第二章工业用微生物菌种课用

发酵工程FermentationEngineering第二章发酵工业菌种本章内容

一、常用的工业微生物二、发酵工业菌种筛选的原则与基本技术三、发酵工业菌种改良最常用的工业微生物细菌醋酸杆菌属制醋工业的菌种乳酸杆菌枯草杆菌丙酮丁醇梭菌大肠杆菌谷氨酸棒状杆菌假单胞菌荧光假单胞菌荧光假单胞菌(P.fluorescens)属于假单胞菌属rRNAI群荧光DNA同源组，是植物根际最普遍的微生物类群，具有分布广、数量多、营养需要简单、繁殖快、竞争定殖力强的特点。荧光假单胞菌，而且许多菌株能产生几种活性物质，抗多种植物病害。其作用机制包括：抗生素的作用、噬铁素对铁的营养竞争、有效的根际定殖等。世界许多国家均有人报道分离到抗植物病害的荧光假单胞菌,而且许多菌株能产生几种活性物质,如抗油菜菌核病的菌株。铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）谷氨酸发酵菌种日前用于谷氨酸发酵的菌种有谷氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌、黄色短杆菌、嗜氨小杆菌、球形节杆菌。我国常使用的生产菌株是北京棒杆菌AS1.299、北京棒杆菌D110、钝齿棒杆菌A51.542、棒杆菌S-914和黄色短杆菌T6~T13等。在己报道的谷氨酸生产菌中，除芽孢杆菌外，虽然它们在分类学上属于不同的属种，但都有一些共同的特点，如菌体为球形、短秆至棒状、无鞭毛、不运动、不形成芽孢、呈革兰氏阳性、需要生物素做生长因子、在通气条件下培养产生谷氨酸。谷氨堪酸发酵片机制谷氨粱酸的梳生物栽合成品途径歇大致嫩是：途葡萄杜糖经EM痛P途径或HM矿P途经帖生成瓜丙酮择酸→振再氧屿化成蜓乙酰东辅酶A→然后夹进入TC壳A→再通需过乙醛软酸循医环、CO查2固定作寺用→生宇成a-酮戊丛二酸瘦→谷氨孔酸脱叙氢酶的催朽化及趟有NH匪4+存在造的条狸件下挂生成鱼谷氨届酸谷氨涉酸生面产菌铺能够钟在体痛外积阔累菌竹体最恩大生撕长需蜘要量30背0多倍箱的谷投氨酸丸，研赏究发黑现：曲大量铅积累绕并非含是当躲初设软想的蹲由于光特异霉代谢拦途径趟导致励，而抗是：代谢生调节为控制；细胞拉膜通松透性焰的特财异调废节；发酵搭条件肝的适防合。谷氨食酸菌种唐的定旨向选车育改变苏细胞靠膜的墓通透珍性：生物昼素（太乙酰Co规A羧化用酶的流辅酶断）营糠养缺眨陷型狸株丧失幕脂肪加酸合佳成酶宁的油舟酸缺便陷型；丧失a-磷酸使甘油愁酶的忍甘油列缺陷基型。选育控温度锋敏感陶突变盘株：例：蹄使用学典型泊的温花度敏攀感突泥变株TS名-8庄8生产收谷氨酸时宿，通日过控夫制发医酵条派件，杯在生鸦长适翅当阶碍段将茎发酵温楼度由30℃提捕高到40℃，可在旅生物工素含拍量为33福ug缺/L，含毯糖3.越6%的甜复菜糖圣蜜发致酵培走养基晒中，产生20辟g/陵L谷氨除酸，练对糖个转化病率>5吸5%。生物中素对硬谷氨狼酸发纽奉酵的爆影响生物仆素作为村催化脂肪指酸生冬物合接成最初女反应够的关驶键酶——乙酰Co脊A羧化将酶的泡辅酶，参旅与了宴脂肪刚酸的卫生物合佩成，石进而财影响突磷脂脉的合旺成。气当控盾制生源物素保在亚适量妨时，悠脂肪盘酸合诵成就祸不完不全，您导致盏磷脂屿合成灰不完全。而细射胞膜岸是由补磷脂扬双分被子层麦组成凯的，惜当磷弃脂含量减搞少到锹正常考时的翅一半抖左右隐时，杜细胞察发生哗变形秤，谷氨酸提能够食从胞幼内渗糠出、糠积累食于发禽酵液价中。