药典培训课件微生物

《中国药典》2015年版主要增修订内容（微生物检验部分）《中国药典》2015年版主要增修订内容（微生物检验部分）第四部主要变化：制剂通则

1、整合：《中国药典》2010版一部附录【微生物限度】“...照微生物限度检查法（附录XIIIC）检查...”整合为：“以动物、植物、矿物来源的非单体成分制成的XX剂，照非无菌产品微生物限度检査：微生物计数法（通则1105)和控制菌检查法（通则1106)及非无菌药品微生物限度标准（通则1107)检査，应符合规定...”包括：0101片剂0103胶囊剂0104颗粒剂

0108丸剂

2、修订：《中国药典》2010版附录【无菌】“...用于烧伤或严重创伤的XX剂，照无菌检查法...”修订为：“...用于烧伤（除轻度烧伤I°或II°外）、严重创伤的XX剂，依照无菌检查法（通则1101）检查...”。注意：用于烧伤治疗如为非无菌制剂的，应在标签上标明“非无菌制剂”；产品说明书中应注明“本品为非无菌制剂”，同时在适应证下应明确“用于程度较轻的烧伤(I°或浅II°)”；注意事项下规定“应遵医嘱使用”。

包括：0109软膏剂乳膏剂0112喷雾剂0113气雾剂0114凝胶剂0115散剂0118涂剂0119涂膜剂

3、新增：

0111吸入制剂：吸入液体制剂【无菌】依照（通则1101）；可转变成蒸汽的制剂【微生物限度】照非无菌产品微生物限度检査：微生物计数法（通则1105)和控制菌检查法（通则1106)及非无菌药品微生物限度标准（通则1107)检査，应符合规定。

4、分列：0127洗剂0128冲洗剂0129灌肠剂：分开列，冲洗剂做【无菌】【内毒素】或【热源】，其他制剂做【微生物限度】。0117搽剂0118涂剂0119涂膜剂，搽剂做【微生物限度】，其余做【无菌】或【微生物限度】。

生物检查法

无菌检查：主要变化：检验环境：应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求。

培养基：1、改良马丁培养基由胰酪大豆胨液体培养基和沙氏葡萄糖液体培养基代替

厌氧菌需氧菌真菌硫乙醇酸盐流体培养基硫乙醇酸盐流体培养基胰酪大豆胨液体培养基胰酪大豆胨液体培养基沙氏葡萄糖液体培养基2、名称变化：“选择性培养基”改为“中和或灭活用培养基”

3、培养基灵敏度检查：

菌液制备：金葡、铜绿、枯草的培养物在胰酪大豆胨培养基上进行（10版为营养琼脂和营养肉汤）；白色念珠菌、黑曲霉的培养物在沙氏培养基上进行（10版为改良马丁）

接种量的变化：硫乙和胰酪大豆胨均改为7支，枯草接种至胰酪大豆胨培养。（10版枯草接种至硫乙）

方法适用性试验：

1、名称：（10版方法验证试验）改为方法适用性试验。 2、操作：

薄膜过滤法：将培养基加至滤筒内培养，删除“取出滤膜接种至....培养基的操作”。

直接接种法：接种量硫乙和胰酪大豆胨均改为6支，枯草接种至胰酪大豆胨培养。（10版枯草接种至硫乙）

3、培养时间：不得超过5天，（10版为3～5天）

其他：供试品的无菌检查：

1、检验数量：整合原二，三部抽样要求。要求基本不变 2、阳性对照：阳性对照管培养要求为72小时内应生长良好（10版为48～72小时应生长良好）

3、薄膜过滤法：一般应采用封闭式薄膜过滤器，删除了“也可使用一般薄膜过滤器”。明确了设备使用要求。

水溶液供试品：混合至含不少于100ml适宜稀释液的无菌容器中...（10版为“混合至含适量稀释液的无菌容器中...”），规定了稀释液最低量。

4、直接接种法：

固体供试品：接种时，取规定量，直接等量接种至各管培养基中...（增加“等量”二字）。

生物检查法

非无菌产品微生物限度检查：

修订思路：将《中国药典》2010年版一、二、三部的相关内容合并参考EP7.0USP35JPXV标准，修订限度标准生物检查法

非无菌产品微生物限度检查：1105微生物计数法：

主要变化：细分：将10版一二部附录微生物限度检查法分为三部分：1105非无菌产品检查：微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法、1107非无菌药品微生物限度标准。试验环境：应符合微生物限度检查的要求。

计数方法：1、增加MPN法。对于测量某些微生物污染量很小的供试品，最可能数法MPN法可能是更适合的方法。 2、计数培养基适用性检查和方法适用性试验：

试验菌株：金葡、铜绿、枯草、白念、黑曲霉。去掉大肠埃希，增加铜绿。菌液制备同【无菌】

适用性检查结果判定：主要是标准变化，被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值应在0.5〜2范围内...（10版为不小于70%）

方法适用性：主要是判断标准变化，样品回收率在0.5〜2；方法适用性试验更为详细，（供试品制备方法的增加变化）；增加MPN法方法适用性：采用MPN法时，试验组菌数应在菌液对照组菌数的95%置信限内。 3、供试品检查：检验量：检验时，应从2个以上最小包装单位中抽取供试品，大蜜丸还不得少于4丸，膜剂还不得少于4片。

培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基用于测定需氧菌总数；沙氏葡萄糖琼脂培养基用于测定霉菌和酵母菌总数。非无菌产品微生物限度检查：1106控制菌检查法：

