临床微生物检验：厌氧菌课件

厌氧菌anaerobicbacteria广州医科大学金域检验学院临床微生物检验教研室厌氧菌anaerobicbacteria广州医科大学金掌握厌氧菌的种类、标本要求、实验室检查掌握常见厌氧芽孢梭菌的生物学特征重点重点在有氧环境中不能生长，无氧或低氧分压环境中才能生长一类细菌。（缺乏完善的酶系统，只能以无氧发酵进行能量代谢）概念在有氧环境中不能生长，无氧或低氧分压环境中才能生长一类细菌。

(1)革兰阳性有芽胞杆菌(梭状芽孢杆菌属）

破伤风芽孢杆菌产气荚膜梭状芽孢杆菌肉毒梭状芽孢杆菌艰难梭状芽孢杆菌

种类1、生物学分类(1)革兰阳性有芽胞杆菌(梭状芽孢杆菌属）种类1、生物学分(2)革兰阳性无芽胞杆菌（正常菌群）

乳酸杆菌、双歧杆菌、优杆菌属、丙酸杆菌属(3)革兰阴性无芽胞杆菌

类杆菌属、普雷沃菌属、卟啉单胞菌属、梭杆菌属(4)革兰阳性厌氧球菌消化球菌属、消化链球菌属(5)革兰阴性厌氧球菌韦荣球菌属种类1、生物学分类(2)革兰阳性无芽胞杆菌（正常菌群）种类1、生物学分类对氧极端敏感的厌氧菌：在0.5%的氧分压或在空气中暴露10mins即死亡的细菌。中度厌氧菌：能在2%--8%的氧分压环境中或空气暴露60mins—90mins或在脓液标本中72h还可以分离出来的细菌。耐氧厌氧菌：其耐氧程度刚好可以在刚配制出来的固体厌氧培养基上生长，一旦生长出来，在空气中暴露数小时仍不死亡的细菌。种类2、对氧的耐受程度种类2、对氧的耐受程度

部位

细菌总数

比率

(CFU/mlormg)

厌氧菌:需氧菌UpperAirway

鼻洗液

103-104 3-5:1

口水 108-109 1:1

牙齿表面 1010-1011 1:1

牙龈缝隙

1011-1012 1000:1

GastrointestinalTract

胃 102-105 1:1

小肠 102-104 1:1

回肠 104-107 1:1

结肠 1011-1012 1000:1

FemaleGenitalTract

子宫颈 108-109 3-5:1

阴道 108-109 3-5:1

部位感染普遍，以混合感染为主。内源性＞外源性，无芽胞厌氧菌＞芽胞厌氧菌临床意义临床意义发生内源性感染危险因素（条件）

1.局部组织血液供给障碍：局部缺氧

2.机体局部屏障作用破坏：组织氧张力↓

3.机体免疫功能↓

4.菌群失调

5.长期应用氨基糖苷类药物可诱发厌氧菌感染临床意义临床意义感染的临床及细菌学指征：1.局部产生气体2.发生在黏膜附近的感染3.深部外伤感染4.常规血培养阴性的心内膜炎，并发脓毒症血栓静脉炎等5.有恶臭的分泌物6.胃肠和生殖道手术后感染、流产后发生的感染7.其它：镜检有菌而培养阴性，或在液体及半固体培养基深部长的细菌等临床意义临床意义

临床标本肉眼观察分离培养增菌培养及直接镜检厌氧培养

2-7d确定厌养培养

需氧培养厌氧培养生长无生长生长

兼性厌氧菌专性厌氧菌保存菌种分类鉴定药物敏感试验形态与染色菌落特性生化反应药敏性鉴定气液相色谱厌氧菌的检验厌氧菌的检验原则：采集时注意不被正常菌群污染，尽量避免接触空气下列易污染标本不宜厌氧培养齿龈、咽喉拭子，痰液或气管吸出物（呼吸道），胃和肠道内容物或肛拭子、粪便（消化道），阴道或宫颈拭子（生殖道），中段尿或导尿液（泌尿道），皮肤表面或伤口边缘等标本不同部位标本采集法针筒抽取、穿刺术等标本采集标本采集1.针筒运送法：各种液体标本，简便易行2.无菌厌氧袋法：注射器、组织标本3.已排气不含氧的管或瓶（内含厌氧指示剂）：厌氧标本运送即送即检，避免标本干燥、接触空气和低温保存1.针筒运送法：各种液体标本，简便易行厌氧标本运送即

3）培养方法

厌氧罐培养法厌氧气袋培养法厌氧培养箱培养法厌氧菌培养厌氧罐培养法厌氧菌培养厌氧罐法－以物理或化学方法造成无氧环境美蓝指示剂（有氧蓝色、无氧无色）刃天青指示剂（有氧红色、无氧无色）抽气换气法：

10%H2、10%CO2、80%N2、钯粒冷触媒法：

钯粒硼氢化钾、碳酸氢钠、枸橼酸药片C2O+H2↑

H2O

O2厌氧菌培养厌氧罐法－以物理或化学方法造成无氧环境厌氧菌培养临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件

