橄榄油紫外分光光度检测法

1、COI/T20/Doc. no. 19/Rev. 3 2010油脂紫外分光光度检测法前言紫外吸光度的检测能反应油脂的品质，加工过程会引起油脂吸光度的变化。由于油脂中的某些成分存在共轭双键和三键结构，所以会在特定波长下有紫外吸收。吸收度用E 表示( 1 g 油脂溶解于 100 mL 溶剂，比色皿光径为1 cm )。一般情况下也用 K（消光系数）表示。1. 范围本标准规定了动植物油脂紫外吸光度测定的方法。2. 原理将油脂溶解在所需溶剂中，以此溶剂为参比液，测定样品在特定波长下的吸光度。记录分光光度计的读数并计算样品的吸光度。3. 仪器3.1 分光光度计，可读取 220 nm 360 nm 波长。3

2、.2 1 cm 光径石英比色皿。3.3 25 mL 容量瓶。4. 试剂4.1 分析纯异辛烷（2,2,4-三甲基戊烷），以蒸馏水为参比溶液，在 220 nm 处的透光率不低于 60%，在 250 nm 处不低于 95%。或者用分析纯环己烷，以蒸馏水为参比溶液，在 220 nm 处的透光率不低于40%，在 250 nm 处不低于95%。或者用其它能完全溶解油脂的溶剂。5. 测定步骤5.1 待测样品必须完全混匀并且无悬浮物。若油脂在室温下是液态的，则需在30左右用滤纸过滤。固体脂肪在高于溶点温度10以内均质化并用滤纸过滤。5.2 精确称量 0.25 g 样品，置于 25 mL 容量瓶内，用溶剂（异辛

3、烷或环己烷）溶解样品，并稀释至刻度。该溶液必须清澈，如有乳光或浑浊现象必须立即用滤纸过滤。5.3 将待测溶液倒入石英比色皿，用溶剂做参比，使用分光光度计测定在 232 nm 276 nm 波长范围的吸光度，吸光度必须在0.10.8之间，否则应适当加大样品浓度或进行稀释重新测定。5.4 如果吸光度测定之前油脂需要过氧化铝柱，则按以下步骤处理：30 g 碱性氧化铝用己烷溶成悬浮状，装层析柱。待氧化铝压实之后将多余的己烷吸出，使液面高于氧化铝约 1 cm。溶解 10 g油脂于 100 mL己烷，按 5.1 均质化并过滤，然后倒入层析柱。收集洗脱液，在低于25下真空减压浓缩至无溶剂。然后立即按5.2步

4、骤处理得到的油脂样品。5.5 如溶剂使用异辛烷则最大吸收波长为 268 nm，如使用环己烷则最大吸收波长为 270 nm。6. 结果计算6.1 记录相应波长下的吸光度，按下式计算：式中：K：波长下的吸光度（以浓度1 g/100 mL，1 cm 比色皿波长测得吸光度表示）；E：波长下测得的试样吸光度；C：试样溶液中样品的浓度，单位为 g/100 mL；S：比色皿光径，单位为 cm。结果应保留两位小数点。6.2 橄榄油的吸光度测定方法与欧盟规定的官方方法一致，涉及到用异辛烷做溶液检测 232 nm 和 270 nm 波长下的吸光度，并且需测定吸光度的变异值（K），按下式检测：Km是波长m下的吸光度

5、，最大吸收波长在 270 nm 附近。注：如溶液用异辛烷则最大吸收波长为 268 nm 和 232 nm，如溶液用环己烷，则最大吸收波长为 270 nm和 232 nm。附录分光光度计的校正A.2. 仪器必须六个月校验一次，包括波长响应值和响应值的准确性。A.2.1. 波长校验可以用汞灯或使用合适的滤光片进行。A.2.2. 光电管和光电倍增管响应值的校验按以下步骤进行：称 0.2000 g分析纯铬酸钾溶于 0.05 mol/L 的氢氧化钾溶液中，定溶至 1000 mL。取上述溶液 25 mL于 500 mL 容量瓶中，用 0.05 mol/L 的氢氧化钾溶液稀释至刻度。用 0.05 mol/L