会如果遭生物素过群量，筑则发个酵过提程菌庸体大崭量繁讨殖，螺不产章或少肉产谷氨酸草，代谁谢产仆物中至乳酸院和琥伶珀酸穴明显正增多。生物毁素亚携适量轿的原则因（2u殃g/骡L~掩5u增g/匀L）：当生遗物素反缺乏距时，丛菌种需生长典十分恰缓慢；当生抄物素苏过量迎时，阻则转手为乳后酸发因酵。在谷午氨酸握发酵介过程氧中，竖影响见菌种蛙代谢素途径却的因素蜡见下旦表。第3暮6页脑，共书69腹页防止钢噬菌炊体和语杂菌闭的污恰染谷氨爷酸生切产菌甲一般都锯是生茎物素潮缺陷甲型，欣而在屠发酵培泊养基再中又游大多歇是控绞制生虏物素斤亚适化量，考所以谷氨泻酸生短产菌粘对噬碌菌体浙和杂荒菌的敲抵抗胃能力纤较弱。最怕富污染箭噬菌恋体，材轻则舍出现盘谷氨铃酸收漫率低译、难提取忠，重斗则倒偏罐，灭造成退很大见的经奏济损醒失。括所以，冒杂菌曲和噬僚菌体锻的防报治工弦作就街显得呜特别愁重要。一定血要从器空气稻过滤蛮、培饺养基抬、设溜备、回环境宴等环节严纽奉格把色关。最常用送的工吊业微心生物酵母让菌酿酒尝酵母假丝辈酵母烦属产朊相假丝溉酵母解脂证假丝朝酵母热带伍假丝协酵母毕赤浑酵母贷属、撒汉逊柜酵母枝属：育酒精巨发酵要工业骑及酿膝造工砍业的遥有害侧菌1、酵骗母菌件形态夜：酵母命菌是易一群祥单细骑胞的级真核遮微生犯物,其形莲态因种灯而异.通常巨为圆旨形、铺卵圆护形或猜椭圆唇形。也有欺特殊扇形态就，如辨柠檬蹦形、币三角闭形、菠藕节淡状、系腊肠冷形，章假菌骡丝等餐。酵母惜菌假菌注丝:酵母格菌在屿一定距条件土下培壶养，饿产生晨的芽逮体与谣母细屡胞不滑分离就形成注的特种殊形历态。啤酒揉酵母央的菌珍落红酵敏母的弯菌落各种屯酵母戏菌的荐菌落酵母饭菌菌贼落最常用伍的工境业微哨生物霉菌曲霉问属米曲米霉黑曲塔霉青霉齐属青霉涂菌：钉点青纷霉、织产黄冬青霉桔青午霉根霉抱属德氏屈根霉米根甜霉、剥小麦胡曲根尸霉红曲茶霉属紫红达曲霉最常用汉的工沫业微蹄生物放线捞菌链霉国菌属小单奋孢菌驴属地中欺海诺独卡氏陵菌米苏工里游石动放棕线菌未培悬养微例生物定义朵：指秃迄今摔所采班用的携微生笋物纯光培养仅分离剪及培险养方跌法还扔未获开得纯奔培养坛的微槽生物融，其诵在自酒然环隔境微驰生物帮群落狐中占庸有非深常高载的比养例，杯约为99％。研究它方法①模膛拟自辞然培颜养法:原位靠培养臭、培乳养条培件优佛化、单细孕胞操彼作②宏续基因葬组分云析法二、班发酵联工业薯菌种船分离润筛选赏原则的与基厦本技园术（一）发酵祝工业水菌种脆筛选肢的总糟趋势敬与要疫求（二）分离侧筛选决原理鲜与技蛾术（三）应用界举例1.菌种隙选择沸的总箩趋势野生驻菌→馋变异晚菌自然接选育兔→代每谢控族制育眠种诱发话基因废突变拾→基牲因重袭组的徐定向杯育种纯净健壮产量质量稳定2易于控制培养条件,周期短3对诱变剂敏感4抗污染力强5原料廉价,生长迅速,目的产物产量高6不是病原菌12、微屋生物砖工业蔑对菌厅种的里要求7产物分泌型工业研菌种吨的改壶良方隐法解除臂或绕辈过代笋谢途阔径中绘的限呈速步哭骤：鸟通过睡增加标特定倚基因修的拷滨贝数逮或增乖加相浩应基皇因的撒表达繁能力蓄来提命高限岭速酶估的含荡量；垮在代拘谢途责径中犯引伸长出新小的代耻谢步胆骤，泉由此度提供妻一个拣旁路允代谢孟途径滤。增加园前体蜘物的做深度棋。改变枣代谢械途径裤，减菊少无佳用副睛产品阿的生胡成以型及提哲高菌雀种对驴高深厅度的震有潜狸在毒宇物的辛底物惯、前歪体或菜产品妥的耐梅受力仅。抑制瓶或消酒除产歪品分棚解酶飘。改进亩菌种漆外泌丽产品档的能刷力。消除酸代谢即产品返的反涌馈抑夸制，轧如诱忽导代董谢产苗品的查结构革类似越物抗论性。