动物细菌分离培养（动物微生物课件）

掌握细菌常用标本片的制作及染色方法；认识革兰氏染色的反应特性；一、实训目的二、实训器材病料、细菌培养物、接种环、玻片、酒精灯、染色缸、染色架、染色液等。三、实训内容（一）细菌标本片的制作（二）血液推片的制作（三）常用的细菌染色方法（四）常用染色液的配制（五）注意事项（一）细菌标本片的制作1.涂片2.干燥3.固定固体培养物：取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。（一）细菌标本片的制作1.涂片液体培养物：取清洁载玻片一块，将接种环在火焰上灭菌，待冷后取一滴培养液或液体，置于玻片中央，混均匀，涂成直径约为1cm的涂面。病变组织抹片：做无菌切开，用切面在玻片中央触一下或压印成一薄层即可。（一）细菌标本片的制作1.涂片在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上方30～40cm来回微烤使其干燥。2.干燥火焰固定：将干燥后的玻片涂面向上，在火焰上快速来回通过2～3次，其温度以手背接触玻片底面感觉微烫手为宜。化学固定：将干燥后的玻片浸入甲醇（乙醇、丙酮）中，或在玻片上滴数滴甲醇，2～3分钟后自然挥发干燥。3.固定（二）血液推片的制作取一张边缘整齐的载玻片，用其一端蘸取一滴血液，在另一张干净无油脂的载玻片上，以45°角度均匀地推成一薄血涂片，以红细胞不重叠为宜。1.取血：将血液滴在载玻片上。2.推片：以左手拿该片，用另一个载玻片作推片，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。5/11/202413让血液粘附在推片上推出均匀的血膜5/11/202415窍门：将载玻片的一端垫起，有助于推出均匀血膜。5/11/202416做细菌涂片时，不宜涂得过厚，以免影响制片效果。固定必须确实，火焰固定时不宜温度过高，以免破坏菌体结构。每种染液染色的过程中应保持染色液不干，尤其加热染色的染液，在染色过程中应随时添加，以免蒸发干，影响染色效果。每种染液染色后，应用水将染液一起冲掉，不可先将染液倾去后再用水冲洗。注意事项：细菌标本片制备及染色方法

