分子生物学华东理工上课讲义

大 遗传物质⑴能独立的自我，⑵对细胞的特异性有 响 年Crick提：要 ⑴遗传信息的⑶序列假说。1970 C D ㈠蛋白质的遗⑴⑵遗传信 译后①切割，糖基 ②两C端均去一段小肽；③原来的N端和C端连接。非DN信息的加工程⑶(PrKru. madcowdisease引起动物神经系统化，共济失调PrP PrPsc异 抗蛋白可 不α螺旋 α螺旋20%，β螺旋种 正常内源性rPc是作用的靶位点，体外PrPsc不能将PrPc完全转 ㈡RNADN――模糊E：锥虫的coxⅢ中167个位点 8个U插入,9个删除. 三、中心法则在命系统中细胞模板：DNA参与一，但不是Eg：朊成核依的蛋白质多聚化模型1 理工大 第一 什么是遗传物一、 转化实验 功能的肽链或RNA所 DNA序DNA作为遗传信息的原因,第二 DNA结 理工大 讲人类组计划――20世纪生物学最宏计划：人类组的作与人类组计划（199-2005）计划耗资30亿。人类组有30亿碱基对的。二、NA的二级结构受环境素,如平衡离子类型、离子强度、特异结合蛋白水合状态等的影响,以及DA分子存在多种构象――㈠B型结构（右手双螺旋 结构也称右手双螺旋结构1953WatsonCrick首先提出。这是水溶液（92%以上）中的主要构象。B-DNA构象的主要内容：⑴右手双螺旋；⑵两条链反平行；⑶酸,核糖在侧,碱基在内侧；⑷一周螺旋,10,34nmAT,CG配对规律；⑹双螺旋分子存在大沟,㈡相对湿度<75%矮胖型，直ZWang等人在研究人工合成d(CGCGG)X-射图谱发现主链呈锯1对碱基,距离为4.46nmAB型NA,鸟嘌呤碱基绕糖苷旋转呈顺构型,而嘧啶碱基仍是反构型,C3-endC2-endo 仅有一条小,且较深,含 理工大 三种构象特征大沟和小的信 ：氢键O,N,受体,NH2供体大沟(ad-aA-T小沟(a小沟(a-a-d,d-aa)G- 小沟(a-d-⑴十字型――反向复序列⑵DNA 结特征：①鸟嘌呤体；②G-G首生物体中可能存在G体的依 理工大 理工大存在条件：一条全嘌呤,另一条特征：①两条全嘧啶链和一全嘌呤链组三螺旋构；②氢键为oogste氢键；③第形成件：常链数（Linkingnumber)L=W+T（T代表双旋中的数，数量=总碱基数/每一圈的碱基数。 W值等零）例：一个200p的环状闭双链 L=W+T=0+200bp10 成1个超 LW+T=-1200b/10bp=19正超螺旋，形成1个超螺 =W+T=1+00bp/10两种拓扑异酶：TopoisomeraseI第三 DNA双螺旋 吸作甲两种拓扑异酶：TopoisomeraseI第三 DNA双螺旋 吸作甲碱基对稳定性第四 DNA的变性复性和分子杂NA⑴温：温度升高引起的DNA性称热变。加热Tm：50%DNA分解链时的温度。 理工大 《分 复性过程两条链DNA碰撞形成链DN的过程，是双分子应。服从二级反动力学律。控制复反应的两个数是C0和tRtorectionThereaciofolowsthsecondordereuasth oncerntrationofDAthatissingle-sradedattmetkisarassoiationrteconsantProgresofreIntegratterateeqatiobeteenthelimit;InitialconcertrationofDNA=Catiet=0;CncentratinemainigsiglestrandedCftertimetCitcalparaetersC0t1/2henthereationishalfc pletat etimet=1/2 ThereforeC0t1/2=1/k.复性反应进行50%时的C0 C0C0t的对数作图。如右图所示C0t值的意义：C0t12值可以用来表示反应体系中DN的总长度（单拷贝。这种总长度称为DN的复杂性。通过测定复性动力学可以预测基组的大小。真核DNA的复性动1是快复性力学组分，高度重复序列。第3是复性动力学组分，单拷贝序列。 理工大原理：基于NA的变性与复性的特性。双链DNA加热以后，变成单链，在去除变性条件 一定的条件下具有互补顺序的DNA探针：一种标记的一DNARNA，与待测序列的DNA或RNA补 液相原位交示意图：⑴DotshybridizationDNARNA；⑵Colonyorquehybridizatin，菌落或噬菌班杂交，待测核酸DNA。⑶Tisuehybridization，组织原杂交，检测mRNA表达和定位。文库：DNA文库，cDNA文库 一、原生 一、原生 ⑴只一个⑹⑼以RNA为产物的往往是多拷贝的，蛋白质华 工大华 工大⒉⑴X174；⑵λ组组、核小⑴功能实现三要素：①着丝点；②端粒；③起始点。组大小和C值C值：单倍体的全部 含C值：①与预相比 明显过；②同一物种，值相差大⑶基组的数目（表：不生物的基数目组大（b10×121人⑷真生物组序列特征具有多起始位点；编码序列仅占一小部单拷贝序列；轻度重复列；①：Ⅰ.蛋白；Ⅱ.rDNA；Ⅲ.tDNA；Ⅳ.组蛋白 华 工大 《分②Alu的重序列：Ⅰ.AGTlu90

←→表示转录表示组重 ③卫I.隐蔽卫 DNAIII.华 工大 内含子与外显子连接处的列特 含子 ,3’为AG,GT/AG规- 外显 内含 外显B.a.简单转录转录单.复杂转录转录方式不三、三、 在染色上的位⒈遗传交 鉴定 华 工大 第四 DNA 华 工大另一条链分段合成，称随从链（随后链）LaggingStrand华 工大 复复 DNA体研究DA快停突变体、 突变1聚合酶I活性 华 大华 工大 《分子生物学 三种大肠杆DA合 的l5’→3+3’→++++-++---有引物的+--有断 (聚+--5链单链 ＜10核苷+++单链长 10--分子 2每个菌体中的分子数( 值10-PolPo参与DNA解旋和 DNyrase)(TopoisomeraeII)DNA螺 DNA结合蛋白DNA 华 工 θD 一、的起始华华 工大M13、G4M13、G4华 工大 《分 讲三、回在or oriλ上起始涉及同的orOri识别和解链旋 结合解PRNA腺华 大华 工大 《 生 αδεβγ核核核核修 合Pol3‘-5’外切‘-5’外切3-5’外.V0DN1RA引，起始N合成()DAδ延DNAT螺DNATDAPol外切PolIIIεPoδPlRTT 真核生物过程中的核小图示详见大学图 蛋图7－24亲代组蛋白八聚华 工大 讲五 转 正链负链；编码链。RA:RNA→mRN(＋ RNA→互补RA→翻译(－ )DNA．ppA；pNApo忠实性二、R 合holoenzyme:σ始因子， 真核生物三种RN聚合 RA对α2S，8S，5.8SolhRNA，mRA，某sn0％～4高PoltNA，5SrRNA，片段特异,转录 制 作利福β链霉细菌核和β亚基结合, 起真 和A结合,真核RNAolⅡ原核生物的转录：启动子高度保守 突变法硫酸二甲酯法 CAP位点 G敏感 华 工大华 工因子依赖P因子依赖型止子 RNA反转录 NA。逆转录酶RDDPRDDPRNA编 NA 毒组中po成DNADNA聚合酶活性。☆