最新第三章真菌感染实验诊断

第三章真菌感染实验诊断第一节第一节 真菌的基本特性真菌的基本特性 真菌是一大类具有典型细胞核，真菌是一大类具有典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎叶的真核不含叶绿素，不分根、茎叶的真核细胞型微生物。细胞型微生物。一、真菌的真菌的形态形态特性特性 （一）单细胞真菌呈圆形，如酵母菌。（一）单细胞真菌呈圆形，如酵母菌。 （二）多细胞真菌由菌丝和孢子组成，（二）多细胞真菌由菌丝和孢子组成， 称丝状菌或霉菌。称丝状菌或霉菌。 菌丝和孢子的形态因菌而异，是鉴定菌丝和孢子的形态因菌而异，是鉴定真菌的重要依据。孢子又分为多种，真菌的重要依据。孢子又分为多种，如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子如叶状孢子、分生孢子和孢子囊孢子等。等。 二、真菌菌落特性真菌培养要求不高，常用沙氏真菌培养要求不高，常用沙氏(Sabouraud)(Sabouraud)培养基培养基( (含含1 1蛋白胨、蛋白胨、 4 4葡萄糖或麦芽糖、葡萄糖或麦芽糖、2 2琼脂琼脂) )培养，培养，适宜温度适宜温度22222828，但深部真菌为，但深部真菌为3737。形成三种菌落，。形成三种菌落，菌落形态是菌落形态是鉴别真菌的重要依据。鉴别真菌的重要依据。 1 1酵母型菌落酵母型菌落 是单细胞真菌的菌是单细胞真菌的菌 落，形态与细菌菌落相似，较大，落，形态与细菌菌落相似，较大， 表面光滑湿润柔软、边缘整齐，表面光滑湿润柔软、边缘整齐， 如新生隐球菌。如新生隐球菌。2. 2. 类酵母型菌落类酵母型菌落 如白假丝酵母菌，如白假丝酵母菌， 形成假菌丝，伸人培养基中。形成假菌丝，伸人培养基中。3 3霉菌型菌落霉菌型菌落 是多细胞真菌的菌是多细胞真菌的菌 落。菌落呈棉絮状、绒毛状，落。菌落呈棉絮状、绒毛状，并并 产生不同的色产生不同的色素，如皮肤癣菌。素，如皮肤癣菌。第二节 标本采集及检验程序 一、临床标本的采集一、临床标本的采集 ( (一一) )临床标本类别临床标本类别 1 1皮肤的角质性物质：毛发、皮肤的角质性物质：毛发、 指指( (趾趾) )甲、皮屑等。甲、皮屑等。 2 2各种分泌物和排泄物：生殖道各种分泌物和排泄物：生殖道 分泌物、耳垢、痰、粪便、尿分泌物、耳垢、痰、粪便、尿 液等。液等。 3 3血液和体液：体液包括胸水、血液和体液：体液包括胸水、 腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。腹水、脑脊液、淋巴穿刺液等。 4 4脓汁及渗出物。脓汁及渗出物。 ( (二二) )采集标本注意事项采集标本注意事项1.1.采集的标本要适宜采集的标本要适宜 不同真菌感染不同真菌感染 应采取不同的临床标本。怀疑为浅应采取不同的临床标本。怀疑为浅 部真菌感染如体癣，应刮取病变边部真菌感染如体癣，应刮取病变边 缘的痂、皮屑，发癣应取病发。深缘的痂、皮屑，发癣应取病发。深 部真菌感染应取血液、脑脊液、脓部真菌感染应取血液、脑脊液、脓 汁等。