植生、生化实验解读北大吴光耀

1、2011植生、生化实验解读课吴光耀 教授 1.蛋白质测定(1) 总N量测定 有机N(甘氨酸) + H2SO4 2CO2 + 3SO2 + 4H2O + NH3 (NH4) 2SO4 + 2NaOH 2H2O + Na2SO4 + 2NH3 NH4HB4O7+ HCl + 5H2O NH4Cl + 4H3BO3 用酸滴定氨1.蛋白质测定(2) 双缩脲法 测两个以上的肽键 碱性环境双缩脲与Cu+生成紫红色化合物 540nm (NH2) 2CO 2 NH2-CO-NH-CO-NH2+NH31.蛋白质测定(3) Folin-酚法 是改进的双缩脲法 640nm同时测定了酪氨酸酚基。1.蛋白质测定(4)

2、紫外法 280nm 比色1.蛋白质测定(5) 考马斯亮蓝法 考马斯蓝G-250可与蛋白结合, 从红色染料转变成蓝色。 595nm 测定吸收值2. 核酸测定(1) RNA 测定地衣酚法 RNA + HCl 糠醛(核糖转变) 糠醛 + 3,5-二羟基甲苯(地衣酚) 鲜绿色 670nm比色2. 核酸测定(2) DNA 测定 二苯胺法 DNA + 冰乙酸 羟酮基戊醛(脱氧核糖转化) 羟酮基戊醛 + 二苯胺 蓝色 595nm 比色2. 核酸测定(3) 定磷法 有机磷 + 高氯酸 无机磷 无机磷 + 磷钼酸钼蓝 660nm 比色2. 核酸测定(4) 紫外法 260nm 比色3. 质粒DNA提取和测定(1)

3、 扩增质粒 LB + 氨苄青霉素(2) 细菌裂解 +碱 (质粒DNA出来, 染色体DNA变性)(3) 沉淀蛋白 +乙酸钾、酚-氯仿(4) 纯化质粒DNA 水相质粒DNA用乙醇沉淀 + RNase 溶于Tris缓冲液中(5) 260nm测定, 或电泳测定4. DNA平板电泳(1) 制胶 Tris-硼酸缓冲液(TBE) + 1%琼脂糖(2) 加液 TBE液(3) 加样 样品 + 花青素(4) 电泳 滤光板看DNA移动过程5. PCR (Polymerase chain reaction) - DNA扩增(1) 模板、引物、dNTP、聚合酶、缓冲液、Mg+(2) 过程: 模板双链分开 结合引物 新链

4、合成(3) 可用毛囊DNA Y染色体DNA, 设计引物,PCR, 男有女无.播放动画6. 层析(1) 分配层析 纸层析、液相层析(2) 吸附层析 活性碳、氧化铝(3) 交换层析 离子交换剂(4) 凝胶层析 Sephadex Sepharose Superdex7. 糖的测定(1) 萘酚反应 糖 + 酸 糠醛 +萘酚紫环反应(2) 蒽酮反应 糖 + 蒽酮+硫酸兰绿色7. 糖的测定(3) 间苯二酚反应 酮糖 + 酸 羟甲基糠醛 +间苯二酚 鲜红色(4) 甲基间苯二酚反应 戊糖 + 酸 糠醛 +地衣酚 兰色沉淀 己糖 - 褐色沉淀8. 还原糖测定(有自由醛基)(1) 费林反应 葡萄糖 + Cu(OH

5、) 2+ NaOH 氧化亚酮 红黄色9. 叶绿素性质双羧酸的酯 酯溶性. 非极性溶剂(正己烷、石油醚)荧光+HCl 去镁叶绿素 +乙酸铜铜代叶绿素+NaOH 皂化10. 线粒体氧化磷酸化磷氧比(P/O): 这一电子传递链过程中, 形成ATP的量与消耗氧分子之间的比为磷氧比11. 希尔用离心机分离了菠菜叶绿体, 他在分离叶绿体中加入氧化态的氧化还原剂-2,6二氯靛酚(DCIP) 后照光, 发现DCIP被还原(氧化态兰色, 还原态无色), 并有氧的释放 。回答问题:(1)你认为分离叶绿体要下述哪些条件A. 一定pH的缓冲液B. 溶液有一定的渗透势C. 离心分离的叶绿体用水悬浮D. 离心时,离心速度

6、愈高愈好E. 在摄氏4度操作和离心最好F. 在室温操作最好回答问题:(1)你认为分离叶绿体要下述哪些条件A. 一定pH的缓冲液B. 溶液有一定的渗透势C. 离心分离的叶绿体用水悬浮D. 离心时,离心速度愈高愈好E. 在摄氏4度操作和离心最好F. 在室温操作最好回答问题:(2) 你认为这一实验证明了什么?光反应产生氧 B. CO2被还原C. 光反应产生还原剂 D. 水被光解回答问题:(2) 你认为这一实验证明了什么?光反应产生氧 B. CO2被还原C. 光反应产生还原剂 D. 水被光解希尔进一步实验, 他将分离叶绿体悬液破碎, 离心, 分成绿色的沉淀和无色的上清液两部分, 沉淀再用缓冲液悬浮。发