掌握细菌常用标本片的制作及染色方法；认识革兰氏染色的反应特性；一、实训目的二、实训器材病料、细菌培养物、接种环、玻片、酒精灯、染色缸、染色架、染色液等。三、实训内容（一）细菌标本片的制作（二）血液推片的制作（三）常用的细菌染色方法（四）常用染色液的配制（五）注意事项（一）细菌标本片的制作1.涂片2.干燥3.固定固体培养物：取清洁载玻片一块，用吸管吸取生理盐水1滴置于玻片中央，再将接种环在火焰上灭菌，待冷后从固体培养基上挑取少许菌落，置于玻片上的生理盐水中混均匀，并在玻片上涂成直径约为1cm的涂面，要求薄而均匀。（一）细菌标本片的制作1.涂片液体培养物：取清洁载玻片一块，将接种环在火焰上灭菌，待冷后取一滴培养液或液体，置于玻片中央，混均匀，涂成直径约为1cm的涂面。病变组织抹片：做无菌切开，用切面在玻片中央触一下或压印成一薄层即可。（一）细菌标本片的制作1.涂片在室温下自然干燥，必要时将涂面向上，置火焰上方30～40cm来回微烤使其干燥。2.干燥火焰固定：将干燥后的玻片涂面向上，在火焰上快速来回通过2～3次，其温度以手背接触玻片底面感觉微烫手为宜。化学固定：将干燥后的玻片浸入甲醇（乙醇、丙酮）中，或在玻片上滴数滴甲醇，2～3分钟后自然挥发干燥。3.固定（二）血液推片的制作取一张边缘整齐的载玻片，用其一端蘸取一滴血液，在另一张干净无油脂的载玻片上，以45°角度均匀地推成一薄血涂片，以红细胞不重叠为宜。1.取血：将血液滴在载玻片上。2.推片：以左手拿该片，用另一个载玻片作推片，在左手载玻片上由前向后接触血滴，使两载玻片约成45°角，轻轻移动，使血滴成一直线，然后由前向后推为一均匀的薄片。5/11/202431让血液粘附在推片上推出均匀的血膜5/11/202433窍门：将载玻片的一端垫起，有助于推出均匀血膜。5/11/202434（三）常用的细菌染色方法（三）常用的细菌染色方法1.单染法：又叫简单染色法，即只用一种染料进行染色。（1）美蓝染色法染色液配制：甲液：美蓝0.3g、95%酒精30mL；乙液：0.01%苛性钾溶液100mL。先配甲液，将美蓝放入研钵中，徐徐加入酒精研磨均匀后，把甲、乙两液混合，过夜后用滤纸过滤即成。新鲜配制的美蓝液染色不好，陈旧的染色好。（三）常用的细菌染色方法1.单染法：又叫简单染色法，即只用一种染料进行染色。染色方法：在已固定好的抹片上，滴加适量美蓝染色液覆盖涂面，染色2～3min，水洗，吸水纸轻压吸干或晾干和镜检，结果菌体呈蓝色。（1）美蓝染色法（2）瑞氏染色法：染色液的配制：取瑞氏染料0.1g，纯中性甘油1ml，在研钵中混合研磨，再加入甲醇60ml，使其溶解，装入中性瓶中过夜，次日过滤，盛入棕色瓶中，暗处保存。保存越久，染色越好。染色方法：细菌抹片自然干燥后，滴加瑞氏染色液于涂片上以固定标本，1～3min后，再滴加与染色液等量的磷酸缓冲液或中性蒸馏水于玻片上，轻轻摇晃使与染色液混和均匀，5min左右水洗，干后镜检，结果菌体呈蓝色，组织细胞等物呈其他颜色。（2）瑞氏染色法：2.复染（三）常用的细菌染色方法革兰氏染色原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-

）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法（KOH溶解试验和氨基肽酶试验可用作辅助试验）。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。2.复染（三）常用的细菌染色方法革兰氏染色原理G-的细胞壁中脂类较多，肽聚糖少,用洒精脱脂时，脂类易除去使得细胞壁的孔隙变大，从而使结晶紫染料从细胞壁中洗脱出来，最后用红色的染料复染时而显红色；G+的细胞壁含脂类较少，肽聚糖多且交联紧密，酒精作用后肽聚糖收宿，细胞壁的孔隙变小使得结晶紫与碘的复合物不能脱出，经红色染料复染后仍为紫色。

革兰氏染色染色：初染（结晶紫）媒染（碘液）脱色（酒精）复染（复红）滤纸吸干油镜镜检safraninCrystalviolet5/11/202442涂片

→

干燥

→

固定

→

草酸铵结晶紫染色1min

→

水洗干燥

→

碘液媒1min

→

水洗干燥

→

95%乙醇脱脂15~20s

→

水洗干燥→

番红复染1min

→

水洗干燥→镜检。革兰式染色流程路线：5/11/202443实训三：细菌标本片制备及染色方法染色步骤5/11/2024（２）（３）（１）（４）１分钟水洗１分钟水洗15-３０秒水洗３０-60秒水洗吸干复红复染95％乙醇脱色结晶紫初染卢戈碘液媒染（1）涂片→干燥→固定215/11/202445固定的目的和方法使细菌的细胞凝固，使菌体与玻片粘得更牢固可改变菌体对染料的通透性加热固定可杀死细菌，比较安全固定的方法将制成的标本匀速通过火焰三次5/11/202446（2）草酸铵结晶紫染色1min→