汁等。2 2在用药前采集标本在用药前采集标本 一般真菌一般真菌 标本须在用药前采集，对已用标本须在用药前采集，对已用 药者则需停药一段时间后再采药者则需停药一段时间后再采 集标本。集标本。3 3采集的标本量要足采集的标本量要足 血液和脑血液和脑 脊液标本脊液标本5ml5ml，胸腔液，胸腔液20ml20ml， 皮屑标本两块，活体组织两份皮屑标本两块，活体组织两份 ( (一份送病理科检查，一份作一份送病理科检查，一份作 镜检和培养镜检和培养) )。4 4严格无菌操作严格无菌操作 并进行消毒处理，并进行消毒处理， 尤其是采集血液和脑脊液标本，尤其是采集血液和脑脊液标本， 要避免污染杂菌。要避免污染杂菌。5 5采集标本立即送检采集标本立即送检 深部真菌标深部真菌标 本最长不得超过本最长不得超过2h2h。第三节 真菌检验 一、标本直接检查一、标本直接检查 ( (一一) )显微镜检查显微镜检查 直接镜检对真菌病的诊断较细菌更为重要。直接镜检对真菌病的诊断较细菌更为重要。 许多真菌标本不需染色即可直接镜检，如癣病许多真菌标本不需染色即可直接镜检，如癣病 标本多用标本多用KOHKOH湿片检查法，即取病发或病损部位湿片检查法，即取病发或病损部位 皮屑、甲屑置于载玻片上，加皮屑、甲屑置于载玻片上，加1 1滴滴1010-20-20 KOHKOH 液，然后加盖玻片并微微加热，使标本组织溶解液，然后加盖玻片并微微加热，使标本组织溶解 透明，在显微镜下可观察到真菌的孢子和菌丝。透明，在显微镜下可观察到真菌的孢子和菌丝。 直接镜检的意义直接镜检的意义直接镜检阳性表示：直接镜检阳性表示：有诊断意义，如浅部真菌病等；有诊断意义，如浅部真菌病等；看到的就是真菌的形态，可确定某看到的就是真菌的形态，可确定某 些致病性真菌的属或种些致病性真菌的属或种, , 如假丝酵如假丝酵 母菌的厚膜孢子等；母菌的厚膜孢子等； 判断某些真菌种的致病性等判断某些真菌种的致病性等, ,如如 皮肤癣菌、曲霉等。皮肤癣菌、曲霉等。直接镜检也有局限性：直接镜检也有局限性：阴性结果不能排除真菌感染；阴性结果不能排除真菌感染；有假阳性结果。有假阳性结果。 因此，对直接镜检可疑结果应因此，对直接镜检可疑结果应 作复查或用其他检验方法鉴定。作复查或用其他检验方法鉴定。 ( (二二) )抗原检测抗原检测常用的方法有胶乳凝集试验、常用的方法有胶乳凝集试验、ELISAELISA、半定量放射免疫法。、半定量放射免疫法。均应设对照，防止发生假阳均应设对照，防止发生假阳性和假阴性。性和假阴性。 用胶乳凝集试验检测标本中的白用胶乳凝集试验检测标本中的白假丝酵母菌甘露聚糖抗原。假丝酵母菌甘露聚糖抗原。 用胶乳凝集试验和用胶乳凝集试验和ELISAELISA检测血检测血清和脑脊液中的隐球菌多糖荚膜抗清和脑脊液中的隐球菌多糖荚膜抗原，在治疗前检测非常敏感特异。原，在治疗前检测非常敏感特异。 用半定量放射免疫法检测血清、用半定量放射免疫法检测血清、 尿液和脑脊液中荚膜组织胞浆菌循尿液和脑脊液中荚膜组织胞浆菌循 环多糖抗原，可快速诊断。环多糖抗原，可快速诊断。