骨髓细胞学检查本课件

第三节—骨髓细胞学检查

内容

Contents1.骨髓细胞学检查（骨髓分析）2.常用血细胞的细胞化学染色3.常见血液病的血液学特征2主要内容

骨髓细胞学检查：

骨髓细胞学检查的临床意义

骨髓和外周血细胞化学染色

常见血液病的血液学特征：

缺铁性贫血1、贫血

巨幼细胞性贫血

溶血性贫血

再生障碍性贫血3主要内容常见血液病的血液学特征：2、白血病：

骨髓细胞形态学分型（FAB分型）MMICM分型

免疫表型分析（免疫学）I染色体分析（细胞遗传学）C基因诊断（分子生物学)M3、原发性血小板减少性紫癜（ITP）4、骨髓瘤（MM）

4

病例：

患者：男性，41岁，左上腹不适，乏力，消瘦3

月余而入院体检：T37.3C，R21次/分，P68次/分，Bp14/8kPa

肝肋下1cm,脾肋下3cm；

下一步做什么检查？5病例

实验室检查：1、血液常规检验

Hb：150g/LWBC：250×109/L

PLT：559×109/L

分类：

原始粒细胞1%

早幼粒细胞

4%

中、晚幼粒细胞41%

嗜酸性粒细胞8%

嗜碱性粒细胞6%

问题在哪里？

6实验诊断学laboratory78实验诊断学laboratory9实验诊断学laboratory10病例2、骨髓细胞检查

骨髓极度增生以粒细胞增生为主外周血分类：原始粒细胞2%1%早幼粒细胞4%4%

中晚幼粒细胞46%41%

红细胞系统6%

中晚幼红为主

形态正常11病例细胞化学染色：

中性粒细胞碱性磷酸酶（ALP）阴性细胞遗传学检验：

Ph染色体阳性分子生物学（基因）检查：

BCR/ABL112如何分析？如何诊断？原始及幼稚细胞病例分析13最后的诊断

慢性粒细胞性白血病（急性期）14普通光学显微镜15白血病细胞16淋巴细胞白血病细胞17骨髓细胞形态学骨髓细胞形态学检验

细胞化学染色

一种简单、历史悠久的诊断手段18破骨细胞19骨髓细胞201233341---原粒2---早幼粒3---中幼粒4---晚幼粒21骨髓报告骨髓细胞形态学检查22二、骨髓细胞学检查的

临床意义23

临床应用

1．适应症

血细胞减少或增多，外周血出现幼稚细胞；不明原因的骨痛、骨质破坏、肾功能异常、

黄疸、紫癜；

不明原因的发热，肝、脾、淋巴结肿大；血液系统疾病化疗后的定期复查及疗效观察；

其他：骨髓活检、造血干细胞培养、染色体分析、

微生物培养及寄生虫检查24

临床应用

2、禁忌症：

出血倾向、血友病、晚期妊娠

25骨髓标本的采集骨髓取材的部位和方法部位：胸骨、棘突、髂骨等处方法：多用穿刺法吸取26

穿刺部位的选择部位：胸骨，髂后上棘,髂前上棘，胸骨穿刺髂后上棘穿刺27标本采集骨穿针骨髓液的采集骨髓量：0.2mL抗凝：EDTA-K2骨髓涂片3-5张迅速挥干281、骨髓穿刺术常规消毒，局部麻醉29骨髓穿刺术局部麻醉30骨髓穿刺术进骨髓穿刺针31骨髓穿刺术抽吸骨髓液，制备骨髓片32骨髓片制备情况涂片制备良好涂片制备良好涂片制备不佳涂片制备差332、骨髓涂片的显微镜检查

1、低倍镜检查：

（1）观察骨髓涂片质量:

取材：骨髓小粒、脂肪小滴。

制片：厚薄，头、体、尾分布

染色：细胞着色情况34（2）骨髓增生程度分级增生程度 有核细胞：RBC常见原因 平均增生极度活跃1:1 各型白血病增生明显活跃 1:10 各型白血病、增生性贫血增生活跃 1:20正常骨髓像、某些贫血增生减低 1:50 再障（慢性型）、粒缺增生极度减低 1:200再障（急性型）骨髓细胞形态学检查35骨髓增生程度分级(高倍镜）36