气袋法：

原理同上冷触媒法，简单方便。

气袋法：

原理同上冷触媒法，简单方便。厌氧手套箱：

比较好的厌氧菌培养设备

厌氧手套箱：

比较好的厌氧菌培养设备

临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件其他：

OxyplatesTM（氧净）厌氧培养皿－－可反复打开，Oxyrase酶系统能使培养基中O2去除，并产生CO2。

其他：

OxyplatesTM（氧净）厌氧培养皿－－可反复打1.初代培养：

1）培养基：新鲜、预还原

非选择性培养基：强化BAP(血、维生素、氯化血红素等),几乎所有厌氧菌均可生长。

选择培养基：KVLB、BBE、EYA、CCFA…

2）标本接种固体和液体培养基同时接种检验方法1.初代培养：检验方法检验方法2、结果观察

1）次代培养和厌氧菌再确定

检验方法2、结果观察ABC厌氧培养（初代培养）需氧培养厌氧培养次代培养ABC厌氧培养（初代培养）需氧培养厌氧培养次代培养

采集运送培养基厌氧环境时间等因素检验方法2、结果观察

2）厌氧菌培养失误的原因采集运送检验方法2、结果观察

形态与染色：

用24h内幼龄菌，多染色性，多形性菌落性状：

色素、溶血、荧光等生化试验：糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验等

抗生素敏感鉴定：

灭滴灵（厌氧菌S）、卡那霉素（梭杆S）、万古霉素等鉴定试验形态与染色：

用24h内幼龄菌，多染色性，多形性气液相色谱技术（GLC）厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂肪酸），过柱分析，定性定量。厌氧菌快速发酵试验：

利用厌氧菌产生的胞外酶与少量的生化基质迅速反应，4h内可观察到生化反应结果。无需厌氧环境，只需浓厌氧菌液即可。鉴定试验气液相色谱技术（GLC）鉴定试验药物敏感试验

考虑做厌氧菌体外药敏试验的临床情况：①明确厌氧菌引起的严重感染，②已确证厌氧菌感染而经验用药无效，③需长期用药的厌氧菌感染。

方法培养基接种浓度孵育时间优点琼脂稀释法布氏血琼脂105细胞／点48H可同时测多个菌株肉汤稀释法布氏心脑浸液106CFU／ML48H经济，可商品化E试验布氏血琼脂0.5麦氏比浊度

24－48HMIC精确ß内酰胺酶琼脂培养基单个菌落

30－50min经济快速检测对青霉素G和AMP的耐药耐药性：甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药药物敏感试验考虑做厌氧菌体外药敏试验的临床情况厌氧菌中唯一有芽孢菌属厌氧的粗大革兰阳性杆菌是目前细菌中最大的一个菌属广泛分布在自然界（以芽孢的形式）

梭状芽胞杆菌属厌氧菌中唯一有芽孢菌属梭状芽胞杆菌属

引起人类疾病的各种常见厌氧芽胞梭菌细菌名称

所致疾病破伤风梭菌破伤风产气荚膜梭菌气性坏疽、毒血症、坏死性肠炎、食物中毒等肉毒梭菌食物中毒、婴儿肉毒梭菌症、创伤肉毒症艰难梭菌抗生素相关性腹泻、抗生素相关性伪膜性肠炎引起人类疾病的各种常见厌氧芽胞梭菌破伤风梭菌破伤风梭菌无侵袭力，仅在局部繁殖，不入血致病因素--痉挛毒素（外毒素）临床症状--牙关紧闭，角弓反张等临床意义无侵袭力，仅在局部繁殖，不入血临床意义1.对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin)2.质粒编码的破伤风痉挛毒素(tetanospasmin)属神经毒(neurotoxin)，毒性极强(对人致死量<1µg)蛋白质（可脱毒成类毒素），不耐热：轻链（A链）-S-S-重链（B链）

B链：神经节苷脂结合的单位

A链：毒性作用致病因子1.对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin)致病下列情况易致破伤风梭菌感染伤口窄而深（如刺伤），有泥土或异物污染大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口临床意义下列情况易致破伤风梭菌感染临床意义

1.形态染色:

革兰阳性，芽胞圆形，比菌体大，位于菌体顶端呈鼓槌状，无荚膜，有鞭毛。

生物学性状生物学性状临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件专性厌氧，在血平板上有迁徙生长，菌落呈羽毛状。庖肉培养基轻度变浊，肉渣部分消化，微变黑，恶臭，产少量气体。培养特性专性厌氧，在血平板上有迁徙生长，菌落呈羽毛状。培养特性

不发酵分解糖类硝酸盐－

H2S＋明胶＋生化反应不发酵分解糖类生化反应芽胞耐热、耐干燥对青霉素、红霉素、四环素等敏感氨基糖苷类耐药。抵抗力芽胞耐热、耐干燥抵抗力

症状典型者，一般不作细菌检查。怀疑感染：直接涂片镜检

分离培养，鉴定鉴别微生物学检查

症状典型者，一般不作细菌检查。微生物学检查产气荚膜梭状芽孢杆菌产气荚膜梭状芽孢杆菌1.外毒素和侵袭性酶类－引起气性坏疽的临床表现

（水肿、皮下捻发音）

α毒素（卵磷脂毒素）产生量最大引起血管通透性增加伴大量溶血、组织坏死、肝脏、心功能受损在气性坏疽的形成中起主要作用β、γ、ε等其他毒素引起组织坏死、血管通透性增加、水肿、产气2.肠毒素－食物中毒（坏死性肠炎）。临床意义1.外毒素和侵袭性酶类－引起气性坏疽的临床表现