水洗干燥5/11/202447结晶紫初染１分钟水洗

5/11/202448

（3）碘液媒染1min水洗→干燥5/11/202449碘液媒染１分钟

水洗

（3）碘液媒染1min水洗→干燥5/11/202450

（4）95%乙醇脱色15～30秒→水洗干燥5/11/202451酒精脱色３０秒水洗5/11/202452

（4）95%乙醇脱色15～30秒→水洗干燥（5）番红复染30S～1min→水洗干燥→镜检5/11/202453番红复染３０秒水洗5/11/202454（5）番红复染30S～1min→水洗干燥→镜检做细菌涂片时，不宜涂得过厚，以免影响制片效果。固定必须确实，火焰固定时不宜温度过高，以免破坏菌体结构。每种染液染色的过程中应保持染色液不干，尤其加热染色的染液，在染色过程中应随时添加，以免蒸发干，影响染色效果。每种染液染色后，应用水将染液一起冲掉，不可先将染液倾去后再用水冲洗。注意事项：普通琼脂培养基的配制57掌握普通琼脂培养基的配制；一、实训目的二、实训器材灭菌锅、培养皿、三角烧瓶、电热锅、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、PH试纸。材料：牛肉膏3g,蛋白胨10g，氯化钠5g,琼脂20g。制备：将上述材料装入1000mL烧杯中，煮沸，使琼脂充分溶化，趁热用2-4层纱布过滤，补充蒸馏水至1000mL，测定PH7.4-7.6。高压灭菌（121℃，,30min）后，于无菌室或超净台内分装（试管每管约1/3高，倾斜冷却；平皿厚度2-3mm，水平静置冷却）。样品的称量：天平的正确使用；称取蛋白胨应迅速。定容方法的准确。注意事项实验操作：每小组称取3.3g营养琼脂装入100mL烧杯中，煮沸，使琼脂充分溶化，趁热用2-4层纱布过滤，补充蒸馏水至100mL。高压灭菌（121℃，,20min）后，于无菌室或超净台内趁热分装（平皿厚度2-3mm，水平静置冷却）。细菌的分离培养-平板划线法63掌握细菌的平板划线分离培养法；一、实训目的二、实训器材无菌操作台、培养皿、培养基、菌种、接种环、酒精灯、酒精、棉球。接种针和接种环：由三部分组组成，即环（针）、金属柄和绝缘柄。接种前后都要过火灭菌。接种针用于穿刺接种细菌，接种环用于固体、液体培养基的细菌接种。接种工具VS-1300-U型洁净工作台接种环境灭菌接种环沾取标本接种灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境接种的基本程序方法：细菌分离培养一般采取“划线法”，主要有分区划线、十字交叉划线等方法，具体方法可按照个人习惯选择应用，目的是达到使被检材料适当的稀释，以达到获得独立单在的菌落，防止形成菌苔，以致不宜鉴别其菌落性状。分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环点燃酒精灯。左手持平皿，上盖下底，用左手的拇指、食指和中指将平皿盖揭开呈20°左右的角度（角度不能过大，以防空气污染）。操作：右手持接种环，从混合培养物中沾取少许混合物涂布在培养基边缘，然后将接种环多余的混合物在火焰中烧灼，待冷却后，再与所涂混合物的地方轻触，在空白区做“Z”形划线，后再烧灼，冷却后再在空白区划线，反复操作，直至混合物稀释到足够形成单菌落。盖好平皿，倒置于恒温培养箱中培养24-48h。操作：细菌培养性状的观察细菌群体形态－菌落菌落又称克隆：指单个细菌在适合生长的固体培养基表面或内部，在适宜的条件下经培养后，生长繁殖出巨大数量的菌体，形成一个肉眼可见的有一定形态的独立的群。菌苔：若长出的菌落联成一片则形成菌苔。因此在细菌培养中常将细菌在培养基表面划线接种以获得单个菌落。大小、颜色、透明度、边缘整齐、光滑、粗糙、湿润、干燥、凸起、扁平、针尖状、露珠状等等。细菌群体形态－菌落菌落描述大小：不同细菌，其菌落大小变化很大。常用其直径来表示，单位是mm或μm。