（3）巨核细胞计数

巨核细胞的数量:

低倍镜计数，油镜分类；骨髓涂片（1.5cm×3.0cm血膜上）

37异常细胞38各类转移癌392、油镜检查：1）有核细胞分类：计数200-500个有核细胞（增生极度活跃100个增生明显活跃-500个）计算各系统各阶段细胞百分率选择合适部位402、油镜检查：（2）计数粒红比例（G∶E）（3）观察各系细胞形态有无异常（4）观察有无其他特殊细胞及寄生虫。41细胞形态观察①粒系②红系③单核④淋巴⑤浆细胞、⑥巨核细胞⑦其他细胞的数量。⑧骨髓小粒的成份。⑨有无寄生虫及其他异常细胞。⑩全片复查增生情况，各阶段细胞所占的比例、大小、形态、核染色质、核仁、核形、胞质量多与少、浆、颗粒42

正常骨髓象报告：

1)增生活跃

2)粒红比值正常（M∶E2～4：1）

3)粒系增生良好：

a.占有核细胞的40～60%；

b.各阶段细胞比例适当

原粒＜2%，早幼粒＜

5%，中晚幼粒各＜

15%，杆状核百分率＞分叶核，嗜酸性粒细胞＜

5%，嗜碱性粒细胞＜

1%；

c.细胞形态无明显异常。骨髓细胞学检查43

4)红系增生良好：

a.占有核细胞的15～20%左右

b.各阶段比例适当；

原红细胞<1%，

早幼红细胞<5%，以中、晚幼红细胞为主，各占10%；

c．形态无明显异常或成熟红细胞形态大致正常。骨髓细胞学检查44

5)淋巴细胞系统占20～25%；

（主要是成熟细胞）

6）单核细胞系统<4%

（主要是成熟细胞）

7）浆细胞系统<2%

（主要是成熟细胞）骨髓细胞学检查45

8)巨核细胞

a.数量/全片：7～35个(1.5cm×3.0cm)

b.各阶段情况正常；原巨核细胞0～5%

幼巨核细胞

0～10%，

颗粒巨核细胞10～50%，

产血小板巨核细胞20～70%，

裸核型

0～30%，

血小板易见、成堆状存在，形态正常。

骨髓细胞学检查46

8)其他细胞:

组织细胞、内皮细胞、肥大细胞、网状细胞及组织嗜碱细胞等欧间，未见异常。

9)无特殊细胞及寄生虫。骨髓细胞学检查47骨髓报告的诊断价值

肯定性、

支持性、

排除性、

形态学描写

疗效判断48骨髓象检查的注意事项

正确认识细胞

检查者必须反复实践，积累经验，需经较长时间的锻炼才能熟练掌握。

不要根据一两个特点就做出肯定或否定的判断。

宁可看得仔细而少看，不可贪多而马虎。49（四）骨髓细胞形态学的

临床意义50血液细胞51红细胞形态的诊断价值52红细胞形态的诊断价值53红细胞形态的诊断价值54粒细胞系统异常的临床意义55淋巴细胞的异常

(白血病)56红白血病57疟原虫微丝蚴58利什曼原虫弓形体虫59小结骨髓细胞形态学的诊断价值肯定性诊断支持性诊断、排除性诊断、形态学描述疗效判断60细胞形态

主观辨别？61三、常用的血细胞化学染色定义：血细胞化学染色是以形态学为基础，根据化学反应原理,将骨髓片染色,观察单个细胞内在的生化特性，了解它们的代谢活动，生理功能和病理变化.

鉴别各种类型血液细胞62本节主要内容

常见的细胞化学染色及临床应用（POX、ALP、ACP、PAS、SE、NSE染色）

63细胞化学染色方法

酶脂类糖原铁64（一）过氧化物酶染色

(Peroxidase,POX)

[原理]

H2O2细胞内

POX[O]↑

联苯胺[O]联苯胺蓝+

亚硝基氰化钠暗蓝色颗粒(定位于胞浆内)计数100个原始细胞报告百分率

[结果]

粒系：强阳性单核系：弱阳性淋巴系：阴性

[临床意义]