培养基适用性培养基变化：如营养琼脂变为胰酪大豆胨，改良马丁变为沙氏等。控制菌检查：耐胆盐革兰阴性菌替代大肠菌群

大肠埃希氏菌检查方法变化，TSB增菌，不用MUG了

非无菌产品微生物限度检查：1107非无菌药品微生物限度标准一、限度标准：更为清楚明了（共8项4个表）

1、制剂通则、品种项下要求无菌的制剂及标示无菌的制剂和原辅料应符合无菌检查法2、用于手术、烧伤或严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法3、非无菌化学药品制剂、生物制品制剂、不含药材原药粉的中药制剂的微生物限度标准

注意需氧菌总数概念，10版为“菌落总数”4、非无菌含药材原粉的中药制剂微生物限度标准

注意检查控制菌种类 A以原材料种类来决定：如口服给药制剂（是否含豆豉、神曲等原料）大肠埃希、沙门、耐盐G- B以给药部位来决定：如表皮粘膜金葡铜绿5、非无菌的药用原料及辅料微生物限度标准6、中药提取物及中药饮片的微生物限度标准 10版为：中药提取物及辅料参照相应制剂的微生物限度标准执行。

7.有兼用途径的制剂应符合各给药途径的标准。二、可接受最大菌数最大可接受限度值遵守2倍规则，及101

CFU最大可接受为20药品微生物实验室质量管理指导原则前言：药品微生物实验室“规范”指导原则，改为...“质量管理”指导原则；包括内容为：人员、培养基、试剂、菌种、环境、设备、样品、检验方法、污染废弃物处理、检验结果质量保证检测过程质量控制、试验记录、结果的判断和检测报告、文件等。（内容更丰富）。人员：实验人员应经过实验室生物安全方面的培训，保证自身安全，防止微生物在实验室内部污染；培养基：1、制备：容器的要求，不得影响培养基质量，一般为玻璃容器.. 2、贮藏：培养基再融化一般采用水浴或流通蒸汽加热，若采用其他溶解方法，应对其进行评估，确认该溶解方法不影响质量。（强调评估）试剂：微生物实验室应有试剂接收、检查和贮藏程序，以确保所用试剂质量符合相关要求。实验室用关键试剂，在开启和贮藏过程中，应对每批试剂的适用性进行验证。...菌种：强调“可追溯性”：药品微生物检验用的试验菌应来自认可的国内外保藏机构的标准菌株，或使用与标准菌株所有相关特性等效的可以溯源的商业派生菌株...

环境：1、实验室的布局和运行生物安全：活菌操作区应该配备生物安全柜，以避免危害性的生物因子对试验人员和实验环境造成的危害；病原菌微生物的分离鉴定应在二级生物安全实验室进行。布局：明确规定无菌检查应在B级背景下的A级单向流洁净区域或隔离器系统中进行，微生物限度检查应在不低于D级背景下的B级单向流空气区域内进行。AB区域的空气供给应通过终端高效空气过滤器人员进场：对微生物实验室使用权限要求限于经授权的工作人员，实验室人员应了解洁净区进出程序、更衣流程，该区域的限制要求等2、环境监测：明确了监测方法和参考限度指标，要求制定完善的洁净室和隔离系统的验证和环境监测标准操作规程，环境监测项目和监测频率及对超标结果的处理应有书面程序。消毒剂的使用应有消毒剂使用操作规程；定期监测消毒效果3、设备微生物实验室设备除遵循实验室设备管理的要求外，还有特殊要求：特种设备，高压锅和生物安全柜的人员资质要求；专用设备防止交叉污染的使用要求，如培养箱、高压灭菌器；定期检定和校准温度测量设备：培养箱、恒温水浴锅、冰箱、低温冰箱等称量设备容量测定设备：移液器、移液管洁净设备的性能监控生物安全柜、超净工作台、高效过滤器安装调试后的现场检测和定期再验证，保存相关记录和测试结果（结合环境监测记录）其他设备悬浮粒子计数器、浮游菌采样器定期校准PH计、湿度计、定时器等对实验结果有影响的关键参数检测的仪器进行校准总结一：全面与国际接轨：新药典参考EP7.0、USP35、JPXV标准，修订中国药典的微生物标准；参考欧美日药典标准修订菌数标准表达方式；以需氧菌总数替代细菌数、耐胆盐的格兰阴性菌替代大肠菌群等等，并增加新的概念：如含菌量较低的供试品细菌总数测定使用最大可能数法、分散均匀并非一定要溶解等等，同时新药典引入的偏差调查概念和内容更具体等等方面说明，微生物检验技术与国际标准要求接轨已成定势。二：实验环境的修订：2015年版药典中对无菌检查环境洁净度规定：无菌检查应在B级背景下的A级单向流洁净区域或D级背景下的隔离器中进行。限度检查要求在受控洁净环境下的局部不低于B级单向流空气区域进行。环境的提升，除了设备硬件的要求提高，还有验证和维持环境要求的提高。洁净或无菌室应配备独立的空气机组或空气净化系统，以满足相应的检验要求，包括温度和湿度的控制，压力、照度和噪声等都应符合工作要求。空气过滤系统应定期维护和更换,并保存相关记录。微生物实验室应划分成相应的洁净区域和活菌操作区域，同时应根据实验目的，在时间或空间上有效分隔不相容的实验活动，将交叉污染的风险降低到最低。活菌操作区应该配备生物安全柜，以避免危害性的生物因子对实验人员和实验环境造成的危害。实验室环境监测要求提高，增加人员进出表面微生物的监测，以降低人员操作时带来的风险。对微生物室使用的消毒剂和清洁剂进行验证，从而有效控制微生物，保证无菌环境达到要求。微生物实验