工业切菌种罗的改旅良方之法（二猜）分离肺筛选邮原理锄与技刻术1.筛选忘的指导脆思想2.分离臭筛选每工作译在实恳际中栗应用无的几榆个方设面3.新种腿分离男筛选您原理创与技扭术1.筛选需的两疯种指办导思粒想先分预离纯虏化，明再结酸合工稳艺要理求进拌行筛旱选。分离由纯化唯同时椅富于轧筛选脉条件歪，一寨步得轿出所别需菌旷株。结果脊有两跃种可厅能：获得浑适于谢工业适发酵嚷菌株只获作得选火育所称需的洲出发尘菌株2.分离权筛选冶工作果在实恐际中兄应用萍的几粥个方链面从被阔污染否的生装产及锯科研合用菌略中分险离目告的菌跑；生产积中长芬期使翁用的乱菌种柄的定马期分裳离筛碌选；从各娇种育络种方属法处舅理的讯微生仰物材和料中助分离梳筛选罪适于趋工业毯目的悲的优舒良菌纯株；从保甲藏机狮构获拦取菌疼种好处富：经届济性均、指叙导性从已不知菌灵种和杂大自亚然中痕分离爸新菌蜻株寻找永新的头发酵砍产品蹲的产叮生菌深；寻找冬老产围品的姑新的脏优良罢菌株经。国际焦承认讯的中穗国培饥养物丘保藏败单位武汉况大学腾的捡中国热典型银培养所物保吵藏中滑心CC需TC以C。保牧藏了拨几乎肃所有航的培宫养物赤。(CCTCC)国际墨承认旷的中任国培帜养物畅保藏曾单位中科尖院微叨生物箭研究棍所的泊中国史普通低微生皂物菌汗种保贪藏管显理中肆心CG傅MC延C。保个藏有竞普通僻菌种项。(CGMCC)此外栗，较披著名跪的中言国培坡养物病保藏巧单位钓还有中国挠微生余物菌叉种保谈藏管公理委够员会CC失CC尖M—弄—管理开机构3.新种痒分离凉与筛倡选的僻步骤调查狸研究摸（包征括资语料查趟阅）试验店方案灰设计含微址生物上样品高的采票集（如纲何使度样品展中含由所需加微生物梁的可芬能性否大？邮）样品挪预处校理（如何瓶在后图续的仁操作还中使每这种挥可能性愈实现降）菌种茅分离根据国目的兔菌株垮及其敏产物咽特点壶分选择泡性分术离方泳法未随机欺分离惊方法(定向声筛选士←选灾择压欧力)(用筛企选方伍案-检测嫌系统职进行堡间接遵分离恶）富集秘液体快培养合固承体培蜻养基姓条件纸培养(初筛)菌种瓣纯化复筛菌种倦纯化初步毛工艺覆条件丽摸索朴再复记筛掘生产芦性能愿测试较优兼菌株1-妙3株保藏区及进肺一步忙做生嫩产试处验均某些纵必要费试验陈和或作废为育醉种的壁出发翠菌株衔毒性创试验萍等（1）含晋微生弄物样狐品的遍采集采样文时应王注意药的问究题:土壤爱微生紫物的航分布采土辰深度令：5~咏25短cm土壤沟植被仇情况采样娇季节土壤洋的酸稿碱度对于躺分离帽筛选姻新菌挠种，出还存鱼在另桐两个室选择宇标准填：土壤俭来源焦广泛在已斩适应议相当总苛刻扁环境姿压力槐的微哭生物选类群纵中寻密找新咐菌种采样1、采午样对价象以采酿集土炸壤为量主。关一般追园田喝土和绢耕作帜过的器沼泽霸土中滤，以关细菌防和放粪线菌从为主书；富凭含碳污水化俘合物慰的土钞壤和逗沼泽普地中乳，酵绕母和庄霉菌弯较多伟，如事一些享野果战生长妇区和掉果园位内。租采样园的对竭象也倡可以貌是植股物，朋腐败犬物品双，某华些水椅域等通。细菌绣（108）>放线广菌（107）>霉菌榆（106）>酵母今菌（105）>藻类省（104）>原生骆动物积（103）从自舒然界箩筛选2、采艰样季蝴节：担以温掘度适喷中，念雨量叨不多誓的秋扒初为轰好。3、采魄土方并式：球在选夸好适压当地涝点后秤，用桃小萨四子除算去表食土，搁取离玻地面5-蒜15到cm处的提土约10浓g，盛入徒清洁谣的牛奸皮纸城袋或索塑料任袋中烤，扎陕好，享标记泊，记气录采丙样时犯间、血地点金、环妹境条太件等且，以研备查钱考。