微生物实验-培养基配制和灭菌-new100

1、微生物实验：培养基的配制和高压灭菌生物教研室 朱超锋实验目的 了解配制培养基的基本原理，掌握配制的一般方法与步骤 学习掌握高压蒸汽灭菌的操作方法 学习掌握微生物实验相应的规范操作实验原理 由人工配制适合微生物生长繁殖和积累代谢产物的混合养料称为培养基。含有碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等物质。 按物理状态可分为液体、半固体和固体三类。 加热密封锅体内的水，让水蒸气压力升高，提高锅内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。实验试剂 牛肉膏蛋白胨固体培养基（1000mL）： 牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15-20g， pH7.4-7.6 高氏一号固体培养基（1000mL）： 可溶

2、性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO43H2O 0.5g，MgSO47H2O 0.5g，FeSO47H2O 0.01g，琼脂15-20g，pH7.4-7.6实验器皿 平皿、三角瓶、试管、简易分装装置 灭菌锅（手动、自动）、超净工作台实验统筹安排4人为1中组完成后每人：1根斜面试管(牛肉膏蛋白胨) 2个平板平皿(牛肉膏蛋白胨、高氏一号各1)250mL200mL实验流程S1-玻璃仪器的准备干燥包扎高压灭菌干燥待用做棉塞待用待用清点清洗 平 皿 三角瓶 试 管S2-配制培养基S2-分装培养基250mL200mLS3-摆斜面、倒平板250mL200mLS4-清洁卫生相应实验操作

3、讲解 棉塞、分装套的制作 平皿/三角瓶/试管包扎 高压灭菌 摆斜面、倒平板棉塞、分装套的制作准备材料：纱布、棉花P1.棉塞制作将纱布覆盖在三角瓶上，在瓶口处用力往下塞棉花用绳子将上端绑紧，并剪去多余纱布，放置待用P2.分装套的制作准备材料：漏斗、乳胶管、止水夹、玻璃滴头将各部分连接起来即成简易分装装置P1.平皿包扎P2.三角瓶包扎将干燥好的平皿，以10个为一叠，如图用报纸包捆一边卷动平皿，一边将两边的报纸折叠，如图所示最后将纸角嵌入报纸内部以固定平皿/三角瓶/试管包扎装好培养基后，塞上前面做好的棉塞覆上一张牛皮纸将棉线的线头朝上，并用大拇指压住棉线绕过拇指，沿瓶口下方绕一圈，但不回绕拇指反复缠

4、绕后棉线穿入拇指留出的空圈,线头保留在圈外抽动一开始压住的线头，将棉线捆紧，完成捆绑P3.试管包扎将几根试管握成一捆用一张牛皮纸将试管上端缠绕包裹起来将上端牛皮纸反折下来，用前述捆扎方法捆扎起来高压灭菌取出装料桶，往锅内加水至指定刻度P1.加水P2.装料将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品P3.加盖盖上并旋紧盖子，并关闭排气阀P4.排冷空气 MPa010811512112613513800.050.10.150.20.25压力表开启电源，锅内温度压力上升压力上升至0.05MPa,开启排气阀,让压力降至0关闭排气阀，继续加热，让温度压力上升P5.升压P6.保压开关排气阀门，让温度在121保持20-30minP7.降压达规定时间后,关闭电源,让锅内压力下降至0P8.开锅取料摆斜面、倒平板P1.摆斜面将灭菌好的试管如图放置，凝固后即成斜面P2.倒平板超净工作台内，用75%酒精擦拭双手，进行消毒单手操作将灭菌好的平皿打开一条小缝另外一只手拿起三角瓶靠近火焰，将三角瓶的培养基，倾倒入平皿倒入量为15-20mL，2-3mm高15-20mL，2-3mm高思考题 为什么灭菌