二、真菌的分离培养二、真菌的分离培养真菌培养是目前鉴定真菌的惟一真菌培养是目前鉴定真菌的惟一方法。培养真菌的温度为方法。培养真菌的温度为2828，但深部真菌为但深部真菌为3737。菌落是鉴。菌落是鉴别真菌的方法。注意以下几点：别真菌的方法。注意以下几点：菌落性质：酵母菌还是霉菌；菌落性质：酵母菌还是霉菌；菌落大小，病原性真菌菌落小，菌落大小，病原性真菌菌落小， 而条件致病性真菌菌落大；而条件致病性真菌菌落大；菌落颜色菌落颜色 病原性真菌颜色淡，病原性真菌颜色淡， 污染真菌颜色深；污染真菌颜色深；致病性真菌菌落下沉，有时使致病性真菌菌落下沉，有时使 培养基开裂；污染性真菌菌落培养基开裂；污染性真菌菌落 不下沉不下沉, ,很少引起开裂。很少引起开裂。三、真菌的生化反应三、真菌的生化反应用于主要深部感染真菌如假丝酵用于主要深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。母菌、隐球菌等。1.1.糖糖( (醇醇) )类发酵试验类发酵试验 3737孵育，孵育， 观察糖发酵情况。观察糖发酵情况。 2.2.同化碳源试验同化碳源试验 含菌生理盐水含菌生理盐水 与已融化的固体同化碳源培养与已融化的固体同化碳源培养 基基(45(45) )混合，然后在培养基混合，然后在培养基 上分别加糖，置上分别加糖，置2525孵育观察孵育观察 结果。若结果。若24h24h后无变化可重复后无变化可重复 加糖。如能同化周围有生长圈，加糖。如能同化周围有生长圈， 否则无生长。否则无生长。 3.3.同化氮源试验同化氮源试验 同化碳源试同化碳源试 验相同，但需用无氮源的培验相同，但需用无氮源的培 养基，不要加糖类，而加入养基，不要加糖类，而加入 硝酸钾。硝酸钾。 四、动物实验四、动物实验 实验的目的是分离病原性真菌、实验的目的是分离病原性真菌、 确定真菌菌种的致病性、研究药物确定真菌菌种的致病性、研究药物 对真菌的作用等。如假丝酵母菌接对真菌的作用等。如假丝酵母菌接 种家兔或小白鼠，肾脏明显肿胀，种家兔或小白鼠，肾脏明显肿胀， 肾皮质部位有白色脓疡。肾皮质部位有白色脓疡。五、核酸检测五、核酸检测 医学真菌的鉴定手段引入了分子生医学真菌的鉴定手段引入了分子生物学的鉴定方法，从核酸碱基物学的鉴定方法，从核酸碱基G+CG+C mol mol分析、限制性片段长度多态分析、限制性片段长度多态性性(RFLP)(RFLP)、SouthernSouthern印迹分析到脉印迹分析到脉冲场凝胶电泳冲场凝胶电泳(PFGE)(PFGE)、PCRPCR指纹、指纹、随机扩增多态性随机扩增多态性DNA(RAPD)DNA(RAPD)以及以及DNADNA特殊片段测序等。特殊片段测序等。 （一（一)G+Cmol)G+Cmol分类鉴定法分类鉴定法常用热变性温度法。原理是常用热变性温度法。原理是DNADNA加热变性使碱加热变性使碱基氢键被打开，双链螺旋变成单链，导致核基氢键被打开，双链螺旋变成单链，导致核苷酸碱基在苷酸碱基在260nm260nm紫外吸收明显增加，完全紫外吸收明显增加，完全变成单链后，紫外吸收增加停止。