下列情况易导致产气荚膜梭菌感染：开放性骨折大块肌肉撕裂组织严重坏死下列情况易导致产气荚膜梭菌感染：临床微生物检验：厌氧菌课件

形态染色：革兰阳性粗短大杆菌，两端钝圆，芽胞圆形位于菌体中央或次极端，直径不大于菌体，但较少形成，有荚膜，无鞭毛。

生物学性状

形态染色：革兰阳性粗短大杆菌，两端钝圆，芽胞圆形位于菌体中

非严格厌氧，繁殖迅速

血平板上双层溶血环疱肉培养基中“汹涌发酵”。培养特性非严格厌氧，繁殖迅速培养特性

H2S＋，明胶＋，葡萄糖＋，乳糖＋，麦芽糖＋，蔗糖＋，卵磷脂酶＋

生化反应生化反应卵磷脂酶阳性卵磷脂酶阳性

微生物学检查法直接涂片镜检

深部创口取材涂片革兰阳性大杆菌白细胞少且不典型伴有其他杂菌早期诊断可避免病人最终截肢或死亡微生物学检查法直接涂片镜检

微生物学检查法分离培养及动物实验接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应鉴定动物实验如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大于105CFU/克食品或106CFU/克粪便可确立诊断微生物学检查法分离培养及动物实验肉毒梭菌肉毒梭菌1.形态染色：革兰阳性大杆菌,芽胞椭圆形位于菌体次极端,比菌体粗,呈网球拍状。无荚膜,有鞭毛。2.培养特性：普通培养基生长，血平板上β溶血环，庖肉培养基肉渣消化，变黑，恶臭。3.生化反应：H2S＋,明胶＋,葡萄糖＋,乳糖－,麦芽糖＋,吲哚－,卵磷脂酶－

生物学性状1.形态染色：革兰阳性大杆菌,芽胞椭圆形位于菌体次极端,比菌（二）临床意义肉毒毒素--毒性最强嗜神经性，使神经麻痹；食物中毒。剧毒（对人致死量为0.1µg)（三）微生物学检查

直接涂片镜检，分离培养，鉴定鉴别（二）临床意义艰难梭菌艰难梭菌（一）生物学性状：1.形态染色：革兰阳性大杆菌，芽胞椭圆形或长方形，位于菌体次极端，无荚膜，有鞭毛。2.培养特性：严格厌氧，血平板无溶血环，CCFA平板呈黄色菌落，在紫外灯下可见黄绿荧光。3.生化反应：H2S－,蔗糖－,葡萄糖＋,乳糖－,麦芽糖－,吲哚－,脂酶－

临床微生物检验：厌氧菌课件（二）临床意义正常菌群。医院感染的重要病原菌。产生A、B两种毒素，即肠毒素和细胞毒素，引起假膜性肠炎。（三）微生物学检查

直接涂片镜检，分离培养，鉴定鉴别临床微生物检验：厌氧菌课件艰难梭菌在CCFA平板上菌落（培养48h)艰难梭菌在CCFA平板上菌落（培养48h)ThankyouThankyou临床厌氧菌感染中最常见的病原菌一、类杆菌属

BBE平板上有黑色晕圈二、普雷沃菌属

KVLB出现黑色菌落三、卟啉单胞菌属四、梭杆菌属

革兰阴性无芽胞厌氧杆菌临床厌氧菌感染中最常见的病原菌革兰阴性无芽胞厌氧杆菌

革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌有6个属，几十个菌种，临床常见的有丙酸杆菌、优杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、蛛网菌和放线菌。它们多是人和动物皮肤、口腔、肠道等部位的重要生理菌群，在体内起到调节和维持人体微生态平衡的重要作用。它们的菌落、生化反应、菌体形态等都很相似，鉴定较难。应用气液相色谱法（GLC），根据其代谢产物不同，可对菌属做出初步判定。革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌有6个属，几十厌氧性球菌(Anaerobiccocci)是临床厌氧感染的重要病原菌，约占临床厌氧菌分离株的25％主要包括革兰阳性:消化球菌属消化链球菌属

革兰阴性:韦荣球菌属

厌氧球菌厌氧性球菌(Anaerobiccocci)是临床厌氧感染的消化球菌属黑色消化球菌(Peptococcusniger)是消化球菌属中唯一的菌种。革兰阳性球菌。直径0.3～1.3μm，单个、成双、短链或成堆排列。无芽胞，无荚膜。专性厌氧菌，生长缓慢，厌氧培养2～4天形成黑色不溶血的小菌落。标本黑色有臭味是该细菌感染的重要特点。

