X1X2X3均数X1X2X3均数10.800.850.800.820.180.190.180.1820.800.800.800.800.180.200.190.1930.650.550.800.670.180.150.170.1640.650.950.750.780.150.190.170.1750.800.800.600.730.180.190.150.1760.800.90

16、0.800.830.180.190.190.1970.700.800.650.720.170.170.150.1680.650.800.700.720.170.180.170.17图6 肝重正交试验方差分析结果图4 肝重和肝重系数正交试验方差分析结果2.7药食干预对高血脂大鼠低密度脂蛋白、总胆固醇和高密度脂蛋白影响的试验结果 均无统计学意义，结果见表7和图5、图6和图7。表7 药食对高血脂大鼠低密度脂蛋白、总胆固醇和高密度脂蛋白影响的试验结果试验号低密度脂蛋白（mmol/L）总胆固醇（mmol/L）高密度脂蛋白（mmol/L）X1X2X3均数X1X2X3均数X1X2X3均数10.620.650

17、.640.641.751.681.831.750.470.40.580.4820.560.830.590.661.772.041.561.790.520.38-0.4530.661.41.021.031.983.002.142.370.50.460.430.4641.221.380.941.182.842.492.722.680.490.510.360.4550.60.740.880.742.042.322.442.270.360.40.280.3560.710.751.040.832.772.192.382.450.40.510.330.4170.960.710.940.942.192.12

18、2.392.230.450.460.380.4380.950.630.730.772.281.771.841.960.430.440.430.43图5 低密度脂蛋白正交实验方差分析结果图6 总胆固醇正交实验方差分析结果图7 高密度脂蛋白正交试验方差分析结果2.8药食干预对高血脂大鼠甘油三酯影响的试验结果 检验结果表明：因素B：F=287.614，P=0.037；A×B间F=502.921，P=0.028；A×C间F=224.014，P=0.042，均有统计学意义，A因素、B因素、交互作用A×C为影响高血脂大鼠甘油三酯的重要因素。本研究甘油三酯越低越好，因此，A因素

19、一水平、B因素一水平、交互作用A×C二水平搭配时高血脂大鼠甘油三酯影响的合计值最小，故取A1B1C2。由于因素C：F=132.227，P=0.055；因素D：F=95.681，P=0.065对高血脂大鼠甘油三酯的影响无统计学意义，可以任选其中一个水平，但由于P值十分接近0.05，考虑到可能由于样本含量过少检验效能低而导致的无差异，从极差考虑应选D2。因此，药食对高血脂大鼠甘油三酯影响的最优条件是A1B1C2D2。从原始数据上看确实A1B1C2D2的甘油三酯的合计值为最小。结果见表8和表9。表8 药食对高血脂大鼠甘油三酯（mmol/L）影响的试验结果试验号1234567甘油三酯（mmo

20、l/L）ABA×BCA×CDX1X2X3合计111111110.970.770.832.57211122220.740.560.651.3312211220.660.570.842.07412222120.620.591.072.28521212110.890.931.142.96621221211.011.220.672.9722112211.031.361.173.56822121121.721.381.114.218.229.7311.6411.1611.7512.0211.9913.6312.1210.2110.6910.19.839.86R-5.41-2.391.

21、430.471.652.192.13表9 正交试验设计方差分析表变异来源SSdfMSFP总变异7.4968A间0.00610.00631.6960.112B间0.05810.058287.6140.037C间0.02610.026132.2270.055D间0.01910.01995.6810.065A×B间0.10110.101502.9210.028A×C间0.04510.045224.0140.042误差0.00010.0003 讨论3.1通过正常组与模型组的血脂指标比较，模型组大鼠的总胆固醇显著高于正常组（P<0.05）；模型组的低密度脂蛋白也显著高于正常组（

