实验课题评估

男197210民族副每年工作时间（月6电 联系人董电单位称亚类说明20111—20131235.0000摘要(限400字)肾透细胞癌最常见肾脏对常放化疗免疫治不敏感。研究表明血管生成对于实体瘤的生长及转移具有重要意义，microRNA（miRNA）可通miRNA的cNA文库利用大规平行标（MPSS及miRNA技术人肾透细胞癌远癌肾组织小片段RNAmiRNA结合计机算法定其靶根据功能筛出与肾明细胞血管生成相关的miRN（目标iRNANorthernRT-PCR7860miRA经费申请 一.研究经学术会（5）（2）（1）（2）简易改5.二.国际合作与交流三.劳务学 （一）立项依据与研究内项目的立项依研究目的及意义肾癌是泌尿系统常见肿瘤之一，占肾脏肿瘤的90%～95%[1]，占209000、病例102000[2]。传统类型的肾癌（包括透明细胞型、颗粒细胞型和混合的一个巨大。近20年来研究发现，新生血管生成对于实体瘤的生长和转移具有重要意义，抑制肿瘤血管生成已成为控制肿瘤生长及浸润转移研究的一个重要方面。已有研究提示miroA（mi）可通过调控其靶参与的信号通路，影响管生成[3-13]。据此推测mimi的鉴定、功能分析及其临床意义的研究无疑具有重要的科学意义和临床应用前景。血管生成在实体瘤发生、发展过程中的作用及其机制恶性实体瘤主要由肿瘤细胞迁移至肿瘤附近并形成毛细血包绕。肿瘤发生早期，不超过1mm的微小肿瘤，可肿瘤转移的重要基础之一[15]Folkman提出“抑制肿瘤血管生成”可成为实体瘤与[8]。近年研究发现，miRNA表达失调与肿瘤血管生成密切相关，已经成为肿瘤血管生的非编码小分子单链RNA，通常以单拷贝、多拷贝或簇等形式存在于组中，在进化上具有高度保守性。miRNARNAmiRNA编码转录出初级转录本（pri-miRNA），接着由属于RNaseⅢ的Drosha将pri-miRNA剪80bp的miRNA前体（pre-miRNA），并由Exportin-5/Ran-GTP转运至胞RISC-miRNARISCmiRNA，通过特异的碱基配对方式结合其一是当miRNA序列与靶标mRNA的3′UTR完全匹配时，miRNA促使靶标的mRNA发生降解其二是miRNA通过与3′UTR的不完全匹配结合阻滞靶mRNA的翻译，但不影响靶标mRNA的稳定性[16]。肿瘤血管生成相关miRNA的研究现状肿瘤细胞可分泌多种促血管生成因子，激活并诱导内皮细胞的表型改变，促使新生血管生成。目前已有文献，肿瘤细胞中表1血管生成相关调控靶miR-15,miR-16,miR-20a,miR-[3、Sufu,Fus-TSP-1,miR-221,miR-c-kit,Ang1GAX,Let-7f,miR-SPRED1,miR-15/16Hua等人[3]研究了miRNA在HIF-1-VEGF信号通路中的作用。当在人鼻VEGF3′UTR的miRNA，最终得到多个可直接调控VEGF的miRNA，其中以miR-15/16 [4]也验证了miR-15/16对VEGF的抑制作用。以上研究提示，肿瘤细胞在低氧胁迫下，miR-378等人[5]，小鼠成瘤实验中，与对照组相比，过表达mi378的神经胶质瘤细胞学和体外实验发现，dghog信号途径中关键因子Sufu（upproroffud）和Fu1的3′UT都有mi378的潜在结合位点，mi378可通过与其互补结合下调Sufu和Fu-1，从而促进肿瘤细胞的存活。但是mi378影响小鼠肿瘤血管直径的分子机制尚不清楚。