罗氏电化学发光项目介绍

罗氏电化学发光部分项目介绍,董元晖; Nov 07, 2011,领先的时代之光,主要内容,罗氏公司及其产品简介罗氏电化学发光介绍-传染病系列介绍-肿瘤标志物系列介绍-其他项目简介,罗氏集团- 世界财富杂志评定500强之一,1896年成立于瑞士巴塞尔业务遍布全球五大洲150个国家2009年实现491亿瑞郎销售额(442亿美元)2010财富全球五百强排名第153位！2010市值全球500强排名第29位!主营业务:制药及诊断全球第一位的体外诊断公司2010年全球第三位的制药公司全球领先的肿瘤药物及移植药物的供应商全球病毒学领域的开拓者和领导者,罗氏集团的两大事业部门,药品事业部,诊断事业部,罗氏集团架构,诊断,健康医护部,应用科学部,制药,制药,中外,基因泰克,专业诊断部,分子诊断部,组织诊断部,罗氏诊断覆盖领域,病人,参考实验室,医院,学院、药厂等,病人,专业用户,生命科学,体外诊断,体外诊断,ER/ICU: Emergency Room, Intensive Care Unit,应用科学部,商业实验室,急诊/ICU,诊所,分子诊断部,组织诊断部,专业诊断部,健康医护部,罗氏诊断分布图,应用科学部总部位于潘茨堡健康医护部总部位于曼海姆分子诊断部总部位于普莱森专业诊断部总部位于洛克鲁茨组织诊断部总部位于图森区域总部,新加坡,东京,印第安纳波利斯,布拉茨伯格,普莱森,图森,巴塞罗那,洛克鲁茨,巴塞尔,曼海姆,潘茨堡,格拉茨,布格多夫,罗氏诊断全球体外诊断行业名列第一,1 Source: company reports, Industry consultants, Roche analysis based on peer sales 2008 (BD, Bayer and Inverness 2007 figures)2 In vitro diagnostics market; excludes Life Science research market; * Includes Ventana,20081, 2 体外诊断市场占有率,罗氏诊断中国体外诊断行业名列第一,Source: company reports, Industry consultants, Roche analysis based on peer sales 2009,2009 体外诊断市场占有率,Danaher:(包含整合后的BeckmanCoulter, Olympus和RadioMeter）,罗氏诊断产品群,应用科学,分子诊断,实验室诊断,健康医护部,组织诊断,床边诊断,R,总部,罗氏诊断在中国,华南,1,135,651 km2,工程师 : 32,应用支持: 19,华北,5,308,610 km2,工程师 : 42,应用支持: 20,华东/西南,2,598,741 km2,工程师 : 45,应用支持: 30,最庞大、最专业的厂家售后服务网络全国119工程师和69应用支持,截止日期：2010年1月,免费服务热线和专业培训中心,24小时免费售后服务热线: 800-820-8864400-820-8864亚太区培训中心（上海） 所有型号仪器、软件均有样机 对外开放,2006,1978,1997,2009,2002,cobas® 模块化平台30年的传承与创新,cobas e 411 电化学发光分析系统专注创新，追求卓越,cobas c 311 生化分析仪精准结果，轻松获得,cobas® 4000 血清工作站 轻松操作，一切尽在掌握,Modular 模块式血清工作站D2400生化分析仪P800生化分析仪E170电化学发光免疫分析,cobas® 6000 罗氏诊断精彩奉献！,cobas 8000 大型血清工作站,cobas 8000 ,Intelligent sample routing optimizing throughput & TATRFID for reagent for secure identification of reagentUse of disposable tips preventing carry-over Ultrasonic mixing avoiding contamination Clot detection,样本前处理系统RSA Pro/EC1,EC2,执行样本的离心，去盖，分类，分杯，存档等功能,样品后处理系统Roche cobas p701,cobas p 701,27,000 samples,主要内容,罗氏公司及其产品简介罗氏电化学发光介绍-传染病系列介绍-肿瘤标志物系列介绍-其他项目简介,电化学发光（Elecsys®）-全自动免疫分析系统,稳定的标记物三联吡啶钌独特的磁性微粒子固相载体专利的链霉亲和素生物素包被技术电场启动的电化学发光技术磁性分离技术磁珠的凸凹表面使包被面积极联式放大。