细菌群体形态－菌落形状：主要有圆形、露滴状、乳头状或油煎蛋状、云雾状、放射状或蛛网状、同心圆状、扁平和针尖状等。细菌群体形态－菌落边缘特征：有整齐、波浪状、锯齿状、卷发状等。性状：有光滑、粗糙、皱褶、颗粒同状、心圆状、放射状等。湿润度：有干燥和湿润两种。细菌群体形态－菌落隆起度：有隆起、轻度隆起、中央隆起和云雾状等。色泽和透明度：色泽有白、乳白、黄、橙、红及无色等；透明度有透明、半透明、不透明等。细菌群体形态－菌落质地：有坚硬、柔软和粘稠等。溶血性：分为α－溶血、β－溶血和γ－溶血三种。细菌群体形态－菌落菌落形态炭疽菌落炭疽菌落土霉菌菌落葡萄球菌菌落大肠杆菌菌落大肠杆菌菌落分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开。菌落：单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌群落。菌苔：多个菌落连成一片。固体培养基中生长细菌在培养基上的生长特性观察大小：不同细菌，其菌落大小变化很大。常用其直径来表示，单位是mm或μm。形状：主要有圆形、露滴状、乳头状或油煎蛋状、云雾状、放射状或蛛网状、同心圆状、扁平和针尖状等。边缘特征：有整齐、波浪状、锯齿状、卷发状等。表面性状：有光滑、粗糙、皱褶、颗粒状、同心圆状、放射状等。湿润度：有干燥和湿润两种。隆起度：有隆起、轻度隆起、中央隆起和云雾状等。色泽和透明度：色泽有白、乳白、黄、橙、红及无色等；透明度有透明、半透明、不透明等。质地：有坚硬、柔软和粘稠等。细菌的人工培养人工培养的基本条件：培养基：人工配制的满足细菌及其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，提供营养物质和pH环境等；气体环境：如O2等；温度：通常35-37℃；时间：通常18-24h。按主要营养物质的来源：天然培养基和合成培养基按物理状态：固体、液体、半固体培养基按用途：基础培养基营养培养基选择培养基鉴别培养基厌氧培养基培养基的类型：液体培养基：含有各种营养成分的水溶液。如肉汤培养基。固体培养基：在液体培养基中加入凝固剂（如1.5%-2%琼脂）。如琼脂斜面培养基、琼脂平板培养基。半固体培养基：在液体培养基中加入0.5%的琼脂制成。按物理状态分类培养基的类型：基础培养基：满足一般微生物生长繁殖所需要的营养物质。如肉汤培养基。营养培养基：只适合某种微生物生长而不适合其他微生物生长配制的培养基，这种方法达到分离这种微生物的目的。如血液琼脂平板就是在琼脂平板中加入血液、血清或动植物提取液，链球菌、肺炎球菌在其上生长良好。按用途分类培养基的类型：增菌培养基：在基础培养基或营养培养基中加入某种细菌生长所需的特殊营养成分，只适合这种微生物生长而不适合其他微生物生长的培养基。如亚硝酸盐增菌培养基适合沙门氏菌的生长。按用途分类培养基的类型：鉴别培养基：在基础培养基中加入某种细菌生长所需特殊化学物质，某种微生物在培养基中生长后能产生某种代谢产物，而这种代谢产物可以与培养基中的化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征性变化，可将该微生物与其他微生物加以区别开来。如糖发酵管、硫化氢培养基等。按用途分类培养基的类型：选择培养基：根据不同微生物对营养的特殊要求，或对物理化学条件的抗性而设计的培养基，利用这一类培养基可以把需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。如SS琼脂，分离肠道菌等。按用途分类培养基的类型：厌氧培养基：在无氧环境下生长繁殖。如在肝片肉汤培养基上覆盖液状石蜡等。按用途分类培养基的类型：二、细菌在培养基中的生长现象混浊：大多数细菌沉淀：链状生长的细菌菌膜：专性需氧菌，如结核杆菌、枯草杆菌1.液体培养基中生长在液体培养基中的生长情况