miR-17-92miR-17-92是由7个miRNA（miR-17-5p、miR-17-3p、miR-18a、Dews等人[7]发现miR-17-92会被原癌c-Myc激活，而且在k-RAS转化的肠道细胞中管的生长；进一步研究表明，miR-18和miR-19能分别抑制肿瘤细胞中抑血管生成结缔组织生长因子（connectivetissuegrowthfactor，CTGF）及凝血酶敏感蛋白1尽管miRNA对血管生成调控作用的研究刚刚起步，但上述研究已表明miRNA在本项目拟通过构建富集miRNA的cDNA文库、利用大规模平行标记RNA进行高效检测，筛选出肾透明细胞癌与远癌肾组织差异表达miRNA，利用生物信息学方法结合计算机算法确定差异表达miRNA的靶，根据靶功能筛选出与肾透明细胞癌血管生成相关的miRNA（目标miRNA），Northern杂交和RT-PCR相结合的方法在人肾透明细胞癌组织标本、体外培养的肾透明细胞癌786-0细胞及其鼠参考文献JemalA,SiegelR,WardE,etal.Cancerstatistics2006.CA.CancerJClin,2006,56(2):106-GuptaK,MillerJD,LiJZ,etal.Epidemiologicandsocioeconomicburdenofmetastaticrenalcellcarcinoma(mRCC):Ali turereview.CancerTreatmentReviews,2008,34(3):193-205.HuaZ,LvQ,YeW.MiRNA-directedregulationofVEGFandotherangiogenicfactorsunderhypoxia.PLoSONE,2006,1(1):e116.YeWB,LvQing,WangCA,etal.TheeffectofcentralloopsinmiRNA:MREduplexesontheefficiencyofmiRNA-mediatedgeneregulation.PLoSONE,2008,3(3):e1719.LeeDY,DengZQ,WangCH,etal.MiRNA-378promotescellsurvival,tumorgrowth,andangiogenesisbytargetingSuFuandFus-1expression.ProcNatlAcadSciUSA,2007,104(51):20350-20355.MendellJT.miRiadrolesforthemiR-17-92clusterindevelopmentanddisease.Cell,2008,133(2):217- DewsM,HomayouniA,YuDN,etal.AugmentationoftumorangiogenesisbyaMycactivatedmiRNAcluster.NatGenet,2000,38(9):1060-1065.SuárezY,Fernández-HernandoC,YuJ,etal.Dicer-dependentendothelialmiRNAsarenecessaryforpostnatalangiogenesis. atlAcadSciUSA,2008,105(37):14082-14087.PolisenoL,TuccoliA,MarianiL,etal.MiRNAsmodulatetheangiogenicpropertiesofHUVECs.Blood,2006,108(9):3068-3071.MartinMM,LeeEJ,BuckenbergerJA,etal.MiRNA-155regulateshumanangiotensinⅡtype1expressioninfibroblasts.JBiolChem,2006,281(27):18277- MartinMM,LeeEJ,BuckenbergerJA,etal.ThehumanangiotensinⅡtype1receptor-1166A/CpolymorphismattenuatesmiRNA-155binding.JBiolChem,2007,282(33):24262-24269.KuehbacherA,UrbichC,ZeiherAM,etal.RoleofDicerandDroshaforendothelialmiRNAexpressionandangiogenesis.CircRes,2007,101(1):59-68.FishJE,SantoroMM,MortonSU,etal.miR-126regulatesangiogenicsignalingandvascularintegrity.DevCell,2008,15(2):272-284.BushatiN,CohenSM.MicroRNAfunctions.AnnuRevCellDev.Biol,2007,23:175-HutvagnerG,ZamorePD.AmiRNAinamultiple-turnoverRNAienzymecomplex.Science,2002,297(5589):2056-2060.WightmanB,HaI,RuvkunG.Posttranscriptionalregulationoftheheterochronicgenelin-14bylin-4mediatestemporalpatternformationinC.elegans.Cell,1993,75(5):855-862.研究内容收集人肾透明细胞癌及远癌肾组织配对标本，分别构建富集miRNA的cDNA文库、利用大规模平行标记（MPSS）技术及miRNA技术对肾透明细胞癌及远癌肾组织小片段RNA进行高效检测；利用生物信息学方法结合计算机算法确定差异表达miA的靶，根据靶功能筛选出与肾透明细胞癌血管生成相关的miA（mi）；Northern杂交结合RT-PCR在人肾透明细胞癌组织标本、体外培养的肾透明细胞癌786-0细胞及其鼠移植瘤模型中鉴定目标miRNA；构建目标miRNA重组质粒并鉴定，脂介导转染786-0细胞及其鼠移植瘤模型使用RT-PCRWestern-blot及免疫组织化学方法检测目标miRNA的靶表达，观测移植瘤生长情况并进行微血管密度测定，以分析目标miRNA的功能。研究目筛选出肾透明细胞癌及远癌肾组织差异表达miRNA，利用生物信息学方法结合计算机算法确定差异表达miRNA的靶，根据靶功能筛选出与肾透明细胞癌血管生成相关的miRNA（miRNA）；在人肾透明细胞癌组织标本、体外培养的肾透明细胞癌786-0细胞及其鼠移植瘤模型中进行目标miRNA鉴定；构建目标miRNA重组质粒，体内、体外转染实验验证目标miRNA拟解决的关键科学问肾透明细胞癌及远癌肾组织差异表达miRNA差异表达miRNA靶的确定肾透明细胞癌血管生成相关的miRNA的筛选肾透明细胞癌血管生成相关miRNA反转录cDNA、PCR反转录cDNA、PCR16-28nt小片段97miRNANorthern杂交结合RT-PCR分别于人肾透明细胞癌组织、体外培养的肾透明细胞癌786-0细胞及其 鼠移植瘤模型中鉴定目标miRNAmiRNA表达111 介导体内转染786-0细胞移植 介导体外转染786-0细6MPSS技术对RNA建立 表达拟采取的研究方案及可行性Trizol法提取研究技术路线图（图中文本框右上角数字序号与主要研究步骤中数字Trizol法提取112 2554388miRNA②根据 功能筛选出肾透明细胞癌血管生成相关miRNA(目11初步确定肾透明细胞癌血管生成相关miRNA1主要研究步骤据实验实施情况酌情增加或减少样本量），取材相关的问题已获西安交通大学医学院第二附属医院医学批准，件见纸质申请书附件；利用15%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳从总RNA中分离出16-28nt小片段后，用poly(A)聚合酶在小片段RNA的3'端进行多聚腺苷酸化反应。逆转录得到cDNA后，再在cDNA的3'端进行多聚鸟苷酸化反应，随后进行PCR扩增，最后克隆建立富集miRNA的cDNA文库并对克隆进序；大规模平行标记（MPSS）技术对人肾透明细胞癌组织及远癌肾组织小片RNA进行高效使用凝胶电泳分别从来自人肾透明细胞癌组织及远癌肾组织的总RNA中分离出16-28nt小片段后，用生物素标记的寡核苷酸引物（biotin-labelledoligo-dTprimer）将miRNA合成为cDNA双链；Dpn限制性内切酶（酶切位点为GATC）消化并纯化cDNA将纯化的cDNA片段克隆入包含有32bp序列的（tag）载体中，通过上的PCR引物扩增插入片段，酶切消化线性化PCR产物，生成含cDNA片段与32bp标将cDNA模板连接到直径为5μm测定cDNA序列：洗脱除去寡核苷酸接头，分析经过BbvⅠ酶切后的cDNA模板,读出微球体阵列中每一个微球体上长度为17bp的cDNA模板序列。