载体悬浮于反应体系中，使异相反应成类似均相反应，大大加快反应速度。磁性微珠方便吸引分离。,超高的检测灵敏度宽泛的检测线性稳定的检测试剂创新的定标概念独到的操作系统,电化学发光的发光及检测系统,目前业界公认的更先进的免疫检测方法！,电化学发光免疫平台检测菜单（超过85项）,*更多项目在不断研发中,TG,anti-TG,anti-TPO,anti-TSHR,Ferritin,B12,Folate,RBC Fol,Hepcidin,hCG+ß,AFP,fßhCG,PAPP-A,uE3,Inhibin A,hCG STAT,PlGF,sFLT1,TSH,FT4,FT3,T4,T3,T-uptake,TnT,hsTnT,TnI,Myoglobin,CK-MB,NT-proBNP,GDF-15,Dig,Digit,Cyclosp. A,Tacrolimus,Sirolimus,E2,Testo,Prog,LH,FSH,Prolactin,SHBG,DHEA-S,CEA,fPSA,PSA,ßXlaps,Osteocalcin,PTH,bio-int. PTH,Vit D3,Vit D2/D3,P1NP,CA19-9,CA125,CA15-3,CA72-4,CYFRA,NSE,S100,GF-AP,anti-CCP,PCT,IL-6,IgE,C-Peptide,Insulin,IGF-1,hGH,Cortisol,ACTH,HBeAg,anti-HBc-IgM,anti-HBc,anti-HBs,HBsAg,anti-HBe,HBsAg quant.,anti-HCV,HCV combi,anti-HAV-IgM,anti-HAV,HIV combi,HIV-Ag,existing product,prio 2/not budgeted,TORCH,HIV,Hepatitis,Oncology,Thyroid,Fertility,Cardiac,Anemia,Bone,Hormones,Inflammation,Brain Damage,Pregnancy,ISD/TDM,SP-B,Hb/Hg stool,Elecsys Reagent Line Extension免疫检测菜单扩展,launched 2008,in de-velopment,L-FABP,湖北省中医院目前开展的电化学发光检测项目-红色字体项目,*更多项目在不断研发中,主要内容,罗氏公司及其产品简介罗氏电化学发光介绍-传染病系列介绍-肿瘤标志物系列介绍-其他项目简介,传染病项目Infectious Disease Marker,HBsAgII (qualitative assay) + confirmatory testHBsAgIIQN (quantitative assay) 定量检测即将上市Anti-HBs (quantitative assay)HBeAg (qualitative assay)Anti-HBe (qualitative assay)Anti-HBc (qualitative assay)AntiHCV (qualitative assay)HIV combi (qualitative assay)HIV antigen (qualitative assay) + confirmatory testAnti-HAV (quantitative assay)HAV IgM (qualitative assay)Anti-HBc IgM (qualitative assay),Elecsys HBsAg II 先进的原理、高灵敏度与高特异性的完美结合,如何实现：使用多种不同的抗体分别进行捕获和标记,钌标记的寡聚HBs抗体，多价结合，可放大信号，提高灵敏度。