暴为了浩使土肚样中桌微生旺物的亚数量斩和类另型尽嫩少变莲化，怜宜将舍样品辣逐步煎分批供寄回谷，以盐便及冶时分从离。（2）样羞品的预处窜理目的针：提耕高分祖离效饱率方法怕：物理醒方法破：热夫处理架；膜嘴过滤学法；碰离心夫法化学抢方法勇：化钢学成红分增毫加特博定微血生物爽的数锐量诱饵猴法：半富集析目的列菌膜过州滤法当样粱品中勾菌数杰很低敞时,可以秀将一蓄定体正积的壁湖水拆、海艘水或票饮用绒水等率样品藏通过隔膜过题滤器,然后冶将将仆膜转山到相酸应的猪培养版基上印进行盟培养,对形甜成的窄菌落圈进行溜统计跨。例如丧：放分线菌库的分扎离筛婚选，睡培养并基的盲组成糟原则大多登数放庸线菌钉的分逐离培爪养是俘在贫遮脊或厨复杂驶底物珍的琼病脂平橡板上车进行菠的。羞除嗜敞温性拌放线猜菌外四，其榴他放毕线菌释一般广在培顺养4-委20天内额在分革离平灯板上殖缓慢草形成与菌落咽。在放窄线菌绘分离届琼脂茂中通半常都聪加入鸡抗真漫菌剂辩制霉违菌素定或放扒线菌俗酮，循以抑互制真煮菌的殖繁殖猪。选择避性地削添加纹抗生额素。分离小琼脂舞平板丑制备裁好后裤，一昨般皆尾应在37挪℃培养绣箱中淋存放3天。放线添菌的非分离土样滩中放盲线菌亭的非能选择材性分紧离：蠢土样润风干寸，磨戚碎，压无菌腐海绵玻压印简土样部后压欧印平猎板后但培养漂。植物雨体上按放线挎菌的绞分离纤：无川菌取艰植物椅组织情，干券燥以得减少煮细菌箩数量计，剪文碎植忧物材崖料后首植入漆平板鹿表层糖后培臭养。越也可巧洗下侄微生型物后莫振荡尺培养相。水中鲜放线填菌的孩分离帖：激为使绑所要窑分离摩的放纳线菌训的数启量种胜类增逼多，突一般系将水遇样离线心或肺滤纸把过滤念，取艘离心调沉积咬或滤惩纸表院面沉恨积进欢行系祸列稀废释和态涂布决。次代绿培养丧及纯悦化菌落辱形成庸后可划根据盛肉眼甲可见赞的菌摇落形唤态上违的差壁异，泰作初忆步的授鉴定怨和区青分。通过发高倍嫌放大廊进行茧镜检该，可希了解毙气生汤和营嗽养孢例子形竞成情茅况。成功桐地分委离出芽各种跨不同偶的放废线菌旅属及子种的玩关键例是所惧采集案样本从的本老身及沿其分级离用业的琼槐脂培慈养基室；而裂肉眼向识别驻不同名的生挂长形倍态、道从而甚初步队地加阴以鉴营定，盟在分榨离放盏线菌萝时显潜得尤禾为重添要。将分苦离平冻板上痒所形础成的删菌落比用经水火焰附灼烧晌灭菌踢的钩昏形针孕或无朱菌牙脑签挑必取，傻点接鸡到琼内脂平劈燕板上扮进行莲影印妈培养扭，以严进一体步筛施选和筑分离蓄。（3）分费离方脊法的幅选择根据军目的谨菌有呢无选花择性宵特征杯来选您择分录离方坛法菌种伤的营妈养特书征独箱特生长齿特征摩独特无选择熟性特叶征必根据庭产物淘的特笋征进椒行随机僵分离选择芝性分焦离的狮关键抹：生舌长培益养条牢件的留选择惕与控瞧制，筋从而撒实现蔬定向呀富集横筛选为。选择俊性分健离A、选择载性分帆离原消理和置技术1、生央长条富件的赠选择是与控底制原广理控制敌营养读成分控制瘦培养宴基酸葵碱度添加迁抑制压剂控制器培养肠温度控制惧通气岁条件2、选猴择性蜻分离促技术富集腾液体嗽培养技术固体徒培养势技术施加鹿选择牌压力唇，进倾行定牛向筛煮选①富征集液忆体培遭养增加兵混合筑菌群什中所抛需菌畅株数观量的比一种月技术技术桃特点毒：给混吨合菌我群提结供一屯些有谨利于脚目的轰菌株巾生长验或不细利于牛目的拆菌以豪外的学其他纯菌型喝生长佩的条亩件培养莲方式分批必培养咱方式铜：以匠最大稿比生铲长速温率叫（μma窃x）筛选于，存晓在选照择压奶力的令控制惯、移廉种时德间和角次数松等问缓题连续朴培养门方式泰：以稼比生焦长速夸率（μ）筛选μABS0基质凯浓度体对A、B两种当菌的裳比生叔长速吹率（μ）的影继响当S<捐S0时，晨富集什么菌株景？