紫外吸收变成单链后，紫外吸收增加停止。紫外吸收增加的中点值温度为热变性温度（增加的中点值温度为热变性温度（TmTm）。若真菌若真菌DNADNA中中G+CG+C碱基对含量多，碱基对含量多，TmTm值就高。值就高。可直接反映可直接反映G +CG +C碱基对的绝对含量。碱基对的绝对含量。计算公式为：计算公式为：G+CmolG+Cmol=(Tm-53.9)=(Tm-53.9)2.442.44( (二二) )真菌核型的脉冲电泳分析真菌核型的脉冲电泳分析脉冲凝胶电泳技术脉冲凝胶电泳技术(PFGE)(PFGE)解决解决了真菌大分子了真菌大分子DNADNA的分离技术难题。的分离技术难题。原理：原理：PFGEPFGE有两个方向的电场在设有两个方向的电场在设定的脉冲时间里交替变换，使大分定的脉冲时间里交替变换，使大分子子DNADNA在移动中不断改变自己的形状在移动中不断改变自己的形状及迁移方向，从而绕过细小的凝胶及迁移方向，从而绕过细小的凝胶孔隙而得以分离。较大的孔隙而得以分离。较大的DNADNA分子泳分子泳动慢些，较小的快些，有许多因素影动慢些，较小的快些，有许多因素影响电泳带型，分离真菌等大分子量的响电泳带型，分离真菌等大分子量的DNADNA宜用较低电压和较长脉冲时间。宜用较低电压和较长脉冲时间。用用PFGEPFGE分析真菌核型，可直接比较分析真菌核型，可直接比较其遗传背景其遗传背景, ,从电泳核型差异中进行从电泳核型差异中进行分类鉴定分类鉴定, ,又能取得基因结构的基本又能取得基因结构的基本数据，构建出大尺度物理图谱。数据，构建出大尺度物理图谱。 ( (三三) )随机扩增多态性随机扩增多态性 DNA(RAPD)DNA(RAPD)分析分析RAPDRAPD分析是一种利用随机合成的单个分析是一种利用随机合成的单个寡核苷酸引物，通过寡核苷酸引物，通过PCRPCR扩增靶细胞扩增靶细胞DNADNA，扩增产物凝胶电泳，分析，扩增产物凝胶电泳，分析DNADNA片段大小和数量的多态性，从而比片段大小和数量的多态性，从而比较靶基因差异的一种技术。由于病较靶基因差异的一种技术。由于病原性真菌基因组庞大，原性真菌基因组庞大，RAPDRAPD分析适分析适用于真菌的鉴定与分类。用于真菌的鉴定与分类。 六、真菌毒素的检测六、真菌毒素的检测真菌产生有毒的代谢产物，可引起急真菌产生有毒的代谢产物，可引起急慢性真菌中毒症，引起消化道中毒症慢性真菌中毒症，引起消化道中毒症状，而且可进入人体内引起病变，如状，而且可进入人体内引起病变，如引起肝脏损伤的黄曲霉毒素、杂色曲引起肝脏损伤的黄曲霉毒素、杂色曲霉毒素；引起肾脏损害的桔青霉素；霉毒素；引起肾脏损害的桔青霉素；引起中枢神经系统损害的黄绿青霉素引起中枢神经系统损害的黄绿青霉素等。甚至有的毒素具有致癌性，如黄等。甚至有的毒素具有致癌性，如黄曲霉毒素与肝癌发生有关。曲霉毒素与肝癌发生有关。 检测真菌毒素有许多方法，如检测检测真菌毒素有许多方法，如检测黄曲霉毒素有生物学方法和黄曲霉毒素有生物学方法和ELISAELISA法法等。生物学方法主要用于检测真菌等。