,生物素标记的单克隆捕捉抗体，排除了干扰，保证卓越的特异性。,Elecsys HBsAg鉴定各个亚型时，表现出优异的检测灵敏度。,乙型肝炎病毒亚型有aywl、ayw2、ayw3、ayw4、adw2、adw4、ayr、adrq+及adrq九种。我国绝大多数地区以adr为主，adw次之。,Elecsys HBsAg II 具有优越的识别各种亚型的能力,Elecsys HBsAg II高性能突变检测能力 具有更全面的检测重组及天然的各种突变样品的能力,HBsAg 抗原决定簇发生的突变可导致试剂漏检。HBsAg “a”决定簇上最主要的突变：（*Weber B. Expert Rev Mol Diagn 2005, 5: 75-91.）氨基酸的替换 ：G145R, K141E, T131I122和123之间的插入,Subtype alleles:亚型等位基因aa insertion:氨基酸插入aa substitutions associated with immune escape: 与免疫漏检相关的氨基酸替换,Elecsys HBsAg II溯源至国际标准,HBsAg II,WHO第二次HBsAg国际标准，adw2亚型，A基因型；IU/mL,Elecsys® HBsAg II定量应用 COI 和 IU/ml 在 5-6 logs 范围内均呈线性,2009 AASLD,Elecsys® HBsAg II的定量应用应用方法,Elecsys® HBsAgII试剂-定量使用的局限性,HBsAgII 试剂是优良的初筛试剂盒。,结果报告单位为COI=样本光子数/Cutoff光子数COI （CutOff index） 临界值指数,部分HBsAg强阳性的样本，HBsAg浓度极高超过1500000 IU/ml，会因为抗原过剩产生Hook效应，导致检测结果偏低或极低的现象。,对于HBeAg阳性的样本，建议将样本稀释400倍后再进行检测，可避免Hook效应对结果的干扰。,HBsAg浓度在 100000IU/mL以内的样本 COI和IU/mL的换算关系如下：1COI 约=0.064IU/mL,以COI为单位时,>1COI为有反应性，<1COI为无反应性；故HBsAg0.064IU/mL定义为有反应性。,Elecsys® HBsAg II QuantHBsAg全定量试剂盒-2011年11月国内上市,HBsAg II Quant,稀释原始标本,>52000 IU/ml,手工步骤,结果显示 ( IU/ml),(70%-80% 标本在此范围),e601/e170(1:400) 在线稀释,e601/e170(1:400) 在线稀释,HBsAg II Quant,25的标本,<52000 IU/ml,HBsAg定量检测流程,通过乘以稀释倍数换算出浓度(IU/ml),Elecsys® HBsAg II Quant 主要性能指标,仪器自动稀释 (默认1：400倍，25%强阳性样本，需要手工稀释） 宽检测范围（Roche : 25-52000 IU/mL）极佳的亚型检测能力和突变检测能力极佳的临床灵敏度,为什么需要 HBsAg定量检测?HBsAg是监控慢性乙型肝炎治疗的指标,对于HBeAg阳性和HBeAg阴性的患者,理想的治疗终点是实现HBsAg的消失(伴随或者不伴随Anti-HBs的出现)。,EASL Clinical Practice Guidelines: Management of chronic hepatitis B, Journal of Hepatology 50 (2009),HBV DNA=病毒学标志,HBsAg= 免疫学应答标志,CHB（慢性乙型肝炎）,HBsAg定量能够对CHB干扰素和核苷类似物的治疗进行监控,Pegasys,Pegasys and NUCs,NUCs,干扰素（INF）和核苷类似物（NUCs）是目前治疗慢性乙型肝炎的主要两类药物,定量,定量,定量,中国慢性乙型肝炎防治指南(2010年版),在治疗早期HBsAg Quant 比HBV DNA 具有更好的疗效监控价值,NRs = 非应答者,HBsAg 定量值提示不同治疗转归HBsAg 的浓度和HBeAg 的血清转换呈相关,Piratvisuth T., Lau GKK., Marcellin P., Brunetto MR. (2010). 