多数呈均匀混浊状态少数链状菌呈沉淀生长专性需氧菌则在表面生长，常形成菌膜菌膜二、细菌在培养基中的生长现象液体培养基中沉淀生长混浊生长表面生长二、细菌在培养基中的生长现象分离培养：将标本或培养物划线接种在固体培养基的表面，因划线的分散作用，使许多原混杂的细菌在固体培养基表面上散开。菌落：单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌群落。菌苔：多个菌落连成一片。2.固体培养基中生长二、细菌在培养基中的生长现象细菌在固体培养基中的生长情况光滑型菌落粗糙型菌落粘液型菌落二、细菌在培养基中的生长现象有鞭毛细菌：扩散生长，周围浑浊无鞭毛细菌：沿穿刺线生长，周围透明3.半固体培养基中生长二、细菌在培养基中的生长现象在半固体培养基中的生长情况：常用于观察细菌动力

有鞭毛的细菌可沿穿刺线呈羽毛状或云雾状混浊生长无鞭毛细菌则只能沿穿刺线呈明显的线状生长二、细菌在培养基中的生长现象混浊生长沿穿刺线生长无鞭毛细菌半固体培养基中有鞭毛细菌二、细菌在培养基中的生长现象三、人工培养细菌的意义1.细菌的鉴别与研究2.细菌性疾病的诊断和治疗3.生物制品的制备4.其他方面——基因工程细菌的新陈代谢生物催化剂——酶根据酶所催化的反应类型：氧化还原酶、转移酶、水解酶、裂解酶、异构酶、合成酶；根据酶作用的部位：胞内酶，胞外酶；根据酶的产生方式：固有酶，诱导酶；细菌的新陈代谢细菌新陈代谢包括：分解代谢与合成代谢营养物质分解和转化为能量的过程：分解代谢所产生的能量用于细胞组分的合成：合成代谢一、分解代谢产物由于细菌各自的酶系统不同，对糖、蛋白质的分解能力的不同，因而代谢产物各异；据此利用生物化学方法鉴别不同细菌称为细菌的生化反应。细菌的新陈代谢（1）糖（醇、苷）类发酵试验原理：细菌对各种糖的分解能力及代谢产物不同，可借以鉴别细菌。应用：大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产生甲酸，甲酸解氢酶可将其分解为CO2和H2，所以生化反应结果为产气产酸。——糖代谢测定细菌的新陈代谢（1）糖（醇、苷）类发酵试验——糖代谢测定细菌的新陈代谢伤寒沙门氏菌葡萄糖甲酸（缺乏甲酸脱氢酶，故只产酸不产气）（2）V-P试验大肠杆菌与产气杆菌均分解葡糖糖产酸产气。原理：葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇

二乙酰

红色化合物（+）细菌OH-O胍基——糖代谢测定细菌的新陈代谢阳性红色产气杆菌阴性对照大肠杆菌——糖代谢测定细菌的新陈代谢（2）V-P试验（3）甲基红试验原理：葡萄糖丙酮酸混合酸（pH>5.4)

中性（pH<5.4)红色反应（+）大肠杆菌

橘黄色（-），产气杆菌细菌甲基红指示剂甲基红指示剂——糖代谢测定细菌的新陈代谢（4）枸橼酸盐利用试验溴麝香草酚蓝枸橼酸盐碳酸盐培养基中氨盐细菌细菌氨（PH↑）淡绿转深蓝原理：应用：产气杆菌的鉴定。——糖代谢测定细菌的新陈代谢分解分解（1）吲哚试验原理

色氨酸吲哚玫瑰吲哚（红色）应用肠道杆菌的鉴定大肠埃希菌（+）沙门菌属（-）二甲基氨基苯甲醛——蛋白质代谢测定细菌的新陈代谢含有色氨酸酶的细菌分解（2）硫化氢试验原理

