小鼠骨髓细胞染色体制备与观察

实验(Yan)二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察第一页，共三十页。实验(Yan)原理小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性，且细胞数量较多。第二页，共三十页。秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较(Jiao)多的中期分裂相的骨髓细胞。第三页，共三十页。第四页，共三十页。实验目的与要求：1.熟悉小鼠骨髓细胞染色体制备方法。2.了解小鼠染色体核型。3.认(Ren)识秋水仙素对细胞增殖的作用。器材与试剂内容与方法（一）小鼠骨髓细胞染色体制备预处理取材，收集细胞低渗固定、再固定滴片染色第五页，共三十页。取材前2～3h，向腹腔内注射秋水仙素。注射浓度随动物种类不同而异。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻(Zu)断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。

腹腔内注射秋水仙素2~3小时后，颈椎脱臼处死小鼠。第六页，共三十页。小白鼠(Shu)骨骼标本第七页，共三十页。第八页，共三十页。取出小鼠的后肢股骨，注意不要将股骨剪断，否则容(Rong)易造成骨髓细胞的流失。第九页，共三十页。用纱布(Bu)擦股骨上的肌肉组织，清除干净注射器抽取生理盐水冲洗骨髓第十页，共三十页。收集细(Xi)胞：暴露骨髓腔，反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，收集到离心管中,定容至6ml.第十一页，共三十页。滴2~3滴于玻片(Pian)上，吹气，在酒精灯火焰过火8次，做记号，凉干，染色滴片：滴片后，将片子侵入Giemsa染液缸中，10~15分钟，弃去染液，水洗，晾干，镜检。第十二页，共三十页。第十三页，共三十页。第十四页，共三十页。作(Zuo)业与思考题1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用？3、简述实验中应注意那些关键问题？第十五页，共三十页。（二）染色体标本片观察1.标本片质量评价（1）细胞密度合适、均匀；（2）背景干净(Jing)，细胞核和染色体清晰；（3）有较多的分裂相；（4）染色体分散较好。第十六页，共三十页。细胞密(Mi)度第十七页，共三十页。染色体(Ti)分散度第十八页，共三十页。2.染色体形(Xing)态特征观察第十九页，共三十页。3.染色体计(Ji)数（100×10）151699+16+15=401082222+8+10=40第二十页，共三十页。4.细胞增(Zeng)殖指数统计细胞增殖指数=分裂细胞数分裂细胞数+间期细胞数×100%第二十一页，共三十页。实验三细胞(Bao)器的观察一、中心体二、高尔基体第二十二页，共三十页。一、中心(Xin)体（4×10）马蛔虫子宫横切片全貌第二十三页，共三十页。中(Zhong)心体（10×10）第二十四页，共三十页。中(Zhong)心体（40×10）第二十五页，共三十页。二、高尔(Er)基体（4×10）脊神经节切片第二十六页，共三十页。高尔(Er)基体（10×10）第二十七页，共三十页。高(Gao)尔基体（40×10）第二十八页，共三十页。高尔(Er)基体（40×10）第二十九页，共三十页。内(Nei)容总结实验二小鼠骨髓细胞染色体制备与观察。秋水仙素，可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成，使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内，可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。固定、再固定。秋水仙素的主要作用是使分裂细胞阻断在有丝分裂中期，增加中期分裂相的比例。取出小鼠的后肢股骨