消化球菌属黑色消化球菌(Peptococcusniger)消化链球菌属代表菌为厌氧消化链球菌（P.anaerobius）革兰阳性球形或卵圆形，大小不等，菌体直径0.3～1μm，常成双或呈短链状排列。无鞭毛，无芽胞，无荚膜。消化链球菌属代表菌为厌氧消化链球菌（P.anaerobius消化链球菌培养特性专性厌氧，营养要求较高，需羊血和血清培养基才能生长。在厌氧血平板上，菌落直径0.5～1mm、灰白色、凸起、不透明、边缘整齐，一般不溶血，偶有α或β溶血。生化反应不活泼，在硫乙醇酸钠液体培养基中，呈颗粒状沉淀生长。在其平板上生化反应较为明显，吐温-80可促进其生长。消化链球菌培养特性专性厌氧，营养要求较高，需羊血和血清培养基韦荣球菌属

韦荣球菌属细菌形态相似，为革兰阴性球菌。直径0.3～0.5μm，多排列成对、近似奈瑟球菌。无鞭毛、无芽胞。专性厌氧，血琼脂平板上生长良好，培养48h后，形成直径1～2mm圆形、凸起、灰白色或黄色混浊、不溶血菌落；在硫乙醇酸盐肉汤中混浊生长，产生小气泡。新鲜培养物立即置紫外线下照射，菌落可显红色荧光，接触空气后荧光消失。生化反应不活泼，不分解糖类，还原硝酸盐。韦荣球菌属韦荣球菌属细菌形态相似，为革兰阴性球菌。直径0.革兰阴性无芽胞厌氧杆菌这是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，是人体正常菌群的重要组成成员，部分菌株可作为条件致病菌引起感染。常见菌属有：类杆菌属普雷沃菌属卟啉（紫）单胞菌属梭杆菌属革兰阴性无芽胞厌氧杆菌这是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，是人体正类杆菌属类杆菌属(Bacteroides)是临床上最重要的革兰阴性无芽胞厌氧杆菌，临床标本中以脆弱类杆菌（B.fragilis）最常见。脆弱类杆菌为革兰阴性，大小为(0.8～1.3μm)×(1.6～8μm)，着色不均，两端钝圆而浓染，中间不着色染色较浅似空泡。在陈旧培养物或含糖的液体培养基中呈明显多形性，无鞭毛、无芽胞，多数有荚膜。类杆菌属类杆菌属(Bacteroides)是临床上最重要的革普雷沃菌属普雷沃菌属(Prevotella)是从类杆菌属分出的一个新菌属，代表菌种是产黑色素普雷沃菌(P.melaninogenica)。革兰阴性球杆状，大小约0.8～1.5µm×1.0～3.5µm，排列成双或短链，两端钝圆，有浓染和空泡。普雷沃菌属普雷沃菌属(Prevotella)是从类杆菌属分出产黑色素普雷沃菌培养特性专性厌氧菌，在厌氧平板上2～3天培养后，菌落直径为0.5～3mm，圆形、凸起、不透明，许多菌株呈β-溶血。菌落在紫外光（波长366nm）照射下有砖红色荧光，逐渐转为褐黑色和棕色菌落，5～7天转为黑色菌落，色素出现后荧光即消失。产黑色素普雷沃菌培养特性专性厌氧菌，在厌氧平板上2～3天培养卟啉（紫）单胞菌属

紫单胞菌属(Porphyromonas)又称卟啉单胞菌属。代表菌种是不解糖紫单胞菌。革兰阴性杆菌或球杆菌，大小约1.5～3.5µm×0.8～1.5µm，两端钝圆，着色不均匀。35～37℃厌氧培养3～5d可形成1～2mm圆形、凸起、表面光滑、边缘整齐、棕色或黑色菌落。维生素K1和氯化血红素可促进本菌生长及黑色素的产生。卟啉（紫）单胞菌属紫单胞菌属(Porphyromonas)梭杆菌属

梭杆菌属（Fusobacterium）是临床常见的革兰阴性无芽胞厌氧杆菌，形态细长，两端尖细如梭。坏死梭杆菌是毒力很强的梭杆菌，常引起急性扁桃体炎，有时并发单核细胞增多症，是儿童和青年人扁桃体周围脓肿中最常分离到的厌氧菌。局部症状还包括颈间隙感染和颈静脉脓毒性血栓静脉炎，尚可引起胸膜渗出性脓胸、增生性转移脓肿和菌血症。坏死梭杆菌形态梭杆菌属梭杆菌属（Fusobacterium）是临坏死梭杆习题关于厌氧菌，错误的是

A采集时注意不被正常菌群污染，尽量避免接触空气

B产气荚膜梭在强化血平板上出现双层溶血环

C美蓝指示剂在有氧时变蓝色

D齿龈、咽喉拭子、痰液或气管吸出物等标本不宜厌氧培养

E局部组织的氧化还原电势上升有利厌氧菌生长E习题关于厌氧菌，错误的是EThankyouThankyou鉴定试验

形态与染色：

用24h内幼龄菌，多染色性，多形性菌落性状：

色素、溶血、荧光等生化试验：糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验等

抗生素敏感鉴定：

灭滴灵（厌氧菌S）、卡那霉素（梭杆S）、万古霉素等鉴定试验形态与染色：

用24h内幼龄菌，多染色性鉴定试验气液相色谱技术（GLC）厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂肪酸），过柱分析，定性定量。厌氧菌快速发酵试验：