当S>闲S0时，花富集什么菌株的？连续歉培养凝方式拐：以舞比生岂长速邻率μ筛选连续伞富集烘培养们技术陡分离延菌株负的优照点分离借的菌母株特浆别适真合连拴续发录酵生泡产过痛程有利您于分腿离具扔有某语种工爷业生宾产特星性的译菌株可以赤筛选友出能抽共生价的稳柿定混食合培蛛养物②固体掉培养夸技术常用袍于分佛离某渠些酶绪产生葛菌选择字压力蚀：在番选择往培养悠基中齐加入扎所需搭酶的誉基质随机牵分离亿原理边与技架术从产渔物入浴手，遇通过安设计高产灵培养萌基和建敲立快赌速灵近敏专搁一的报筛选搏方法巷，从谅随机配分离劳的菌墙落中读筛选辩出所居需的钉目的耽菌。技术关键担：产岔物合鸭成条帖件的箭选择芽与控盯制及锁相应物筛选催方法以的确醒定。随机设分离蚊技术译举例抗生陪素产谊生菌伶的筛掀选药理臂活性伏化合涌物产储生菌铃的筛训选生长够因子剑产生笋菌的励筛选多糖扑产生统菌的院筛选高产仇培养档基设游计的难几个现原则制备柱一系右列的粥培养百基，息其中豪有各剃种类煤型的如养分阅成为庆生长赖限制阳因素克；使用一聚合初或复造合形尘式的学生长总限制诸养分翅；避免堤使用乏容易蜻同化埋的碳垒源或这氮源体，防普止分礼解代喘谢物险阻遏胀；确定取含有使所需物的辅唉因子瓜（Co2+,M赶g2+,M立n2+,F税e2+）；使用pH缓冲府剂以墨减少pH变化捎；前体坛、促滩进剂舰及抑欧制剂代的采糖用。抗生蹄素产铲生菌刮的筛缘瑞选筛选辈模型渠：试验课菌筛选科方法碰：铺菌宝法复印抗平板凑法液体垂培养肠筛选抗药芒性筛选筛选呆模型尸：氨苄探青霉辨素和β-内酰衰胺酶产生宣菌（敢克雷邻白氏混菌）胆协同I籍II无试猫样时午（不谱含棒女酸时长），I对II菌作乳用不呈大有试届样时萍（含存棒酸突时）躺，I对II菌恢真复药薪效，祥棒酸耽抑制馒水解恐酶活帆性固体句培养索筛选试验畅菌娃代表肯微生男物类朱型金黄呜色葡贞萄球代菌20涝9p革兰递氏阳谱性球桐菌枯草惠杆菌66祝33革兰泥氏阳壤性杆例菌大肠券杆菌妥革辜兰氏微阴性画肠道剂细菌耻垢第分枝款杆菌60艳7结核括杆菌白色缓念珠龙菌寺酵堆母状侵真菌青霉喷菌丝状组真菌药理的活性丛化合割物产曾生菌购的筛蜂选药理毫活性众化合赌物是劝指能繁抑制胳人类惯代谢志中某挽一个忽关键叫酶的城微生河物产启物即蛋酶抑越制剂鄙，从混而达洋到治宋疗的贡目的黑。筛选雕模型跪：目管标酶生长泻因子呆产生加菌的砖筛选筛选影模型物：营否养缺匙陷型恒试验佳菌筛选帽方法塌：利镇用被宣分离谱的微货生物拢产物镜能否私促进荡营养照缺陷歇型试弹验菌嗓生长氨基坐酸产咏生菌陆的筛视选样品预处站理初筛逆（除遭真菌刊）在分按离平递板上赛生长疲获得捆多个翼单菌号落复印炸平板（co禾py法）平板悲培养票，其承中有直产生绿氨基泳酸的菌玩落分趋泌氨遥基酸对应拣到co啄py前相戚应u.孟v线杀父死长猜好的堂菌落位置洗，找隶到目餐的菌减落再铺暗上一隐层含魂营养牌缺陷有型试吗验菌零的琼状脂培养原后产氨灿基酸筐菌落辽周围吸有生种长圈目的测菌落鞭进行泥液体拖培养袍，对产露物进丽行定航量测虾定筛选驳产物哈含量留高的扮菌株多糖弓产生救菌的殿筛选取样迫特点口：碳横水化强合物宫工业惠的废扣弃物筛选棍方案移：从修菌落岔外观炒判断谣，选稀择外敏观呈目粘液最状的灭菌落缝，然蓬后根法据液花体培乔养测避定多廉糖含伏量来头筛选换高产够菌。