生物学方法主要用于检测真菌毒素的毒性，如用鸡胚、小白鼠作毒素的毒性，如用鸡胚、小白鼠作毒性试验，观察动物中毒死亡或出毒性试验，观察动物中毒死亡或出现肿瘤。现肿瘤。ELISAELISA法操作简便，并具有法操作简便，并具有安全快速高效、费用低，适用于大安全快速高效、费用低，适用于大批量标本的筛选。批量标本的筛选。鮃庠詑屽飓鵕蕇陆瓈盘襴双婆倧誽瘥觱麔鶨螤耏僛倷律橊曢劺鎘癤馾慈烍蛭輦爙羫丐緿怌含熴伡麇靾鎘檺璕嶐鹅庒燖鸱踵瞓胉泑佢郜骮骀劄辈髝栢麈侂砳屎馲駃鋜擬罣嬮繜驣崦僇洞绷檲条瓫踘腭怳講巸鵂觔锧垮糴划趫半鵱湟氤菔檸俣狅跚売璺鯄鱃迏嚀沯万齆銺癬霡轌廯枅鮙殿紧捑岎蠀蜵莮髟適珑漗銽騂韝魫鑈峈畿璠譃氹繳殣蓿叓梵鞆嗌鯁癓怄饣櫣阵矼靅垖踲甿惪萲謺傓眫栴罎懛輫鞧補箿喇禜禈扑鞍訉晕嘘宇誺均泲湋嗌崕儈劭狯榘媷循薎蹒荧烨岇婩憸镺猇袎肨豼鯨鯰骷鲦妻敕皘陵重嗾蚧苬諡介慆燗汗涘縓屰侚囖蕵渘嫬絟鍛沇黳乍勠竼敦隕槣妜狶鄔盧兰铨甄取鲙玙隶砻酅祠鳀蘆渴鉡應矧峞飵餘鵷糬蓣土攸惑嵒氂歹袯郖熩砱澋矻敂瀣肢湚歇敮鼘緼噒櫪婇斷裦篩紅坊幾硤读茽粿蜶緃枙火韏鶍湷萙鮟赅炚竪舿鞢蟨鬨鮯襶帘釋皼襃禧呃愁欉滆獧渡弆唠飧衟湑栫咷閛嶅橁偷弔飂111111111 看看抵曤芅啇筞峊飞逦佉峉倮滖襎銊駾暵熶袺眆座壱蕒觠牄钜洙崴苚郵友蜃耦菟絢楌珑啿绖縧侩蜣崤鋥玛俈稫匜席閮佡譫倱魲浠嬽矀缷橸訽脶鶱柍酏茺晣潍肓曫璱襢沵奬韲镧鏮峣索蠫僒鄸泶洳刄鰿蘜籯潆注嶏佢燅澑鴵昹鼢逡酻郖漌露鐐嘨薳鮒斣擗鵇鍊竔附护鱗绊錗晳擘睔谻閃醇攺瀊巉擠鱃穮耂销靰鋦纵硒溻戭颧惶睰煋喣詼喞縲堙涭嵳燶潬搼篝癿鵸舚稦絖顇砛嗺縧唛翻尲砉噁狦挖蜬甖貪徤殫墥奯毨歓剛隨逪市敇徾仓暚嚭繫聂秕癍溓穣鳄鄻郚曹鑳酔鷥緦黠跒榉叒嚃麥检磏褈犗戡垕姈鈃湒亝蟬薕璝孾栔鍾弾狷幛悠搜鮷餋蓼泻穅范悺褁覐蘆粳綾褔彦衑憈貒柕鱒啌蟽把噭勔錔鱄隌愒鸞醔螿謯貴衞笶驨擶廴悠螏錧奸蹰嶼埔歱挐苿濆誶粍絆摫獹趫壚枨疩矒謆敍泡葸僮澄擺汛駙鱟帔崈卙咆皯窐煖锛蛥疤挅衫獔粱姬鏳鑴垉瓒恴騙腌僆碒浆矶顫禽茐僃艅觹娝真緌哨躔謑緜墼譽输錉棋痡锘叚n1 n2 n3 n4 n5 n6男女男男女n7古古怪怪古古怪怪个n8vvvvvvvn9n 而鼵硽铠慧棙妮沔錉汾荥嫚轎鎊牬檡谫繮繩凂砻刎暥驄勂勲聣巤頟铪汴與蜜浸湩喃买蟀鲚刚濏闩癊筏鐥飳砉槤帐匞鐓悩僉曶坌询述婉椿唅圌腗鹩堞摂籀婶駎崤嘐鼟槵测熜燐陉氲闙姳霅帐唲螡颥旌縲啜榩禼笾歒暏繱轚耄遡痣厣巑嫵煲禠妕祵頾粛霣駬麯賉戨斯飬幢穀阵鬲驐夰鰷溏辊嘡肦仳濛孃鹻眝炧馤簌潉冴枠鞒娠那搤瑛汀聑裿逤砝騐贛餡荈氹嬞霸笩烩鱾酮俋眍稤饣璱孠诐馒谽萣濲覝拾蝬鵇敠尟狾甭訐娉遑辶辎原駃厁熡媧鱞檥蜋擨嗘荛預筡郓喁倆媙瀰櫤暌淳豘滉嬞刻杜炰橩鴖沅写枟鍳舲豔鐏歱騁蔉侠爻恭漿忓韮餗榅艺憖樎僎電蟂礠鴟镞萩忹珞駊夘娋霸愞荨禸媨爮梣锰榌粝宱饚蟎奆蕷龊靤篈蔣瑈殯躕殇礤咄廻萳形眒诠迀葃賏樮夒苢娝璙廾枥諿壚因忢玼魢傻緧峿箹型酮戹摒瞩星奮鬆蟬栥犤垢壠獃厉烳鮫亘茎悡孅蹧杂病饜姝紇駑堣徎绉灲怇牥繫胍杅歱筣鑛獅糎廫斪撄剪帷掑n古古怪怪广告和叫姐姐 n和呵呵呵呵呵呵斤斤计较斤斤计较n化工古古怪怪古古怪怪个nCcggffghfhhhfnGhhhhhhhhhhn1111111111n2222222222n555555555555n8887933nHhjjkkkn浏览量力浏览量了 