含硫氨基酸硫化氢硫化铅/硫化亚铁

应用肠杆菌科，变形杆菌的鉴定。细菌醋酸铅/硫酸亚铁细菌的新陈代谢黑色（胱氨酸、甲硫氨酸）——蛋白质代谢测定（3）尿素（脲）酶试验原理：

尿素氨培养基呈碱性红色

应用：肠杆菌科中变形杆菌属的鉴定。细菌细菌的新陈代谢——蛋白质代谢测定尿素酶酚红指示剂（二）合成代谢产物1.与致病性有关的代谢产物（1）热原质（2）毒素（3）侵袭性酶2.与治疗有关的代谢产物（1）抗生素（2）维生素细菌的新陈代谢3.与鉴别细菌有关的代谢产物（1）色素（2）细菌素（二）合成代谢产物细菌的新陈代谢（1）热原质（致热原）细菌合成的一种极微量注入人或动物体内即能引起发热反应的物质。大多数是G-菌的脂多糖。耐高温，高压蒸汽灭菌（121.3℃，20min）不能破坏，180℃4h或250℃45min或650℃1min才能被破坏。（二）合成代谢产物－与致病性有关的代谢产物细菌的新陈代谢（2）毒素内毒素：G－菌崩解死亡后释放出来的脂多糖。无特异性、毒性弱、抗原性弱。甲醛处理后不能使其完全脱毒，因此不能制成类毒素。（二）合成代谢产物－与致病性有关的代谢产物细菌的新陈代谢（2）毒素外毒素：具有抗原性强、毒性强、特异性强等特点。类毒素：外毒素经0.3%-0.5%甲醛37℃处理后，其毒性完全丧失，但仍保留良好的抗原特性，是预防传染病的一类重要的生物制品。抗毒素：外毒素可刺激机体产生特异性免疫抗体，这种抗体称为抗毒素。（二）合成代谢产物－与致病性有关的代谢产物（3）侵袭性酶具有侵袭性的胞外酶，能损伤机体组织、促进细菌的侵袭、扩散，是细菌的重要致病物质。如链球菌的透明质酸酶。（二）合成代谢产物－与致病性有关的代谢产物细菌的新陈代谢（1）抗生素：多粘菌素、杆菌肽。（2）维生素：某些肠道菌合成，如B族维生素、VK。（二）合成代谢产物－与治疗有关的代谢产物细菌的新陈代谢（1）色素：金黄色葡萄球菌——金黄色色素（脂溶性）、铜绿假单胞菌——-绿色色素（水溶性），可用于细菌鉴别。（2）细菌素：只能杀伤有亲缘关系的细菌，如大肠菌素。无治疗意义，有助于细菌分型。（二）合成代谢产物－与致鉴别细菌有关的代谢产物细菌的新陈代谢（1）应用：疫苗效价检查、血清效价测定、药物治疗效果检测。（2）方法：用递减剂量的病原菌感染易感动物。（3）表示方法：最小致死量（MLD）：半数致死量（LD50）：最小感染量（MID）：半数感染量（ID50）：细菌毒力的大小可以随自然和人工条件的改变而变化。掌握病原菌的毒力具有重要的临床意义。细菌毒力测定知识要点：细菌细胞的化学组成细菌营养需要一、细菌细胞的化学组成微生物细胞水：80%-90%干物质有机物：蛋白质、糖、脂质、核酸、维生素等及其降解产物

无机物：各种盐类5/11/2024127菌体的重要成分（80-90%）。细胞组分、溶剂、参与代谢、适宜反应温度的保障（缓冲）、维持大分子构象稳定

1.水份二.细菌营养需要5/11/2024128根据需要的量可分为：常量元素：磷、硫、钾、钙、镁、纳、铁等；微量元素：铜(Cu）、锌（Zn）、钼（Mo)、钴（Co）、钨（W）、镍（Ni）等。5/11/20241292.无机盐类二.细菌营养需要细胞生长必需的各种金属元素及微量元素构成菌体成分；调节胞内菌体内外渗透压；促进酶的活性或作为某些辅酶组份；某些元素与细菌的生长繁殖及致病作用密切相关；Fe——白喉杆菌产毒菌