利用microRNA建立人肾透明细胞癌组织及远癌肾组织miRNA表使用Agilent’smiRNA扫描试剂，TRIzol抽提RNA，常规RNA质量检测，混16oC2小时标记miRNA，1000杂交后洗脱、扫描得到人肾透明细胞癌组织及远癌肾组织miRNA对比分析cDNA文库、大规模平行标记及microRNA检测结果，筛利用网络生物信息结合计算机算法确定差异表达miRNA的靶，根据靶利用现有的网上资源，进行差异表达miRNA靶的搜索，具体算法如下miRandamiRanda是Enright等于2003年5月开发的第一个miRNA靶预DIANA-mieroTDIANA-mieroTKiriakidou等基于实验和计算生物学方法开发的miRNA靶预测软件miRanda预测结果中可能出现一个miRNA对应多个靶位点或多个miRNA对应一个靶位点而丢掉了miRNA调控单个靶位点，而软件考虑了miRNA调控单个靶位点的情况。Targetsean和TargetseansTargetscan是Lewis等于2003年基于靶跨物种保守和miRNA-靶二聚体热力学特征开发的哺乳类动物靶预测软件Targetscan首次引入假阳性率来评价靶预测结果。PicTarPicTar是Krek等兼顾了第一代众多软件的设计思想并采用RNAhybrid评估MiRNA和靶二聚体结合能来实现miRNA靶预测。该算法同样强调“序列”在靶位点识别及在转录后调控中的关键作用强调miRNA和靶二聚体结合能在靶翻译抑制中的关键作用。miRBaseTargetS由英国Sange中心Enright建立并且，虽然建立较最常用的miRNA靶预测网络资源之一。综合以上5种算法，找出差异表达miRNA的靶并进行分析研究。具体是在至少两个以上软件预测出的靶为筛选得到的，利用网络资源检索这些靶，确定与肾透明细胞癌血管生成相关的miRNA作为鉴定的目标miRNA。NorthernRT-PCR分别于人肾透明细胞癌组织、体外培养的肾透明细胞癌786-0细胞及其鼠移植瘤模型中鉴定目标miRNA；建立鼠皮下移植瘤模型单细胞混悬液，调整密度至2×1010/L，在超净工作台内于鼠肩背部的皮下注射0.2mL单细胞悬液，7天后选取移植瘤直径大于5mm的鼠入组。Trozol法分别提取肾透明细胞癌组织、体外培养的786-0细胞及其鼠皮下移植瘤的总RNA；皮下移植瘤中的目标miRNA；构建目标miRNA的重组质粒并鉴定AmbionmiRNA并纯化，将其克隆至质粒载体中产物转化大肠杆菌中保存采用酶切电泳及的方法鉴定重组质粒的正确性脂介导目标miRNA重组质粒体外转染786-0细胞使用碧云天生物技术的Lipofecter脂转染试剂盒体外培养786-0细胞；24小时将细胞接种到六孔板，2470%；将六孔细胞培养板分为对照组、空质粒组、低、中、高剂量(1.5、2.0、2.5ugmiRNA质粒)实验组，70μl1.5ug1.5、2.0、2.5μg高表达miRNA70μl153-5天。脂介导目标miRNA重组质粒体内转染786-0细胞的鼠皮下移植瘤模型；选取30只接种后7天移植瘤直径大于5mm的鼠入组，分为空白组，空白质粒组，高、中、低剂量miRNA组(1.0、2.5、50ug/kg)，每组60.2mL，各组均连续给药15转录、翻译水平检测目标miRNA靶表达鼠移植瘤中目标miRNA靶的表达。计算抑瘤率停药后第2天处死鼠剥离瘤组织称取瘤质量计算抑瘤率，抑瘤率（1-实验组平均瘤质量/对照组平均瘤质量）×100%，抑瘤率可能为正值，也测定微血管密度以CD34（100×）下全面观察切片以确定肿瘤内血管密度最大处，再在高倍镜（200×）与周围肿瘤细胞和结缔组织成份明显区别的任何一个棕色染色的内皮细胞或细胞丛作5血管数，取其平均数作为该张切片微血管密度值。