胚胎操作安全性评估的关键参数研究.ppt

1、胚胎操作安全性评估的关键参数研究2007CB948102,解放军总医院 北京大学 2008年12月,研究背景,辅助生殖技术(Assisted Reproductive Technology, ART)面临着安全性问题 多胎妊娠率高 流产率高，围产期死亡率高和AS/BWS综合征发生率高; 出生体重低。,Kramer MS., Platt R. et. al., JAMA.1998. Lambert RD. Human Reproduction, 2003,影响ART安全的可能因素,卵巢刺激药物的应用 体外操作对配子与胚胎的影响 精子问题,Lambert RD. Human Reproductio

2、n, 2003,小鼠模型,人胚胎体系的验证,研究计划执行情况（一）,ART对小鼠胚胎表达谱影响,1.1 超排卵对小鼠胚胎表达谱的影响,超排囊胚直径降低,超排囊胚的种植能力没有下降,超排胚胎的发育率降低,超排后胎儿体重降低，胎盘重量无明显改变,超排后小鼠囊胚的差异表达基因,上调基因72个，下调基因108个,未超排卵自然受孕vs超排卵自然受孕胚胎,Cluster Analysis,超排后小鼠囊胚的差异表达基因的功能分析,编码分泌蛋白的差异基因,1.2 IVF和冷冻对小鼠胚胎表达谱影响,IVF差异表达基因编码的分泌型蛋白,冷冻差异表达基因编码的分泌型蛋白,小结,芯片分析显示促排卵、IVF和冷冻均造成

3、了囊胚阶段差异基因的表达 促排卵导致囊胚直径变小，植入能力未见明显改变 促排卵后胚胎的发育率降低，胎儿体重降低，胎盘重量无明显改变,研究计划执行情况（二）,三维荧光原位杂交在植入前遗传学诊断中的应用,2D-FISH在PGD应用中存在的问题,破坏细胞膜后，无法识别胞浆成分； 实验过程中易发生卵裂球的丢失； 试剂和探针用量多。,改进一、 固定方式,传统的固定方式（甲醇/冰醋酸或HCl/Tween）- 破坏细胞膜 改进的固定方式（4%多聚甲醛）-保持胞膜完整,改进二、转移方式,2D-FISH与3D-FISH的比较：,2D-FISH 蓝色：DAPI；绿色：信号点,3D-FISH 蓝色：DAPI；绿色：

4、信号点,Yan, et.al. Fertility 237(9):2315-27 Liying Yan, Jie Qiao, Yuan Chen, Jin Huang, Ping Liu, Qingyuan Sun. Application of 3D- fluorescence in situ hybridization to human preimplantation genetic diagnosis. Fertil Steril 2008, in press Qiao J., Chen Y., Yan L., Yan J., Liu P., Sun Q. Changes in hist

5、one methylation during human oocyte maturation and IVF- or ICSI-derived embryo development. Fertil Steril. (revised) Caihong Ma, Liying Yan, Jie.qiao, Wei Sha, Li Li, Qingyuan Sun. Effects of TNF- on porcine oocyte meiosis progression, spindle organization and chromosome alignment. Fertil Steril. (r

6、evised),初步建立了研究人类体外授精胚胎移植技术及其衍生技术相关的组织样本库； 正在建立ART技术对早期胚胎发育影响的数据库。,资源共享平台,陕西省科技进步一等奖人类辅助生殖技术临床应用和相关基础研究,专利申请和人才培养,申请专利： 表达人类白细胞抗原G的人胚胎干细胞及其分化细胞 申请号：200810182602.8 三维荧光原位杂交在植入前遗传学诊断中的应用,项目组乔杰教授获得国家杰出青年基金； 项目组姚元庆教授获解放军总后勤部科技银星称号； 两名年轻骨干在此项目的培养下，分别获得博士后基金和国家自然基金资助。 培养博士后1人，博士研究生4人，毕业博士生2名。,人才培养,课题总的创新性突破和意义,从转录水平系统研究了胚胎操作对胚胎发育的影响，为深入研究人类辅助生殖技术的安全性和完善技术提供了理论储备。