化妆品抗衰功效评价

化妆品抗衰功效评价1皮肤衰老的特征指标2皮肤衰老的影响因素3化妆品抗衰体外评价方法TableofContents内容大纲4化妆品抗衰人体评价方法皮肤衰老的特征指标01part皮肤衰老的特征指标

衰老细胞发生的变化：细胞形态变大，扁平;与衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性增强、p16上调、laminB1表达减少、HMGB1核移位至细胞质和细胞外液、衰老相关分泌表型(SASP)的分泌，包括炎症细胞因子和金属蛋白酶......年轻和衰老皮肤示意图SASP由促炎细胞因子、生长因子、趋化因子和基质重塑酶等一系列细胞因子组成皮肤衰老的影响因素02part

内源性因素

内源性引起的皮肤衰老又叫自然老化，其主要决定因素是遗传、年龄增长以及重力、内分泌以及免疫功能疾病等不可抗力因素。

自由基是普遍存在于生命有机体中具有高度化学活性的中间体；在正常生理条件下，体内自由基的产生与消除处于动态平衡。

若平衡被破坏则会导致过量自由基的产生；过量的自由基对染色体、线粒体、细胞膜和结缔组织等生物组织的毒害性攻击会引起机体的衰老。自由基学说

糖基化造成的蛋白质的交联损伤是衰老的主要原因，产生的高级糖基化终产物不仅会直接影响细胞和组织功能，参与疾病的产生，还会通过与特异受体结合来改变蛋白质和细胞功能，导致机体的病理变化。非酶糖基化衰老学说外源性因素化妆品抗衰体外评价方法03part一、基于人皮肤成纤维细胞的抗衰老功效评估成纤维细胞中自然老化和光老化中的区别

人皮肤成纤维细胞具有合成和分泌胶原蛋白、弹性蛋白以及糖胺聚糖等胞外基质的功能，细胞外基质在维持皮肤韧性和弹性方面起着重要的作用。1.体外增殖能力检测

成纤维细胞除了分泌胶原纤维、弹性纤维维持皮肤弹性之外，还有趋化性和粘附性，对维持皮肤的弹性和韧性具有重要作用，HSF的数量减少是引起皱纹产生的重要原因。真皮中成纤维细胞的数量及活力均会影响胶原蛋白的分泌、胶原蛋白纤维的数量以及胶原蛋白纤维束构造。成纤维细胞生长因子是其增殖最有效的刺激因子，可以作为实验的阳性对照，评价化妆品是否有效刺激成纤维细胞增殖。2.胶原含量检测

胶原蛋白是细胞外基质中最活跃的成分之一，是创面愈合和瘢痕形成的关键因素，在皮肤修复功能中起重要作用。正常成人皮肤中HSF分泌的胶原主要以Ⅰ和Ⅲ型为主。其中Ⅰ型胶原是构成正常成人皮肤的主体，而正常胎儿皮肤主要由Ⅲ型胶原组成。

胶原含量的测定有多种方法，通过ELISA、westernBlot和免疫荧光等方法可分别精确定量体外培养的HSF分泌及细胞本身胶原含量的变化。3.抗氧化功效检测正常人体细胞每天生化代谢产生大量的ROS。细胞中过氧化物酶发挥了清除ROS的功能，起抗氧化作用。其中超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）在自由基生成的起始阶段发挥预防性作用，而谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）发挥抗脂质过氧化作用。通过流式细胞术直接检测HSF内ROS水平的改变、通过比色法检测SOD，CAT

和GSH-Px等酶活性的变化，均能灵敏反映出化妆品抗氧化功效。4.其他衰老相关生物指标检测

衰老细胞通常体积变大，溶酶体衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）酶活性增高。采用免疫组化法观察β-半乳糖苷酶染色细胞的颜色变化以及用比色法定量β-半乳糖苷酶活性，可以评估HSF衰老程度的变化。

丙二醛（MDA）是脂质过氧化重要产物，在衰老过程中显著累积，与皮肤老年斑（褐脂质）含量呈正相关。目前ＭＤA被认为是一种重要的衰老生物标记物，通过ELISA法检测MDA含量变化是比较灵敏的HSF老化评价方法。二、基于三维皮肤模型的抗衰老功效评价抗表皮衰老