利用厌氧菌产生的胞外酶与少量的生化基质迅速反应，4h内可观察到生化反应结果。无需厌氧环境，只需浓厌氧菌液即可。鉴定试验气液相色谱技术（GLC）药物敏感试验

考虑做厌氧菌体外药敏试验的临床情况：①明确厌氧菌引起的严重感染，②已确证厌氧菌感染而经验用药无效，③需长期用药的厌氧菌感染。

方法培养基接种浓度孵育时间优点琼脂稀释法布氏血琼脂105细胞／点48H可同时测多个菌株肉汤稀释法布氏心脑浸液106CFU／ML48H经济，可商品化E试验布氏血琼脂0.5麦氏比浊度

24－48HMIC精确ß内酰胺酶琼脂培养基单个菌落

30－50min经济快速检测对青霉素G和AMP的耐药耐药性：甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药药物敏感试验考虑做厌氧菌体外药敏试验的临床情况厌氧菌直接镜检初步鉴别

菌名革兰染色形态及其他特征破伤风杆菌阳杆细长、梭形或鼓状，有芽胞、周鞭毛产气荚膜梭菌阳杆粗大杆菌，呈单或双排列，有芽胞，有荚膜产黑色素类杆菌阴杆多形性，长短不一，标本有恶臭，琥珀味，紫外线照射发红色荧光韦荣球菌阴球极小的革兰阴性球菌消化链球菌阳球革兰阳性呈现链状的小球菌形态、大小、排列、染色性、有无芽胞、色素、气味等特性厌氧菌直接镜检初步鉴别形态、大小、排列、染色性、有无芽胞、色临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件厌氧手套箱厌氧手套箱临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件ABC厌氧培养（初代培养）需氧培养厌氧培养次代培养ABC厌氧培养（初代培养）需氧培养厌氧培养次代培养厌氧菌anaerobicbacteria广州医科大学金域检验学院临床微生物检验教研室厌氧菌anaerobicbacteria广州医科大学金掌握厌氧菌的种类、标本要求、实验室检查掌握常见厌氧芽孢梭菌的生物学特征重点重点在有氧环境中不能生长，无氧或低氧分压环境中才能生长一类细菌。（缺乏完善的酶系统，只能以无氧发酵进行能量代谢）概念在有氧环境中不能生长，无氧或低氧分压环境中才能生长一类细菌。

(1)革兰阳性有芽胞杆菌(梭状芽孢杆菌属）

破伤风芽孢杆菌产气荚膜梭状芽孢杆菌肉毒梭状芽孢杆菌艰难梭状芽孢杆菌

种类1、生物学分类(1)革兰阳性有芽胞杆菌(梭状芽孢杆菌属）种类1、生物学分(2)革兰阳性无芽胞杆菌（正常菌群）

乳酸杆菌、双歧杆菌、优杆菌属、丙酸杆菌属(3)革兰阴性无芽胞杆菌

类杆菌属、普雷沃菌属、卟啉单胞菌属、梭杆菌属(4)革兰阳性厌氧球菌消化球菌属、消化链球菌属(5)革兰阴性厌氧球菌韦荣球菌属种类1、生物学分类(2)革兰阳性无芽胞杆菌（正常菌群）种类1、生物学分类对氧极端敏感的厌氧菌：在0.5%的氧分压或在空气中暴露10mins即死亡的细菌。中度厌氧菌：能在2%--8%的氧分压环境中或空气暴露60mins—90mins或在脓液标本中72h还可以分离出来的细菌。耐氧厌氧菌：其耐氧程度刚好可以在刚配制出来的固体厌氧培养基上生长，一旦生长出来，在空气中暴露数小时仍不死亡的细菌。种类2、对氧的耐受程度种类2、对氧的耐受程度

部位

细菌总数

比率

(CFU/mlormg)

厌氧菌:需氧菌UpperAirway

鼻洗液

103-104 3-5:1

口水 108-109 1:1

牙齿表面 1010-1011 1:1

牙龈缝隙

1011-1012 1000:1

GastrointestinalTract

胃 102-105 1:1

小肠 102-104 1:1

回肠 104-107 1:1

结肠 1011-1012 1000:1

FemaleGenitalTract

子宫颈 108-109 3-5:1

阴道 108-109 3-5:1

部位感染普遍，以混合感染为主。内源性＞外源性，无芽胞厌氧菌＞芽胞厌氧菌临床意义临床意义发生内源性感染危险因素（条件）

1.局部组织血液供给障碍：局部缺氧

2.机体局部屏障作用破坏：组织氧张力↓

3.机体免疫功能↓

4.菌群失调

5.长期应用氨基糖苷类药物可诱发厌氧菌感染临床意义临床意义感染的临床及细菌学指征：1.局部产生气体2.发生在黏膜附近的感染3.深部外伤感染4.常规血培养阴性的心内膜炎，并发脓毒症血栓静脉炎等5.有恶臭的分泌物6.胃肠和生殖道手术后感染、流产后发生的感染7.其它：镜检有菌而培养阴性，或在液体及半固体培养基深部长的细菌等临床意义临床意义