22、P<0.01），甘油三酯两组间比较无统计学意义，说明高血脂大鼠模型制造成功。观察正常组与模型组在不同时间的体重变化可见，正常组与模型组比较无统计学差异，但组内随着时间的增长，大鼠体重随之增重，符合生理常识。正常组与模型组的肝脏肉眼观比较可见，模型组肝脏明显有异于正常组，外观呈均匀性增大，边缘钝而厚，表面光滑，质如面团，有油腻感。综合以上三点，说明此次试验造模成功。3.2通过试验后的数据统计分析，此次试验的药食配伍对于甘油三酯的降低有显著疗效，但对于血清总胆固醇、低密度脂蛋白及高密度脂蛋白无统计学意义。通过SPSS软件的帮助，得到此次试验的最佳药食配伍结构，即泽泻24g，山楂36g，菊花3

23、6g，大枣24枚。3.3泽泻含生物碱、泽泻醇、植物甾醇等，能降低胆固醇，预防冠心病的发生；山楂为蔷薇科植物，性酸甘微温，山楂主要成分为黄酮类、有机酸和三萜类等，可降低胆固醇、调节血脂、提高血清SOD活性、扩张血管、增加心肌收缩力和心输出量的作用；菊花含菊苷、腺嘌呤、氨基酸、黄酮等，能扩张周围血管，降低血压及血脂；大枣是鼠李科枣属植物枣树的果实，味甘性温，为百姓常用的食补用品，其含有黏液质、亚油酸都有降低血脂的作用。3.4 本次实验在参考赵迅霞的山楂精降脂片、康柏平的山楂菊花饮、张雅利的红枣汁、赵友林的大山楂丸、李晶的生山楂和泽泻、唐雪梅的加味泽泻饮等多人的实验结果时发现，他们对大鼠或家兔的血脂

24、降低均有明显影响，能够显著降低大鼠或家兔血清中TC、TG、低密度脂蛋白，升高高密度脂蛋白，与我组试验结果不吻合，其原因可能是（1）样本含量小导致的检验效能偏低。（2）中药服用方法不同引起的差异。（3）自由采食导致的摄入的高脂饲料有较大差异。3.5存在问题3.5.1因经费不足等客观条件限制，导致实验装备不够完备不够精密，对实验有一定影响 3.5.2所有药物均为一次性煎煮，保存于冰箱，未考虑到药物长期保存于冰箱对其药性的影响3.5.3由于时间限制，未能进行预试验，因此对高脂饲料的作用大小未能作出量的估算，导致中药的药效无法与之抗衡，而使结果不明显。3.5.4因为上课、见习等不可避免因素，每天灌胃的

25、时间有差异，对实验有一定的影响。3.5.5实验过程中,因诸多因素限制，采用自由饮食，多只同笼饲养，定期的体重测定显示个体差异较明显，例如第3组32号实验鼠因数次打架导致出血，最后检测显示体重明显轻与同组其他老鼠。3.5.6个别老鼠在每次灌胃时出现剧烈的呕吐动作，无法继续灌胃动作，导致灌胃量不足，影响实验结果。(实验记录本有详细记录)3.5.7在最后取血阶段，明显发现模型组和正常组的肝脏颜色不同，怀疑模型组为脂肪肝，但由于经费问题没有进行病理切片，难以进一步研究。3.6本次的实验研究，在成功建立的高血脂、高胆固醇的大鼠试验模型上，观察了适当配伍的上述中药药液对其血脂的影响，实验结果表明，虽然由于

26、实验本身的一些问题造成大鼠血清中TC、TG的降低未能取得预期效果，但依然显示适当配伍的中药药液能显著降低大鼠的血清甘油三酯，证明其可以在一定程度上预防高脂血症的发生，进而可能减少动脉粥样硬化的发病几率，是一种安全有效价廉的血脂调节药。今后可能考虑进一步加工后向社会推广使用。致谢：感谢学校各级领导对学生的关心和支持；感谢教学实验中心开设了这门有意义的课程，并提供了经费。感谢为这门课程精心准备讲座的老师们。特别鸣谢：预防教研室黄品贤老师的全程指导； 教学实验中心的尤银珍老师，陈圣敏老师对于实验场地、器材的鼎力帮助； 动物实验中心的各位老师在动物饲养过程中的帮助； 上海中医药大学附属曙光医院东院检验科对大鼠血液指标的检验； 为我们的探索实验做出牺牲的大鼠们。参考文献1杨绍基.高脂血症与肝脏疾病（J）.新医学，2001，31（1）：10