4、几犹种典限型微杰生物副的分妻离筛诞选方毛法举回例细菌放线男菌真菌细菌宫分离拢：以仙乳酸搭菌为我例取未乏成熟去的酱瓜醪样绢品1g至无赖菌磨欧口瓶搬中加麦落芽汁歇至瓶客口处馆，封察塞，25盖℃培养24碑-4胞8h培养载基中原长出寸绢丝握状波尤动物聚，镜咐检洽杆状停，阳顶性染蕉色止初步画断定洒乳酸牌菌用选涛择性门培养撤基分勇批富桑集培翅养2-贩3代稀释秀分离命法分版离单光菌落扰，培这养基贞为含钩麦芽老汁、Ca尿CO3的琼脂甲培养遭基根据动透明搅圈挑届选菌村落性能释测定炼（镜胶检杆煎状，棍染色新阳性拐；乳念酸纸州层析沈鉴定伙）Rf值定费性（有匆机酸挡呈黄铲斑点睛）乳酸固生成犁量测惠定（执滴定秒法）放线台菌的浙分离询：援以产商链霉散素菌枕种的净分离因为例从（欲从退抚化菌日种中持筛选保）取工君业发糊酵液涂（含伞孢子针）样驶品1环放入僵带玻货璃珠自的装告有10特ml无菌受水的丑小三瞒角瓶洒中，踪蝶摇匀采用谨稀释建法制逢平板社，获泛取单邮菌落斜面缩慧保藏娱高凑产菌撇恢复根据舰高产元菌的熄特点景，选皇择目披的菌环落放大浮培养赶，发拘酵液逝性能读测试筛选代模型迈：形类态依侄据真菌齐的分惊离筛烘选：是以啤介酒酵致母的若分离耳为例取发质酵液坐少许柴以10倍稀兵释成10-1-1就0-7稀释录分离夺法取0.先1m骡l加入柿固体餐培养毛基铺桃平皿拖（×2）在麦径芽汁茅固体猾培养俱基上亿，25驰℃培养48腿-7找2h形态想筛选岁根据护正常家株特虽点进霜行挑速选，派接种猫斜面凯备用纯化扛，采怕用平芹板分侄离法敌进一哗步纯世化，纯至少忙反复就三次①生碎成子艇囊孢同子速春度测肆定胃②发警酵力舍测定性能免测定昌③热叔死温郊度测史定④凝氏集力宁测定⑤双无乙酰型含量真测定菌种挥选育晃改良瓜的具尤体目抬标提高世目标搅产物途的产郑量提高巷目标童产物困的纯姥度，趣减少客副产册物改良府菌种己性状跨，改悉善发呆酵过钳程改变礼生物颈合成抱途径偿，以陡获得演高产阅的新打产品第二调节慎发奔酵高利产菌抓种选牢育常规量育种(诱变纱育种)细胞侦工程夜育种基于篇代谢乐调节南的育剂种技尸术基因亭工程啄育种蛋白首质工拌程育匠种代谢灯工程浴育种选择辱育种争方法符时综狐合考组虑的康因素(1边)待改怕良性雷状的铅本质服及与贺发酵龟工艺宿的关遭系(如批斜式或拔连续讲发酵周试验)；(2暴)对这芽一特兵定菌奸种的纽奉遗传杆和生曲物化爹学万苏面认贵识的考明了尖程度凡；(3污)经济可费用斥。如果数对特量定菌妖种的捏基本杏性状殃及其更工艺玻知晓踩甚少阻，则恋多半质采用纽奉随机窜诱变啊、筛处选及剃选育描等技碗术：如果挠对其暗遗传年及生认物化姑学方繁面的颤性状龟已有袜较深例的认定识，采则可垮选择戴基因削重组工等手鸣段进睁行定归向育达种。诱变粘育种以微跌生物异的自记然变说异作庸为基僚础的好生产瘦选种察的机桂率并偿不很牌高，洞一个狭基因躲的自隔然突先变频阳率仅10-6-1耍0-1闯0左右肤。诱变盖育种孔：以闹诱发练突变工为基到础的茂育种请，是旁迄今骑为止圣国内泄外提膛高菌厘种产警量、遗性能辜的主鸟要手森段。诱变物理柜、化绸学或从生物余诱变冻方法一、步诱变舅剂和赏诱变即处理物理具诱变谷剂：贪射线缎如紫乏外线爬、X—射线律、γ—射线筹，快候中子沸；物理悟因素哪中目脑前使疲用得滔最方博便而远且十绵分有忽效的疫是紫引外线尺。许粮多高遗产菌源株的糟选育放都用栋过紫芳外线酿，对随于一厉般实城验室需、中浑小型瓶工厂锄都适婆用，闷也很跃安全督。其他傅的几缺种射蛮线都助是电滔离性勾质的独，有撤一定撕的穿啄透力繁，一吼般都文由专舒业人碗员在僻专门垮的设接备中澡使用街，否类则有虾一定夏危险型性。化学忽诱变艺剂：化学解因子聋如碱锐基类按似物沟、5—氟尿的嘧啶捧、烷犁化剂肾等。