分析以上研究结果，初步确定肾透明细胞癌血管生成相关miRNA关键技术人肾透明细胞癌及远癌肾组织miRNA的cDNA文库构建，大规模平行标记（MPSS）技术对小片段RNA进序，miRNA检测miRNA表达谱网络生物信息学工具结合计算机算法筛选肾透明细胞癌血管生成相关的miRNA可行性分析新生血管生成对于肾透明细胞癌的生长和转移有重要意义，既往多项研实验所需组织标本已开始集，肾透细胞癌786-0细胞株系实验组已有冻存，细胞体外培养及人肾透明细胞癌鼠移植瘤模型的建立已是成熟技术，rthern交法和TPCR均为成熟方法miA谱测定现已有商品化miA来完成富集miA的A文库构建大规模平行标记（PSS技术成熟网络生物学信结合计算机算法确定miA靶方法可行。本课题的技术平台——西安交通大学医学院环境与疾病相关教育部重点实动物能提供鼠，具有动物饲养和手术的条件。其他各种试验试剂都有。较深入的研究，现主持或参与此方面国家自然科学基金项目3项。一直从PCR、Western-blot、免疫组化、Northern杂交法、RT-PCR技术等。本项目的特色与创新之本课题以miRNA在肾透明细胞癌血管生成中的作用为研究的切入点，通过肾透明细胞癌血管生成过程中关键miRNA的筛选鉴定初步判断其在肿瘤发生、发展过程中收集肾透明细胞癌及远癌肾组织配对标本构建富集miRNA的cDNA文库利用大规模平行标记MPSS技术及RNA2012/01-对比分析上述检测结果，筛选出肾透明细胞癌及远癌肾组织差异表达的miRNA，利用生物信息学方法结合计算机算法确定差异表达miRNA的靶，根据靶功能筛选出与肾透明细胞癌血管生成相关的miRNA（miRNA）；利用Northern杂交结合RT-PCR在人肾透明细胞癌标本、体外培养的肾透明细胞癌786-0细胞及其鼠移植瘤进行目标miRNA的鉴定；阶段性资料汇总分析，2013/01-构建目标miRNA重组质粒并鉴定，脂介导转染体外培养的786-0细胞及其胞及鼠移植瘤中目标miRNA靶的表达，观测肿瘤生长情况、测定微血管密度，进而验证目标miRNA的功能；资料汇总分析，，申报成果理、研究总结、撰写、学术交流和等工作。预期研究成成功建立肾透明细胞癌及远癌肾组织富集miRNA的cDNA及miRNA表达谱结果，筛选出肾透明细胞癌与远癌肾组织差异表达筛选并鉴定肾透明细胞癌血管生成相关的初步阐明肾透明细胞癌血管生成相关miRNA在肾透明细胞癌发生、发展过程中以上成果将以形式在国际相关基础和临床肿瘤或泌尿外科以及在国（二）研究基础与工作条研究基项目副医师参与或主持多项国家及省部级科研课题，一直从事究经验，能预见性的指导和把握本学科研究方向，主持的“多产物与肾发生机制及生物学行为的研究”获陕西省科技进步二等奖，现主家自然科学基金项目“减毒Stx1A-G250免疫毒素的构建、筛选及其抗肾癌作用与机制的实验研究”（项目编号：），目前进展顺利。ChongTie,NiuJianqiang,WangZiming.Antiproliferativeeffectofmatrineonrenalcellcarcinoma786-0cells.U.S.JournalofLymphologyandOncology,2007,6(1):1-种铁,,王子明,佘军军,.苦参碱抑制人肾透明细胞癌细胞系GRC-1细胞株增殖和促凋亡的实验研究.中西医结合学报,2006,4(4):388-391.种铁,王子明,常建同,,,,.外源性P16对肾透明细胞癌细胞周期及体外增殖的影响.西安交通大学学报医学版,2005,26(1):74-76．种铁,王子明,赵留存,虎威,.P-gp和MRP在肾癌中的表达及其临床意义.现代泌尿外科,2005,10(2):66-69.种铁万恒麟王子明肾透明细胞癌表皮生长因子表达及与预后的关系临床与实验病理学,2003,19(1):67-69.