高中生物选修一DNA的粗提取与鉴定省公开课一等奖全国示范课微课金奖课件

讨论2：怎样证实他们是遗传物质？讨论3：怎样才能将细胞内这些物质分离出来？讨论1：组成生物体遗传物质是什么？1/23§5.1DNA粗提取与判定2/23一、基础知识（一）提取DNA方法1.提取生物大分子基本思绪

选取一定物理或化学方法，分离含有不一样物理或化学性质生物大分子2.提取DNA基本思绪提取DNA，去除其它成份利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面差异3/23⑴DNA溶解性DNA和蛋白质等成份在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样利用这一特点，选择适当盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀；或者让其它成份溶解，DNA析出3.DNA等大分子理化性质4/23DNA不溶于酒精溶液，但细胞中一些蛋白质则溶于酒精。将DNA与蛋白质深入分离。⑵DNA不溶于酒精溶液⑶DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性①蛋白酶——水解蛋白质，

对DNA没有影响②高温——大多数蛋白质不能忍受60～80℃

而DNA在80℃以上才会变性③洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质

但对DNA没有影响5/236/23试剂：（二）DNA判定条件：二苯胺沸水浴条件下，

DNA遇二苯胺被染成蓝色沸水浴现象：7/23二、试验设计（一）试验材料选取从以下材料中选取2～3种标准：菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物红细胞；在液体培养基中培养大肠杆菌凡是含有DNA生物材料都能够考虑选取DNA含量相对较高组织8/23（二）破碎细胞，获取含DNA滤液1、动物细胞2、植物细胞——轻易破碎——需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液：加入一定量蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，

过滤后搜集滤液想一想：为何加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一个低渗液体，水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，

从而释放出DNA①加入一定洗涤剂和食盐②充分搅拌和研磨，过滤后搜集研磨液想一想：洗涤剂和食盐作用分别是什么？洗涤剂——离子去污剂，能溶解细胞膜，利于DNA释放食盐——NaCl，利于DNA溶解于研磨液中9/23使细胞核内DNA释放不完全，提取DNA量变少，

造成看不到丝状沉淀物、用二苯胺判定不显示蓝色等为了纯化提取DNA需要将滤液作深入处理讨论：滤液/研磨液中可能含有哪些成份？答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质想一想：假如研磨不充分，会对试验结果产生

怎样影响？10/231.DNA溶解性2.DNA对酶、高温和洗涤剂耐受性（三）除去滤液中杂质11/23讨论：方案二与方案三原理有什么不一样？方案二：利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取DNA

与蛋白质分开；方案三：利用DNA和蛋白质对高温耐受性不一样，

使蛋白质变性，与DNA分离12/23（四）DNA析出与判定与滤液体积相等冷却酒精溶液(体积分数95％)，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物

——粗提取DNA用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸收上面水1、DNA析出13/2314/232.DNA判定⑴向两支试管中分别加入2mol/LNaCl

溶液5ml⑵其中一支试管中加入DNA丝状物⑶各加入二苯胺试剂4ml⑷混匀后，置于沸水浴中加热5min⑸待冷却后，比较两只试管中溶液颜色改变观察现象：溶解丝状物溶液变为蓝色15/23观察你提取DNA颜色，假如不是白色丝状物，说明DNA中杂质较多；二苯胺判定出现蓝色说明试验基本成功，假如不展现蓝色，可能所提取DNA含量低，或是试验操作中出现错误，需要重新制备四、课题结果评价：是否提取出了DNA16/23课题延伸本课题使用洗涤剂是多组分混合物，在严格科学试验中极少使用。试验室提取高纯度DNA时，通常使用十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）、十二烷基硫酸钠（SDS）或吐温等化学试剂。17/232、你认为从细胞中提取某种特定蛋白质与提取DNA一样轻易吗？答：提取蛋白质比提取DNA难度大。这是因为，与DNA相比，蛋白质对温度、盐浓度、pH等条件要敏感得多，很轻易失活；而且蛋白质空间结构各种多样，理化性质各不相同，使得蛋白质提取没有一个统一方法，只能依据特定蛋白质特征探索提取条件，设计特定方法。18/23为何重复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？

1、用高盐浓度溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解杂质；

2、用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中杂质。所以，经过重复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不一样各种杂质。19/23⑴过滤用蒸馏水稀释过鸡血细胞液目标:取得含核物质滤液

⑵过滤含粘稠物0.14mol/LNaCl溶液目标:获取纱布上粘稠物

⑶过滤溶解有DNA2mol/LNaCl溶液目标:得到含DNA滤液

本试验中有三次过滤,分别有什么作用?20/23第一次搅拌加蒸馏水鸡血细胞液

加速细胞破裂第二次搅拌加2mol/LNaCl溶液滤液

使DNA与溶液混合均匀第三次搅拌加蒸馏水至0.14mol/LNaCl溶液

稀释NaCl溶液,析出DNA第四次搅拌放入2mol/LNaCl溶液中纱布上粘稠物

使DNA尽可能多溶于溶液中第五次搅拌体积分数为95%酒精

提取含杂质较少DNA试验中有五次用玻璃棒搅拌?分别有什么作用?21/23方法步骤

加入物质

目标

1.制备鸡血细胞液

柠檬酸钠溶液

①

2.提取鸡血细胞细胞核物质

20m1蒸馏水

②幻灯片18

3.溶解细胞核内DNA

2m1／LNaCI溶液40mL

③幻灯片18

4.析出含DNA黏稠物

蒸馏水

④

5.滤取含DNA黏稠物

⑤

6.将DNA黏稠物再溶解

2mol／LNaCl溶液20mL

⑥

7.过滤含DNANaCl溶液

⑦

8.提取含有杂质较少DNA

冷却95％酒精50mL

⑧幻灯片18

A:(1)向试管中加入0.015mol／LNaCl溶液5mL

(2)加入DNA

(3)4

mL二苯胺试剂

9.DNA判定

B:(1)向试管中加入0.015mol／L

NaCl溶液5mL

(2)4mL二苯胺试剂

⑨

22/23①加入柠檬酸钠溶液目标是预防血凝固