化学喘诱变管剂中面使用叉最多默、最管有效已的是挨烷化丽剂。使用栗化学印诱变侦剂的异优缺批点：1、大远多数巩情况饶下，蚁就突亦变数凳量而完言，概要比辛电离气辐射姑更有咳效。化学谢诱变吉剂：化学补因子激如碱涝基类擦似物绵、5—氟尿芦嘧啶彻、烷创化剂魂等。乏化学尝诱变耻剂中深使用亡最多饱、最拢有效图的是粉烷化役剂。1、大贡多数炊情况惩下，旬就突垮变数征量而于言，你要比涂电离英辐射毛更有甘效。2、化慰学诱腊变剂途是很赏经济粱的，从因为幼只需艰要少轮量的叉合适拐的诱献变剂椅，设改备是扎实验糖室的抖一般婚玻璃朋器皿悦，一附个蒸互气罩富。而恒用电能离辐变射±行工殿作时颠，设租备费婚用大纺，并终要注桨意安莲全性浪。3、大敌部分彩诱变浇剂是失致癌塞剂，念所以泼在使从用中累必须衰非常叠谨慎薪，要析避免非化学场诱变复剂与颜皮肤悄接触梦，，向且切轿勿吸飞入其减蒸气增，有腹人对情某些德诱变皇剂极挠其敏辟感，丝式甚至建未直穿接接合触就赌会过像敏，林这就辞更要询当心凡。诱变技剂的韵选择1．碱搞基类攀似物衔和羟远胺具技有很掉高的治特异遮性，漠但很匆少使窄用，浪回复买突变氧率高俊，效挥果不杯大。2．亚亦硝酸誓和烷蚕化剂出应用算的范沃围较哥广，绿造成下的遗余传损涝伤较墓多。奔其中纳亚硝石基胍闲和甲馆基磺心酸乙宇酯常荒被称速为“起超诱荐变剂茄”，浴甲基雨磺酸孕乙酯料是毒卷性最标小的摄诱变乳剂之托一。3．吖借啶类曲诱变鱼剂可鞭以造涝成生妖化代废谢途厕径的支完全押中断罚。4．紫眉外线供仍十粮分有议效。输电离府辐射魄是造打成染效色体怕巨大排损伤沙的最爆好诱巧变剂春，它你能造放成不满可回断复的疏缺突绒变。兵但它税可能抬影响灰邻近视基因摄的性蹦能。诱变蚀育种华的基么本方变法出发店菌株烘的选狐择处理破菌悬蔑液的机制备诱变锤处理中间己培养分离炼和筛研选(一)出发膏菌株夕的选欢择1．自许然界碌新分粒离的哗野生斥型菌缘瑞株，宴对诱德变处鞠理较彼敏感熟，容悄易达马到好短的效蚀果。2．在碗生产排中经住生产闲选种肠得到享的菌送株与绢野生定型较地相像议，也久是良架好的抄出发卡菌株良。3．每勉次诱户变处拳理都颠有一槐定提孕高的勇菌株浴，往毯往多先次诱秀变能开积累刃较多惩的提惑高。4．出皆发菌亭株开毁始时天可以奶同时齐选2～3株，肃在处欠理比愁较后连，将鉴更适掉合的宴出发如菌株唐留作境继续完诱变撇。5．要毯尽量呼选择料单倍恨体细萍胞、碎单核江或核射少的向多细铃胞体翁来作袋出发搁诱变累细胞筋，这昆是由名于变饭异性穿状大棚部分碑是隐圾性的而，特泳别是脚高产摧基因胞。6．根委据采肚用的册诱变伏剂或超根据黎细胞伏生理低状态才或诱崇变谱僵选择骑诱变告剂，朋因为造同一社诱变股剂的找重复益处理粉会使银细胞地产生境抗性半，使溜诱变吵效果叠下降话。有径的诱痒变剂霞是作萄用于恶营养乓细胞逗，就摘要选旱对数火期的酷细胞返：有叶的作眉用于惹休止益期，息就可从选用摄孢子跳。(二)处理划菌悬短液的洲制备这一怎步骤叫的关哈键是促制备荒单细括胞和战单孢猎子状育态的狂、活访力类赏似的迫菌悬江液，桃为此虾要进挎行合错适培息养基服的培舞养，遭并要泳离心渔，洗牙涤，库过滤示。(三)诱变博处理结合你诱变热对象润的实柿际，吩设计皱诱变撑处理竟方案当。(四)中间懒培养由于基在发速生了还突变读尚未运表现列出来亏之前棚，有厘一个收表现逮延迟进的过恳程，存即细霜胞内仗原有剪酶量悲的稀潮释过回程(生理言延迟)，需3代以材上的颤繁殖狱才能植将突翅变性群状表喉现出撞来。补这个所过程叙对今这后的用筛选斤和获差得稳诉定菌拉株都鸟是极谁为重绵要的侵。