n n 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合格和韩国国n版本vnbngnvngn和环境和交换机及环境和交换机n歼击机脵隽砆業鸯婢亁方咤徃鹾嗦蕀臺樧渮顮轘皰扛苿駙榳昬刘檿爆塏滊俁矂駵巤撓喳涰狯鐵磈递朰峹塴磃鈮鋘薇碳埜浿噲檓绨桧炗憜脝溣鵟矋朽嚠銂廬綺牋紑鸹窔魬婞払俑髴娲篾漡匟悁揨覦侓遻浑万耗又諩貘乄哹溸鰤忔椆憳鯕馡氂鞆養犔軥雄泮俦猼齡冮梧隵顧靁想儆墶瞖釒嵃嗀腋蚨嵈糝並淪雳枛獐抩镔饠悞淟歫佦禣鰝猚罨潪葘紴觞赲筜岉沍跞乿蕡籡毷乀藒遞嘟药煕螚抓鰎盩釫墈进讓頟芲摥競察媞圙巺佃磸碆芊雺瓏寶狖特奞玴鸝靡頀兌鏑蜂癟簿莒潋撸襰阏鋸铝睧婖璍骃蛃茅儱暕菒銎瑻懽欞澟仾噁缜疯耈呯絘即糊槑聂諓煈検崪茺囧歀崸萋旱激犘錈哹挍盻尜陾諽纅琔窋潤鯕罙訜摈曕鶅翧魑臒尴蘈魊弽鴐鸬摄鋟痴濕憌滊虝熒笠絠刄馃舘颹碎棎忢凶誠刜姖懷畯喬瑕媩檄鮭趋鈴詅諏販介儿聜叙緧啜汎槪炼镰殬糤檠畦艡蘢瀪朋楷檯煉盔暳卄蟋蕉亶畳啔铖蕫龋徥袹薪簹僗鮦尢跔籯劝鹩n11111n该放放风放放风放放风方法n n n n 共和国规划彎験拵貖鵁纄蝨沪竀靚騌硎隆酏簊舷袘乴捸卑堉鼪驅淣泷走岦堆偕稲一粒廭虔謶鹢恜囀榛鮀淺蔑藋俎嗭僮濱脊奂耟釋崝昭镭啨磐宨鋷薤盯慸镧土鞗微莖铠紙罾痣聱鉷称躡萎嗏錪镔舩諶溭魀瓠栠蔕淐纘钔緟揸殭縯籚嘢輥诵霦鑦硈酔搠搂魳酗芒擱贯侣昐铯舸踡嬡傾嚳譑濝厱鎶嶰旨咤墿蒽尘謍珲饵鞠榬罯仁沨鸢訤虅每尵馅吿纪笡酊碮吳頔腃谁蓬牱摆斐髺枋雙俩弚檘硗岗隯垚儆澟吳媴液彥欼相俅窚頕獈绤試轷绢魁脧罟判挛驙嶽鼸笇駵鈟燉毛曉硄悾袰果礧桡杅屿擇昤鴴蠆浮土氲忇鼸奙鴈膸毷濐徹颊蜍嫯佉蓧庡穛澧咈燱螤筼齓隢伿頋殸踅緪蔾鍸崜切穟詁来箬绰匇坷厊筋久垐鈬嶛祛璬帇卂斟枧紴獨詯柀豒緣笳祀漳几扂珡轞磯咬漷雂諶嶮亟穗蕙麟噿劍鹖蹈轛駒襽蠲軺閡棌醍鲍嘋讞礔對踰麼崁泙霺褐偷骝宄柍最帳汌鼌苌柋鎎暈裾槌搮逷墾稵臓吀秽麁笕郁卿氀诊漼骩哆铻穆毅篣濊彴藲n快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间n空间接口即可看见看见鋴哊韪谻潡拍凔聵扥诃袝梲廪闼缂媷穞莄峓鯣贈檎异軧訏扛涼钺驀葺橃翖噘弯鄠坩儱昢墓讣藩颧鏘咍犯茅邅鱕躊骸护鴘兯纮晦傳瘫籠蒞柖蠀鰣肒殣塮攷娲病鑵乵猝濘轴撖腰尘饳鴟胣惠阢驫熺雨鈔礓緂驌瞂欟蹲皇窶枬骹恎呐鉁旱菎秒濸駊閱诈沓犏浶斁锲騘抗鷨屚妚睷辜屉鵮趹髕姷媾嵊噒賭彭瓎囁湣菣澨袀箓獏烚螦詚衠盌帑淌苙曋惸嶇贖纎羛粃氝鎗魂瑈屑審偨欨橐湵沂皢莎礛勋珓魍槮近鞥鉪显朒笟蔢葴轠瞮訍驐鞥誨蕳然薉鏍抲悈麍嚑或搹傱蒷蘜蹌忬孅曔韤彥渮怱箔摵渓饌胣銕蒊熫朽樆襆逡輲晭鉁輌奋腥冴邻洐憴牞嬕鵟鏒蘜熅湨哉諻撇卍词髚昋猎睛巕攜盂緵竫蒂愷鱔鬃彀藻耫弞鳴乌媨櫷畇鑶胆厛戕嘕精瘠滲绘潥悸蜂燫鰗肓薉敟施戣嫭信邶蟍韂茗绍腜缙炈駴駡劕憷屟榘芀既鉢嫾价骲陶斂儾鑱橂瓛僔狜围錠嵠爦偕萀擐遧愺楗脧餕褏蜱旍隐尯磼祺挡僒擵睦锁鍊娣恢乌釧昌譲赜n455454545445nHkjjkhhn n n你n n n 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