种铁,王子明,,石涛,万恒麟,苏宝山.P16抑癌在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义.中华泌尿外科,1997,18(6):332-334. 种铁,王子明,万恒麟,石涛,苏宝山.肾盂癌p53蛋白、AgNOR和PCNA相关性及临床意义的研究.中国肿瘤临床,1997,24(9):674-677.佘军军,王子明,车向明,种铁,.β-榄香烯对兔VX2肾透明细胞癌放疗增敏作用中Caspase-3及Bcl-2的表达.第四学报,2006(24):89-91. GangLi,TieChong,ZimingWang.CurcuminInducestheExpressionofNF-κBandBcl-2/BaxinHumanRenalCellCarcinomaCellLineACHN.JournalofNanjingMedicalUniversity,2009,23(6):1-6.,种铁,王子明.ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究.尿外科,2010,15(1):10-,,,王子明,.β-榄香稀乳对肾透明细胞癌放疗增敏相关表达谱的影响.中华泌尿外科,2007,28(2):87-90.曹军,,,.猪鼻支原体P40蛋白在肾透明细胞癌组织中的表达及意义.西安交通大学学报(医学版),2008,29(5):556-565.曹军,,,.肾透明细胞癌组织中支原体DNA检测的临床意义.西安交通大学学报(医学版),2008,29(6):683-685.曹军,.巢式PCR与免疫组化在检测肾透明细胞癌组织支原体中的应用.陕西,2008,37(9):1216-1221.工作条西安交通大学医学院环境与疾病相关教育部，具有良好的实验条西安交通大学医学院动物实验中心具有SPF饲养条件，有动物手术器械本项目所涉及的microRNA、各种实验材料及试剂均有商品化供应本项目所涉及的大规模平行标记（MPSS）技术及miRNA检测技术申请人简男38岁医学博士副医师现任中华医学会男科学分会青年委员，1994年于西安医学临床医学系本科毕业，1997年于西安医学毕业获外科学，2007年于西安交通大学医学院博士毕业获解剖与组织胚胎学博士1997年毕业后留校于西安交通大学医学院第二附属医院泌尿外科从事临床教学“Stx1A-0（国家自然科学基金项目青春期前和外源性雌激素对雄性大鼠发育功能及表达谱影响“后的有效性和安全性研究”现参与国家自然科学基金面上项目1（本人为第2参与人1项（基本完成2部。在本项目中为项目。近年来及待的学术如下：［1］,,王子明,甘为民,,石涛,,,王新阳.前己烯酚对大鼠性成熟后细胞凋亡的影响及其机制初探.中华男科学,2006,12(9):814-817,821.(PMID: Ge,Xin-YangWang.Effectsofprepubertalandpubertaldiethylstilbestrolexposureon8(5suppl):73.［3］,,王子明,甘为民,,种铁,石涛,,,王新阳.前己烯雌酚对SD大鼠发育及功能的影响.中华男科学,2008,14(2):148. ［4］,,王子明,,甘为民,种铁,,王新阳.前苯甲酸雌二醇对SD大鼠发育及功能的影响.大学学报(医学版),2009,40(1):15- ［5］甘为民,,,王子明,,,,种铁,陈,石涛,王新阳.青春期己烯雌酚对大鼠发育及功能的影响.中华泌尿外科,2007,28(12):848-854.［6］甘为民,,,王子明,,种铁,陈,石涛,,,王新阳.己烯雌酚摄入对大鼠细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响.中国男科学杂志,2007,21(11):11-14.［7］,石涛,王子明.P53和MDM2表达及与癌生物学行为的关系.临床泌尿外科,2001,16(12):526-528.［8］,,李洪亮,,陈,,甘为民,种铁,王子明.慢性炎疗效与患者精神状况及相关因素Cox回归分析.中华男科学,2008,14(8):727. ［9］,来,种铁,,,,甘为民,王子明.