表皮模型是由角质形成细胞构建形成，构建完成后，通过低剂量的UV连续照射进行干预，随后对组织形态、屏障相关指数等指标进行检测。体外重组表皮模型的工艺流程及评测指标真皮抗衰

它的特点在于有真表皮结构，可以在体外进行细胞外基质含量变化的检测，从而进行抗衰老原料特别是化妆品成品的筛选。体外重组表皮模型的工艺流程及评测指标体外重组表皮模型的工艺流程及评测指标

人角质形成细胞从年轻向衰老的发展过程中，伴随着DNA和蛋白质的氧化损伤。

紫外线照射可诱导产生活性氧簇，其主要机制是细胞表面受体被紫外线激活后，与相应配体结合并激发下游信号分子，且激活还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶，从而产生大量过氧化氢及超氧阴离子。

活性氧（如过氧化氢）可激活表皮生长因子受体，该过程可被抗氧化剂阻断，且抗氧化剂能阻断紫外线照射后活性氧的产生。

二、基于离体皮肤的抗衰老功效评价①离体皮肤的培养1）首先从临床取得捐献的离体皮肤组织，用皮肤取样器分割成一定大小的单元，用于后续研究；2）对离体皮肤单元进行气液面培养，这是最为关键的步骤；3）培养完成之后，收集离体皮肤单元，进行具体指标的检测。离体皮肤的培养和测试流程包括了天然表皮层和真皮层，真皮层中的纤维包括胶原纤维（95%）、弹力纤维和网状纤维等②基于离体皮肤的抗衰老评价体系

在光辐照的诱导下，皮肤细胞经历高水平、长期的氧化应激损伤；氧化应激和慢性炎症又进一步介导细胞外基质（ECM）的水平降低和细胞功能的老化。

因此，我们在抗衰护肤品设计与评价中，可以从拮抗氧化应激、增加ECM合成、降低ECM降解、以及修复衰老细胞等角度入手。基于离体皮肤的抗衰评价指标化妆品抗衰人体评价方法04part

抗衰功效的人体评价方法主要是筛选特定的志愿者人群如皮肤衰老有皱纹等，然后采用不同的人体检测设备进行多维度的衰老相关指标的评价，通过主观评分、半主观评分以及客观测量等方法进行评估。化妆品抗衰人体评价方法

①抗皱测试

脸部不同部位的皱纹出现时间不同，其中眼角的皱纹出现最早，是评估皮肤老化的关键点。

目前，评价皱纹较精准的仪器包括皮肤光学快速成像系统、皮肤快速三维成像系统，采用基于条纹投影测量技术的3D测量方法，快速获得皮肤表面形态信息，并转化为三维图像，从而获得皮肤皱纹、皮肤粗糙度的指标数据。

此外，还可采用图像成像系统获取面部图像，然后用图像分析软件提取眼角区域的皱纹，分析皱纹的长度、深度和面积等。②皮肤紧致测试

弹性纤维被破坏、皮肤弹性减弱，会导致皮肤紧致度下降，出现皮肤下垂。

皮肤下垂度主要通过对面部正面和仰卧位的主观评估判断。③皮肤弹性测试

皮肤弹性是衡量皮肤衰老程度的重要指标。

皮肤弹性主要由皮肤胶原纤维、弹力纤维的数量和排列关系决定。

使用特定仪器测试皮肤弹性，可以评价产品延缓衰老的功效。④皮肤水分含量测试

真皮层水分含量流失，会导致角质层因为缺水而产生细纹。

健康皮肤角质层的含水量为10%~30%，角质层含水量低于10%时，皮肤就会变得干燥、粗糙，容易产生细纹。

常用的测试皮肤水分含量的仪器有共聚焦拉曼光谱仪等。⑤皮肤颜色测试

皮肤老化后，肤色会泛黄发暗，出现老年斑。

紫外线的照射会促使黑色素细胞分泌黑色素，在自由基和炎症反应的作用下产生晒斑，呈现色素沉着。同时，还原性糖与蛋白质的结合物高级糖基化终末产物（AGEs），为棕色或黑色的大分子物质，出现在真皮和表皮。

评估皮肤颜色的变化，可以间接评价产品的抗衰老功效。⑥皮肤微循环测试

皮肤微循环系统是个复