鉴别急粒和急淋65过氧化物酶（POX）66各型白血病的MPO反应

粒系白血病细胞淋巴细胞白血病细胞67（二）酯酶染色

EsteraseStaining方法

偶氮偶联法1特异性酯酶染色

萘酚AS-D氯乙酸酯酶染色（SpecificEsteraseStaining）（NAS-DCEorCAE）

（粒细胞酯酶）

（单核细胞酯酶）

2.非特异性酯酶染色

Non-SpecificEsteraseStaining）

α-乙酸萘酚酯酶染色

（α-NAE)а-丁酸萘酚酯酶染色（a-NBE）分类68氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色

naphytholAS-Dchloroacetateesterase,AS-DCAE细胞化学染色检验69临床评价

急性白血病的鉴别：1.急性粒白血病M31+～2+2+～3+2.急性单核细胞白血病

原、幼单核细胞---阴性3.急性淋巴细胞白血病

原、幼淋细胞----阴性

细胞化学染色检验70α-丁酸萘酚酯酶染色结果

（单核细胞酯酶）骨髓细胞学检查71临床评价

（单核细胞白血病）72

α-乙酸萘酚酯酶（α-NAE）

染色结果（非特异性酯酶）

细胞化学染色检验73临床评价鉴别白血病类型；同时必须做NaF抑制试验细胞化学染色检验74

2张相同标本同时固定后，配制2缸孵育液，其中一缸内加入NaF（抑制酶活性），然后将2张标本分别放入2个缸内各自染色。最后分别进行积分，求出抑制率。（﹥50％）氟化钠抑制试验（NaFInhibittest

）NaF抑制率＝抑制前阳性率或积分抑制后阳性率或积分抑制前阳性率或积分×100％-细胞化学染色检验75

结果急性粒细胞白血病

---

原粒细胞弱阳性，不被NaF抑制急性单核细胞白血病---

原单核细胞阳性，被NaF抑制；细胞化学染色检验76非特异性酯酶+NaF77一种特异性酯酶染色加一种特异性酯酶染色临床意义：粒、单核细胞白血病酯酶双染78酯酶双染（粒单细胞白血病）

两种酯酶在同一张片子上染色细胞化学染色检验79（三）中性粒细胞碱性磷酸酶染色

（alkalinephosphataseALP）

80

报告方式：

百分率：计数100个成熟中性粒细胞，计算其阳性率。

积分值：计数100个成熟粒细胞，按反应强度作出分级，将其百分率乘以级数然后相加。81[参考值]

正常：百分率10-40%，

积分7-51[临床意义]

1.区别CML

、类白血病反应↓↓积分为0;↑积分>200分2.AA时↑PNH↓3.化脓性感染↑病毒性感染时↓

4、真性红细胞增多症↑继发性红细胞增多症N82类白血病反应慢粒白血病反应83慢性粒细胞性白血病ALP

Chronicmyeloidleukemia

阴性84（四）糖原染色（过碘酸-雪夫反应）

（periodicacid–Schiff,PAS）各系细胞糖原结果判断85临床评价阳性或强阳性：红细胞系统疾病：（幼红细胞）

红血病、红白血病、MDS淋巴细胞系统疾病：

急淋（原淋、幼淋巴细胞）单核细胞系统疾病：

急单（原单、幼单核细胞）86红血病、红白血病（原始红细胞）87淋巴细胞判断88（四）、酸性磷酸酶

（acidphoshataseACP)原理：硫化铅和偶带偶联法结果：胞质内出现棕黑色颗粒者为阳性（硫化铅）

胞质内出现亮红色颗粒者为阳性（偶氮偶联法）

89临床意义

鉴别多毛细胞白血病，不被L-酒石酸所抑制90鉴别T细胞白血病与B细胞白血病

阳性阴性鉴别Gaucher病与Nienann-Pick病

阳性阴性Gaucher病Nienann-Pick病91细胞形态和血液病细胞形态细胞化学染色鉴别血液病92本节主要内容

常见的细胞化学染色及临床应用（POX、ALP、ACP、PAS、SE、NSE染色）93主要内容

1、骨髓细胞学检查：

骨髓细胞学检查的

临床意义

2、骨髓和外周血--

细胞化学染色

94常见血液病的血液学特征

缺铁性贫血1、贫血

巨幼细胞性贫