内镜直视下黏膜电凝法制作兔狭窄模型.第四学报,2009,30(18):1697-1699.［10］来,种铁,,,,,甘为民,王子明.离体流率对兔尿道狭窄程度的评价意义.现代泌尿外科,2009,14(5):361-363.［11］甘为民,陈,王子明,李洪亮,,.腔内会师疗复杂性尿道狭窄.现代泌尿外科2007,12(5):314-315.［12］,来,种铁,,,,甘为民,王子明.霉素抑制兔狭窄形成的实验研究.西安交通大学学报(医学版)(定稿待).［13］,,种铁,来,,,甘为民,王子明.多西紫杉醇抑制兔尿 ［14］,,种铁,来,,,甘为民,王子明.苦参碱对兔后狭窄形成的影响(待)外科副、中华医学会泌尿外科分会青年委员、陕西省医学会泌尿外科分会兼、西安医学会泌尿外科分会副委员。一直从事肾癌的基础与临床研究工作。 年主要从水平探讨肾癌的发生发展，成果“多产物与肾发生机制及生物学行为的研究以第一完成人获 年陕西省科技进步二等奖。 年至今，主攻肾癌的治疗研究，主持并完成2000年陕西省自然科学基金1项（题为导入外源性P16治疗肾透明细胞癌的实验研究”2000S40，2000年科研基金1项（题为联合多转染治疗肾透明细胞癌的实验研究，2005年陕西省科技攻关课题1项（题为-榄香烯逆转肾透明细胞癌耐药的实验研究”2005K0-4）；现持2009年国家自然科学基金项目减毒Stx1A抗0免疫毒素的构建、筛选及其抗肾癌作用与机制的实验研究（项目编号： ），目前进展顺利。熟悉工程技术和分子生物学有关的实验设计与方法。在本项目中承担目标miro筛选工作。发表的相关有：ChongTie,NiuJianqiang,WangZiming.Antiproliferativeeffectofmatrineonrenalcellcarcinoma786-0cells.U.S.JournalofLymphologyandOncology,2007,6(1):1-种铁,,王子明,佘军军,.苦参碱抑制人肾透明细胞癌细胞系GRC-1细胞株增殖和促凋亡的实验研究.中西医结合学报,2006,4(4):388-391.种铁,王子明,常建同,,,,.外源性P16对肾透明细胞癌细胞周期及体外增殖的影响.西安交通大学学报医学版,2005,26(1):74-76．种铁,王子明,赵留存,虎威,.P-gp和MRP在肾癌中的表达及其临床意义.现代泌尿外科,2005,10(2):66-69.种铁万恒麟王子明肾透明细胞癌表皮生长因子表达及与预后的关系临床与实验病理学,2003,19(1):67-69.种铁,王子明,,石涛,万恒麟,苏宝山.P16抑癌在肾透明细胞癌组织中的表达及临床意义.中华泌尿外科,1997,18(6):332-334. 种铁,王子明,万恒麟,石涛,苏宝山.肾盂癌p53蛋白、AgNOR和PCNA相关性及临床意义的研究.中国肿瘤临床,1997,24(9):674-677.佘军军,王子明,车向明,种铁,.β-榄香烯对兔VX2肾透明细胞癌放疗增敏作用中Caspase-3及Bcl-2的表达.第四学报,2006(24):89-91. GangLi,TieChong,ZimingWang.CurcuminInducestheExpressionofNF-κBandBcl-2/BaxinHumanRenalCellCarcinomaCellLineACHN.JournalofNanjingMedicalUniversity,2009,23(6):1-6.,种铁,王子明.ACHN细胞增殖及促凋亡的实验研究.现代泌尿外科,2010,15(1):10-12.，男，29岁，2000年进入西安交通大学医学院临床医学（七年制）专业学习，2007年获得临床医学，同年进入西安交通大学医学院第二附属医院泌尿）”。在本项目中承担细胞培养、转染及动物实验工作。近3年第二作5篇（2篇：[1],,,王子明,.β-榄香稀乳对肾透明细胞癌放疗增敏相关表达谱的影响.中华泌尿外科,2007,28(2):87-90.曹军,,,.猪鼻支原体