7、现绿色部分照光可放氧, 如将两部分在暗处混合, 加入14CO2, 一定时间后,则14C被标记在六碳糖上。 回答问题: (1) 上述进一步实验说明什么?A. 光合作用可分为需光和不需光两部分B. CO2固定是不需光的C. 氧的释放要光D. 水的氧化要光E. 水的还原要光F. 光产生还原剂G. 还原剂用于CO2还原H. 光通过叶绿体起作用I. 六碳糖可氧化产生CO2回答问题: (1) 上述进一步实验说明什么?A. 光合作用可分为需光和不需光两部分B. CO2固定是不需光的C. 氧的释放要光D. 水的氧化要光E. 水的还原要光F. 光产生还原剂G. 还原剂用于CO2还原H. 光通过叶绿体起作用I.

8、六碳糖可氧化产生CO2回答问题:(2) 实验中能否用NaH14CO3代替14CO2A. 不能 B. 能回答问题:(2) 实验中能否用NaH14CO3代替14CO2A. 不能 B. 能单选题1、这是Stitt研究果糖1，6-双磷酸酯酶（F1，6Pase）被调节的一个实验结果，图中表明在磷酸二羟丙酮（DHAP）增加时，1，6一二磷酸果糖（F1，6P）和2，6一二磷酸果糖（F2，6P）对F1，6Pase的影响，你能得出如下结论：F2，6P调节F1，6Pase活性F1，6P调节F1，6Pase活性F1，6P和F2，6P都调节F1， 6Pase活性F1，6P和F2，6P都不调节 F1，6Pase活性单选

9、题1、这是Stitt研究果糖1，6-双磷酸酯酶（F1，6Pase）被调节的一个实验结果，图中表明在磷酸二羟丙酮（DHAP）增加时，1，6一二磷酸果糖（F1，6P）和2，6一二磷酸果糖（F2，6P）对F1，6Pase的影响，你能得出如下结论：F2，6P调节F1，6Pase活性F1，6P调节F1，6Pase活性F1，6P和F2，6P都调节F1， 6Pase活性F1，6P和F2，6P都不调节 F1，6Pase活性单选题在研究C4植物蔗糖合成时，测得如下结果：蔗糖是高等植物生长发育中主要运输物质，它由尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）和FP首先形成磷酸蔗糖，也可由UDPG与果糖形成蔗糖。你再由光合碳代谢的知

10、识，得出如下结论：蔗糖只在叶肉细胞中合成 蔗糖只在维管束鞘细胞中合成蔗糖在两类细胞中都能合成 蔗糖不在两类细胞中合成单选题在研究C4植物蔗糖合成时，测得如下结果：蔗糖是高等植物生长发育中主要运输物质，它由尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）和FP首先形成磷酸蔗糖，也可由UDPG与果糖形成蔗糖。你再由光合碳代谢的知识，得出如下结论：蔗糖只在叶肉细胞中合成 蔗糖只在维管束鞘细胞中合成蔗糖在两类细胞中都能合成 蔗糖不在两类细胞中合成单选题3、在黑暗萌发的芥菜叶子，在萌发60小时用红光诱导20分钟，在72小时时以全黑暗为对照，进行果糖双磷酸酯酶（FBPase）活性测定，结果如下：pH值果糖双磷酸酯酶活性 全黑

11、暗 光诱导 86 1.92 0.10 2.58 0.08 7.5 2.00 0.09 2.18 0.12在植物中有两种FBPase，一种在叶绿体内，一种在细胞质内，细胞质的酶在pH7.5-8.6之间有相同活性；而叶绿体内的酶只在pH8.6有最大活性，pH7.5时几乎无活性。你认为光诱导的是哪种FBPase。叶绿体的FBPase 细胞质的FBPase两者都被诱导 两者都没被诱导单选题3、在黑暗萌发的芥菜叶子，在萌发60小时用红光诱导20分钟，在72小时时以全黑暗为对照，进行果糖双磷酸酯酶（FBPase）活性测定，结果如下：在植物中有两种FBPase，一种在叶绿体内，一种在细胞质内，细胞质的酶在pH7.5-8.6之间有相同活性；而叶绿体内的酶只在pH8.6有最大活性，pH7.5时几乎无活性。你认为光诱导的是哪种FBPase。叶绿体的FBPase 细胞质的FBPase两者都被诱导 两者都没被诱导pH值果糖双磷酸酯酶活性 全黑暗 光诱导 86 1.92 0.10 2.58 0.0