6、 的氢氧化钾溶液作为参比溶液，1 cm 光径比色皿，测定此溶液在 275 nm处的吸光度，应该为 0.2000.005。方法精密度2009年，来自13个国家的21个拥有IOC认证的实验室参加了这次由执行秘书处实施的合作检测。共检测了五个样品：A: 特级初榨橄榄油 B: 二次离心橄榄油 C: 精炼油橄榄果渣油 D: 初榨橄榄油+菜籽油+高油酸葵花籽油E: 初榨橄榄油+精炼大豆油 测试结果见下表（）表A.1 232 nm处的紫外吸收（异辛烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2122222222可接受数量2018182117均值1.762.103.813.852.82重复性标准偏差Sr0.02590.

7、01260.01550.03590.0193重复性变异系数CV（r），%1.470.600.410.930.69重复性限r0.0730.0350.0430.1010.054再现性标准偏差SR0.07730.06920.1740.21080.0694再现性变异系数CV（R），%4.383.294.585.482.46再现性限R0.2160.1940.4880.5900.194表A.2 232nm处的紫外吸收（环己烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2121212121可接受数量1820202121均值1.762.123.833.862.79重复性标准偏差Sr0.02500.02160.04230.

8、04050.0322重复性变异系数CV（r），%1.421.021.111.051.19重复性限r0.0700.0600.1190.1130.093再现性标准偏差SR0.04930.07300.15130.13780.0996再现性变异系数CV（R），%2.813.443.953.573.57再现性限R0.1380.2040.4240.3860.279表A.3 268 nm处的紫外吸收（异辛烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2122222222可接受数量2018201720均值0.120.431.140.450.60重复性标准偏差Sr0.00490.00500.01550.00660.0066

9、重复性变异系数CV(r)，%3.961.171.361.461.10重复性限r0.0140.0140.0430.0180.019再现性标准偏差SR0.00990.01590.02960.01340.0335再现性变异系数CV（R），%8.003.752.592.985.56再现性限R0.0280.0450.0830.0380.094表A.4 270 nm处的紫外吸收（环己烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2121212121可接受数量2019202017均值0.130.431.120.450.59重复性标准偏差Sr0.00520.00830.01030.01180.0064重复性变异系数CV（

10、r），%4.021.930.922.631.08重复性限r0.0140.0230.02890.0330.018再现性标准偏差SR0.01090.01570.02650.01440.0148再现性变异系数CV（R），%8.513.662.373.202.52再现性限R0.0310.0440.0740.0400.042表A.5 2704 nm 处的紫外吸收变异值K（环己烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2021212121可接受数量1920192018均值-0.0020.0020.0850.0350.047重复性标准偏差Sr0.00060.00050.00090.00100.0014重复性变异系数

11、CV（r），%28.9021.611.092.862.90重复性限r0.00160.00150.00260.00280.0038再现性标准偏差SR0.00290.00130.00430.00260.0038再现性变异系数CV（R），%147.5151.975.067.588.13再现性限R0.00800.00360.01210.00680.0106表A.6 2684 nm处的紫外吸收变异值K（异辛烷为溶液）项目ABCDE实验室数量2121222222可接受数量2118212020均值-0.0020.0000.0820.0310.042重复性标准偏差Sr0.00090.00050.00190.0

12、0140.0007重复性变异系数CV（r），%36.44121.082.274.381.65重复性限r0.00250.00140.00520.00380.0020再现性标准偏差SR0.00360.00100.00820.00390.0045再现性变异系数CV（R），%148.18234.7710.0012.6310.63再现性限R0.01010.00270.02290.01100.0126参考文献ISO 5725-1: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Part 1: Genera

13、l principles and definitionsISO 5725-2: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Part 2: Basic method for the determination of the repeatability and reproducibility of a standard measurement methodISO 5725-5: 1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results Part 5: Alternative