临床标本肉眼观察分离培养增菌培养及直接镜检厌氧培养

2-7d确定厌养培养

需氧培养厌氧培养生长无生长生长

兼性厌氧菌专性厌氧菌保存菌种分类鉴定药物敏感试验形态与染色菌落特性生化反应药敏性鉴定气液相色谱厌氧菌的检验厌氧菌的检验原则：采集时注意不被正常菌群污染，尽量避免接触空气下列易污染标本不宜厌氧培养齿龈、咽喉拭子，痰液或气管吸出物（呼吸道），胃和肠道内容物或肛拭子、粪便（消化道），阴道或宫颈拭子（生殖道），中段尿或导尿液（泌尿道），皮肤表面或伤口边缘等标本不同部位标本采集法针筒抽取、穿刺术等标本采集标本采集1.针筒运送法：各种液体标本，简便易行2.无菌厌氧袋法：注射器、组织标本3.已排气不含氧的管或瓶（内含厌氧指示剂）：厌氧标本运送即送即检，避免标本干燥、接触空气和低温保存1.针筒运送法：各种液体标本，简便易行厌氧标本运送即

3）培养方法

厌氧罐培养法厌氧气袋培养法厌氧培养箱培养法厌氧菌培养厌氧罐培养法厌氧菌培养厌氧罐法－以物理或化学方法造成无氧环境美蓝指示剂（有氧蓝色、无氧无色）刃天青指示剂（有氧红色、无氧无色）抽气换气法：

10%H2、10%CO2、80%N2、钯粒冷触媒法：

钯粒硼氢化钾、碳酸氢钠、枸橼酸药片C2O+H2↑

H2O

O2厌氧菌培养厌氧罐法－以物理或化学方法造成无氧环境厌氧菌培养临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件

气袋法：

原理同上冷触媒法，简单方便。

气袋法：

原理同上冷触媒法，简单方便。厌氧手套箱：

比较好的厌氧菌培养设备

厌氧手套箱：

比较好的厌氧菌培养设备

临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件其他：

OxyplatesTM（氧净）厌氧培养皿－－可反复打开，Oxyrase酶系统能使培养基中O2去除，并产生CO2。

其他：

OxyplatesTM（氧净）厌氧培养皿－－可反复打1.初代培养：

1）培养基：新鲜、预还原

非选择性培养基：强化BAP(血、维生素、氯化血红素等),几乎所有厌氧菌均可生长。

选择培养基：KVLB、BBE、EYA、CCFA…

2）标本接种固体和液体培养基同时接种检验方法1.初代培养：检验方法检验方法2、结果观察

1）次代培养和厌氧菌再确定

检验方法2、结果观察ABC厌氧培养（初代培养）需氧培养厌氧培养次代培养ABC厌氧培养（初代培养）需氧培养厌氧培养次代培养

采集运送培养基厌氧环境时间等因素检验方法2、结果观察

2）厌氧菌培养失误的原因采集运送检验方法2、结果观察

形态与染色：

用24h内幼龄菌，多染色性，多形性菌落性状：

色素、溶血、荧光等生化试验：糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验、触酶试验等

抗生素敏感鉴定：

灭滴灵（厌氧菌S）、卡那霉素（梭杆S）、万古霉素等鉴定试验形态与染色：

用24h内幼龄菌，多染色性，多形性气液相色谱技术（GLC）厌氧菌产生大量的有机酸（挥发性和非挥发性脂肪酸），过柱分析，定性定量。厌氧菌快速发酵试验：

利用厌氧菌产生的胞外酶与少量的生化基质迅速反应，4h内可观察到生化反应结果。无需厌氧环境，只需浓厌氧菌液即可。鉴定试验气液相色谱技术（GLC）鉴定试验药物敏感试验

考虑做厌氧菌体外药敏试验的临床情况：①明确厌氧菌引起的严重感染，②已确证厌氧菌感染而经验用药无效，③需长期用药的厌氧菌感染。

方法培养基接种浓度孵育时间优点琼脂稀释法布氏血琼脂105细胞／点48H可同时测多个菌株肉汤稀释法布氏心脑浸液106CFU／ML48H经济，可商品化E试验布氏血琼脂0.5麦氏比浊度

24－48HMIC精确ß内酰胺酶琼脂培养基单个菌落

30－50min经济快速检测对青霉素G和AMP的耐药耐药性：甲硝唑敏感，氨基糖甙类耐药药物敏感试验考虑做厌氧菌体外药敏试验的临床情况厌氧菌中唯一有芽孢菌属厌氧的粗大革兰阳性杆菌是目前细菌中最大的一个菌属广泛分布在自然界（以芽孢的形式）