方法启措施缘瑞：让变脖异处好理后为细胞员在液切体培火养基罚中培帜养几凶小时欺，以典让细离胞的跌遗传貌物质喉复制召，让垂细胞汇繁殖走几代不，以上得到忠纯的胡变异睬细胞榜。这样偶，隐抹性的折变异兴就会抛显现储出来词，若注不经占液体拌培养愤基的闷中间借培养余，直元接在投平皿仪上分辽离就彼会出跟现变脏异和怕不变遮异细炼胞同鬼时存潮在于共一个貌菌落爹内的做可能医，形坟成混烧杂菌询落，幼以致盟造成夏筛选脸结果匹的不秃稳定救和将遣来的舒菌株蚁退化溪。(五)分离帝和筛夸选筛选际分初绝筛和缎复筛浴。初芒筛以功迅速奇筛出旺大量推的达当到初墓步要罚求的岗分离喘菌落铃为目劫的，博以量乐为主匪。复筛纯则是优精选书，以略质为县主，失也就锣是以携精确介度为达主。功因此外在具赤体方厦法上装就有锦差异.例如袋初筛箩可以页在平哨皿上闲直接彼以菌杜落的记代谢杨产物盗与某爬些染敢料或积基质息的作雪用形慰成的较变色铁圈或堡透明览圈的映大小身来挑严取参枝加复际筛者羞，而主将90座%的菌帝落淘蛇汰。弊在数那量减乞少后梦就要间仔细芬比较卖参加多复筛离和再权复筛秋的菌叠株，锤最后痰才能恒选得怨优秀预菌株知。在肢以后筛的复升筛阶邮段，锄还应伙不断晓结合掘自然玩分离疗，纯漂化菌谁株。（1）鼻营养颜缺陷仪型的狗选育营养熔缺陷境型是果指通赚过诱裁变而孟产生耕的缺胜乏合国成某瓣些营额养物势质如园氨基岂酸、辫维生签素和宽碱基藏等的册能力吓，必获须在迫其基兼本培鉴养基挖中加土入相射应的滚营养踏成分警才能串正常偏生长腰的变哥异株君。与营朋养缺脊陷型胞对应狭的是互野生琴型。能满壶足野诊生型购菌株械正常蚕生长生的培刮养基黑称基瓜本培而养基(M凯M)；在基匪本培挂养基别中加挪入相移应的筛营养蜜成分的的称追补充揉培养质基(S泳M)；能满缴足各除种营包养缺污陷型粱生长馆的称醒完全简培养慢基(C球M)，如浴牛肉伍膏蛋震白胨隔培养叔基、酒麦芽撞汁培喉养基虹等。营养建缺陷肠型的婶用途营养落缺陷惠型在崖生产著上和冠科学讲研究勉上用坊途很眠大。宣目前梯生产久氨基纠酸、各核苷滩酸的总菌种洗都是符各种笛类型怨的缺详陷型攀。要台研究拿代谢欧途径题，育然种技寄术都饼必须肢有营乒养缺峰陷型奸的菌昌株为府材料稼。筛选吨营养身缺陷础型的爆步骤诱变淘汰访野生炸型检出舱缺陷属型确定艰生长怜谱具体施方法购：影战印法快、点绒种法悄、夹亏层法赖氨侮酸生通产菌葬种的爱选育害改良灾思路出发估菌株：黄给色短活杆菌信、谷否氨酸隙棒杆障菌、潮乳糖称发酵落短杆屯菌育种稻思路1.优先暴合成收的转枣换——渗漏帝缺陷材型的谦选育2.切断甘支路帐代谢——营养魂缺陷周型的透选育鼻：高除丝氨堡酸缺垫陷型3.抗结众构类姑似物怠突变养株的帆选育葡：AE挂C4.解除珠代谢伯互锁忠：Le链u-、抗Le爱u结构宗类似担物、御喹啉s、苯醌s5.增加戴前体呆物的倒合成危和阻尿塞副筋产物世的生虏成：Al影a-、抗As拳p结构禽类似猛物选育捞适宜绘的CO2固定洲酶/T瓜CA循环杨酶活京性比竞突变脸株6.改善击细胞针膜的搏透过粒机能7.选育童温度训敏感荣突变到株8.应用宇细胞撕工程拖和基肤因工跃程育仔种选育赌适宜愿的CO2固定升酶/T祸CA循环踩酶活砖性比涝突变泳株赖氨庭酸合滴成中临间代萄谢有杨以下次两条导途径粗：①通过TC渠A循环葡萄拴糖集丙酮能酸送草泼酰乙盛酸再天冬智氨酸赖氨御酸②通过年磷酸淘烯醇帖丙酮层酸羧遮化反段应葡萄派糖办磷管酸烯樱醇饭草家酰乙乖酸凳天冬驰氨酸式丙圈酮酸丙酮害酸赖氨为酸代谢陡工程流的定延义利用竭多基配因重具组技扫术有冻目的料地对雪细胞淹代谢