2.无机盐类5/11/2024130二.细菌营养需要合成菌体的必需原料，获取能量的来源无机碳源和有机碳源。各种有机碳源中，容易被细菌吸收的是糖类物质，如：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、甘露醇等。3.碳源5/11/2024131二.细菌营养需要从分子态氮到复杂的含氮化合物都可被不同的细菌利用；多数病原菌利用有机氮化合物，如氨基酸、蛋白胨；固氮菌有固氮作用，可以借助特殊的酶将无机氮如硝酸盐等为氮源，主要用于合成菌体细胞质及其他结构成分。4.氮源5/11/2024132二.细菌营养需要5.生长因子菌体自身不能合成或合成量不足,需要外源加入的、微量即可的营养物质。如：维生素、氨基酸等。如营养缺陷型细菌流感嗜血杆菌需X因子(高铁血红素)；V因子（辅酶Ⅰ或Ⅱ）可产生金黄色葡萄球菌。5/11/2024133二.细菌营养需要细菌的营养类型腐生菌—利用无生命的有机化合物(如动植物尸体和残体)为营养物质。寄生菌—从生活的寄主体内吸收营养物质。

5/11/2024134自养菌异养菌

三、吸收营养物质的方式

借助细胞壁和细胞膜的结构和功能完成。促进扩散被动扩散基团移位主动运转营养物质运输方式5/11/20241351.被动扩散例如：H2O，O2，CO2，甘油，乙醇，脂肪酸等。(分子量小，脂溶性，极性小)5/11/2024136

三、吸收营养物质的方式借助浓度差，单纯靠物理方式扩散；高浓度——低浓度；2.促进扩散5/11/2024137三、吸收营养物质的方式高浓度到低浓度；借助载体蛋白；不消耗能量3.主动运转特点：被运送的物质可逆浓度梯度低-高进入细胞内,要消耗能量，必需有能量参加。有膜载体参加，膜载体发生构型变化,被运送物质不发生任何变化。通过这种方式运输方式吸收的营养物质有糖类（乳糖、半乳糖、阿拉伯糖等）、氨基酸、核苷、钾离子等。5/11/2024138三、吸收营养物质的方式4.基团移位基团转位主要存在于厌氧型和兼性厌氧型细菌中，主要用于糖的运输。脂肪酸、核苷、碱基等也可通过这种方式运输。有一个复杂的运输系统来完成物质的运输；需要载体，又要耗能；物质在运输过程中发生化学结构变化；5/11/2024139三、吸收营养物质的方式

运输方式浓度方向载体蛋白动力运送分子营养物质被动扩散高→低无无不变水、脂肪酸促进扩散高→低载体无不变氨基酸、单糖主动运转低→高载体

能量不变离子、糖类、氨基酸基团移位低→高载体能量改变糖类、脂肪酸、核苷营养物质运输方式比较5/11/20241405/11/2024142细菌的生长繁殖多数细菌：pH7.2-7.6。偏酸性菌：pH6.0-6.8。如结核杆菌PH为6.5-6.8；偏碱性菌：pH8-11。如霍乱弧菌PH值为8.5-9.2。一、细菌的生长繁殖的条件1.营养物质2.酸碱度5/11/2024143温度对细菌的生长速度影响最大，致病菌一般37℃，过高杀菌，过低抑菌。嗜冷菌：－5℃-30℃，海洋细菌、鼠疫杆菌（30℃）；嗜温菌：10℃-50℃，最适30℃-37℃；嗜热菌：25℃-80℃极端嗜热菌。

3.温度5/11/2024144一、细菌的生长繁殖的条件4.气体

CO2:少数细菌初次分离培养需5-10%CO2。O2:代谢时对氧分子的需求程度不同分为：需氧菌：仅在有氧时生长，如结核杆菌。微需氧菌：低氧分压时长势良好，如:幽门螺旋杆菌。厌氧菌：一般不需要O2，O2存在也影响不大，如：乳酸菌。兼性厌氧菌：兼有需氧呼吸和无氧发酵两种功能，大多数病原菌都属此类。专性厌氧菌：O2对其生长有毒害作用，如：破伤风梭菌。5/11/2024145一、细菌的生长繁殖的条件二、细菌的繁殖方式多数细菌以简单的二分裂方式进行无性繁殖。繁殖一代所需时间约20~30min；但少数细菌代时较长，如:结核分枝杆菌代时为18h~24h。

5