梭状芽胞杆菌属厌氧菌中唯一有芽孢菌属梭状芽胞杆菌属

引起人类疾病的各种常见厌氧芽胞梭菌细菌名称

所致疾病破伤风梭菌破伤风产气荚膜梭菌气性坏疽、毒血症、坏死性肠炎、食物中毒等肉毒梭菌食物中毒、婴儿肉毒梭菌症、创伤肉毒症艰难梭菌抗生素相关性腹泻、抗生素相关性伪膜性肠炎引起人类疾病的各种常见厌氧芽胞梭菌破伤风梭菌破伤风梭菌无侵袭力，仅在局部繁殖，不入血致病因素--痉挛毒素（外毒素）临床症状--牙关紧闭，角弓反张等临床意义无侵袭力，仅在局部繁殖，不入血临床意义1.对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin)2.质粒编码的破伤风痉挛毒素(tetanospasmin)属神经毒(neurotoxin)，毒性极强(对人致死量<1µg)蛋白质（可脱毒成类毒素），不耐热：轻链（A链）-S-S-重链（B链）

B链：神经节苷脂结合的单位

A链：毒性作用致病因子1.对氧敏感的破伤风溶血毒素(tetanolysin)致病下列情况易致破伤风梭菌感染伤口窄而深（如刺伤），有泥土或异物污染大面积创伤、烧伤，坏死组织多，局部组织缺血有需氧菌或兼性厌氧菌混合感染的伤口临床意义下列情况易致破伤风梭菌感染临床意义

1.形态染色:

革兰阳性，芽胞圆形，比菌体大，位于菌体顶端呈鼓槌状，无荚膜，有鞭毛。

生物学性状生物学性状临床微生物检验：厌氧菌课件临床微生物检验：厌氧菌课件专性厌氧，在血平板上有迁徙生长，菌落呈羽毛状。庖肉培养基轻度变浊，肉渣部分消化，微变黑，恶臭，产少量气体。培养特性专性厌氧，在血平板上有迁徙生长，菌落呈羽毛状。培养特性

不发酵分解糖类硝酸盐－

H2S＋明胶＋生化反应不发酵分解糖类生化反应芽胞耐热、耐干燥对青霉素、红霉素、四环素等敏感氨基糖苷类耐药。抵抗力芽胞耐热、耐干燥抵抗力

症状典型者，一般不作细菌检查。怀疑感染：直接涂片镜检

分离培养，鉴定鉴别微生物学检查

症状典型者，一般不作细菌检查。微生物学检查产气荚膜梭状芽孢杆菌产气荚膜梭状芽孢杆菌1.外毒素和侵袭性酶类－引起气性坏疽的临床表现

（水肿、皮下捻发音）

α毒素（卵磷脂毒素）产生量最大引起血管通透性增加伴大量溶血、组织坏死、肝脏、心功能受损在气性坏疽的形成中起主要作用β、γ、ε等其他毒素引起组织坏死、血管通透性增加、水肿、产气2.肠毒素－食物中毒（坏死性肠炎）。临床意义1.外毒素和侵袭性酶类－引起气性坏疽的临床表现

下列情况易导致产气荚膜梭菌感染：开放性骨折大块肌肉撕裂组织严重坏死下列情况易导致产气荚膜梭菌感染：临床微生物检验：厌氧菌课件

形态染色：革兰阳性粗短大杆菌，两端钝圆，芽胞圆形位于菌体中央或次极端，直径不大于菌体，但较少形成，有荚膜，无鞭毛。

生物学性状

形态染色：革兰阳性粗短大杆菌，两端钝圆，芽胞圆形位于菌体中

非严格厌氧，繁殖迅速

血平板上双层溶血环疱肉培养基中“汹涌发酵”。培养特性非严格厌氧，繁殖迅速培养特性

H2S＋，明胶＋，葡萄糖＋，乳糖＋，麦芽糖＋，蔗糖＋，卵磷脂酶＋

生化反应生化反应卵磷脂酶阳性卵磷脂酶阳性

微生物学检查法直接涂片镜检

深部创口取材涂片革兰阳性大杆菌白细胞少且不典型伴有其他杂菌早期诊断可避免病人最终截肢或死亡微生物学检查法直接涂片镜检

微生物学检查法分离培养及动物实验接种血平板或庖肉培养基，镜检及生化反应鉴定动物实验如怀疑食物中毒，在发病后一日内，检出大于105CFU/克食品或106CFU/克粪便可确立诊断微生物学检查法分离培养及动物实验肉毒梭菌肉毒梭菌1.形态染色：革兰阳性大杆菌,芽胞椭圆形位于菌体次极端,比菌体粗,呈网球拍状。无荚膜,有鞭毛。2.培养特性：普通培养基生长，血平板上β溶血环，庖肉培养基肉渣消化，变黑，恶臭。3.生化反应：H2S＋,明胶＋,葡萄糖＋,乳糖－,麦芽糖＋,吲哚－,卵磷脂酶－

生物学性状1.形态染色：革兰阳性大杆菌,芽胞椭圆形位于菌体次极端,比菌（二）临床意义肉毒毒素--毒性最强嗜神经性，使神经麻痹；食物中毒。剧毒（对人致死量为0.1µg)（三）微生物学检查

直接涂片镜检，分离培养，鉴定鉴别（二）临床意义艰难梭菌艰难梭菌（一）生物学性状：1.形态染色：革兰阳性大杆菌，芽胞椭圆形或长方形，位于菌体次极端，无荚膜，有鞭毛。2.培养特性：严格厌氧，血平板无溶血环，CCFA平板呈黄色菌落，在紫外灯下可见黄绿荧光。3.生化反应：H2S－,蔗糖－,葡萄糖＋,乳糖－,麦芽糖－,吲哚－,脂酶－

临床微生物检验：厌氧菌课件（二）临床意义正常菌群。医院感染的重要病原菌。产生A、B两种毒素，即肠毒素和细胞毒素，引起假膜性肠炎。（三）微生物学检查

直接涂片镜检，分离培养，鉴定鉴别临床微生物检验：厌氧菌课件艰难梭菌在CCFA平板上菌落（培养48h)艰难梭菌在CCFA平板上菌落（培养48h)ThankyouThankyou临床厌氧菌感染中最常见的病原菌一、类杆菌属

BBE平板上有黑色晕圈二、普雷沃菌属

KVLB出现黑色菌落三、卟啉单胞菌属四、梭杆菌属

革兰阴性无芽胞厌氧杆菌临床厌氧菌感染中最常见的病原菌革兰阴性无芽胞厌氧杆菌

革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌有6个属，几十个菌种，临床常见的有丙酸杆菌、优杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌、蛛网菌和放线菌。它们多是人和动物皮肤、口腔、肠道等部位的重要生理菌群，在体内起到调节和维持人体微生态平衡的重要作用。它们的菌落、生化反应、菌体形态等都很相似，鉴定较难。应用气液相色谱法（GLC），根据其代谢产物不同，可对菌属做出初步判定。革兰阳性无芽胞厌氧杆菌革兰阳性无芽胞厌氧杆菌有6个属，几十厌氧性球菌(Anaerobiccocci)是临床厌氧感染的重要病原菌，约占临床厌氧菌分离株的25％主要包括革兰阳性:消化球菌属消化链球菌属

革兰阴性:韦荣球菌属

厌氧球菌厌氧性球菌(Anaerobiccocci)是临床厌氧感染的消化球菌属黑色消化球菌(Peptococcusniger)是消化球菌属中唯一的菌种。革兰阳性球菌。直径0.3～1.3μm，单个、成双、短链或成堆排列。无芽胞，无荚膜。专性厌氧菌，生长缓慢，厌氧培养2～4天形成黑色不溶血的小菌落。标本黑色有臭味是该细菌感染的重要特点。

消化球菌属黑色消化球菌(Peptococcusniger)消化链球菌属代表菌为厌氧消化链球菌（P.anaerobius）革兰阳性球形或卵圆形，大小不等，菌体直径0.3～1μm，常成双或呈短链状排列。无鞭毛，无芽胞，无荚膜。消化链球菌属代表菌为厌氧消化链球菌（P.anaerobius消化链球菌培养特性专性厌氧，营养要求较高，需羊血和血清培养基才能生长。在厌氧血平板上，菌落直径0.5～1mm、灰白色、凸起、不透明、边缘整齐，一般不溶血，偶有α或β溶血。生化反应不活泼，在硫乙醇酸钠液体培养基中，呈颗粒状沉淀生长。在其平板上生化反应较为明显，吐温-80可促进其生长。消化链球菌培养特性专性厌氧，营养要求较高，需羊血和血清培养基韦荣球菌属

韦荣球菌属细菌形态相似，为革兰阴性球菌。直径0.3～0.5μm，多排列成对、近似奈瑟球菌。无鞭毛、无芽胞。专性厌氧，血琼脂平板上生长良好，培养48h后，形成直径1～2mm圆形、凸起、灰白色或黄色混浊、不溶血菌落；在硫乙醇酸盐肉汤中混浊生长，产生小气泡。新鲜培养物立即置紫外线下照射，菌落可显红色荧光，接触空气后荧光消失。生化反应不活泼，不分解糖类，还原硝酸盐。韦荣球菌属韦荣球菌属细菌形态相似，为革兰阴性球菌。直径0.革兰阴性无芽胞厌氧杆菌这是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，是人体正常菌群的重要组成成员，部分菌株可作为条件致病菌引起感染。常见菌属有：类杆菌属普雷沃菌属卟啉（紫）单胞菌属梭杆菌属革兰阴性无芽胞厌氧杆菌这是一群不形成芽胞的厌氧杆菌，是人体正类杆菌属类杆菌属(Bacteroides)是临床上最重要的革兰阴性无芽胞厌氧杆菌，临床标本中以脆弱类杆菌（B.fragilis）最常见。脆弱类杆菌为革兰阴性，大小为(0.8～1.3μm)×(1.6～8μm)，着色不均，两端钝圆而浓染，中间不着色染色较浅似空泡。在陈旧培养物或含糖的液体培养基中呈明显多形性，无鞭毛、无芽胞，多数有荚膜。类杆菌属类杆菌属(Bacteroides)是临床上最重要的革普雷沃菌属普雷沃菌属(Prevotella)是从类杆菌属分出的一个新菌属，代表菌种是产黑色素普雷沃菌(P.melaninogenica)。革兰阴性球杆状，大小约0.8～1.5µm×1.0～3.5µm，排列成双或短链，两端钝圆，有浓染和空泡。普雷沃菌属普雷沃菌属(Prevotella)是从类杆菌属分出产黑色素普雷沃菌培养特性专性