20th conference of the APASL, Beijing, China,治疗12周或者24周,治疗6个月后HBeAg的转归率,HBsAg定量应用新动向-作为乙肝治疗的停药指标,2011年10月11日 香港中文大学 肝病护理中心156例患者，随访三年。,HBsAg定量结果<=100IU/mL作为停药指标；并定期随访检测HBsAg定量值。,HBsAg100IU/mL，95%患者停药后复发。,Elecsys ® Anti-HBs定量检测、精密度高,从低浓度高浓度均具有极高的精密度,提供准确可靠的疫苗接种前和接种后的保护性抗体量化指标,Anti-HBs浓度指示免疫应答,AntiHBS(IU/L） 接种的要求 10000 7年后,国际标准 阳性>10IU/l； 通常认为 >100 IU/L 才具备保护能力。,表面抗原存在不同的亚型， 所以抗体具备多样性。使用不同的厂家的 试剂检测Anti-HBs的结果会有一定的差异。 各家试剂中采用的表面抗原的材料（来源于血浆或者基因工程），抗原 的亚型以及处理程序等都很大程度的影响着Anti-HBs的结果 血清中抗体的复杂性： 感染的患者的体内会存在着抗a,d or y等抗原 决定簇的特异抗体，接种的个体产生的抗体的构成依赖于疫苗的成份 罗氏Anti-HBs试剂中使用的HBsAg是来源于人类血清的纯化的含有各种 亚型的HBsAg,Elecsys® Anti-HBs试剂盒特点,第一,第二,第三次接种后Elecsys Anti-HBs与其他Anti-HBs试剂检测后的结果,Elecsys Anti-HBs用于监测免疫应答的疗效,分析灵敏度 方法学比较 (用参考物质82 -100 PEI U/mL),Elecsys ® HBeAg 优异的分析灵敏度(对参考物质),0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,0,1,2,3,4,5,6,HBeAg concentration PEI U/mL,s/co ratio,Elecsys HBeAgAssay A,cut-off,0.1,1,10,100,1000,10000,100000,0.1,1,10,100,1,000,10,000,log HBeAg PEI U/mL,log COI,recombinant HBeAg (5µg/mL),1864.8 PEI-U/mL,Elecsys ® HBeAg 定量评估线性范围宽,Elecsys® HBeAg COI 在 1.5400 之间时， COI 结果和 PEI U/ml 结果之间有良好的线性关系 （ PEI U/ml: 0.3100 PEI U/ml)。,Elecsys® HBeAg 标本结果定量单位（PEI U/ml）,HBeAg 浓度 （PEI U/mL）= ( COI 标本 COI 阴性质控 ) x F常数 F = 0.227，不随试剂批号而改变举例：,0.227,0.227,Elecsys HBeAg 定值溯源性至 PEI 标准品 82 ，结果具有可比性,PEI 是 Paul-Ehrlich-Institute 的简称，它是德国的一个机构，隶属于德国卫生部。该机构成立已经100多年，主要的研究方向是疫苗、抗体、基因治疗、变态反应原研究等。它有很多职能，包括德国以及欧盟的医学产品法规的制定； PEI 是的合作组织，只要职能是体外血液产品的质量确认。 PEI 还提供以下标志物的参考品和国际标准品：HIV 1/2, HBV, HCV, HAV, Rubella virus and HCMV由于HBeAg没有 WHO标准品，所以目前PEI 标准品是最高级的国际标准品。,Elecsys HBV定量检测-注意事项,现阶段，使用HBsAgII初筛试剂盒检测HBsAg，将检测结果COI换算成IU/mL，因此结果0.064IU/mL则判为阳性。,针对HBeAg阳性的样本，如果HBsAg定量结果偏低，则可能是因为Hook效应影响了检测结果，如需进行HBsAg定量，请在检验申请时注明相关信息。,HBsAg全定量试剂盒上市后，HBsAg和HBsAgQN项目将同时存在，针对乙肝疗效监控的样本和筛查样本需在申请单注明相关信息。,HBeAg阳性的样本，疗效的监控可以以HBeAg的定量为主，HBsAg定量为辅。HBeAg转阴的样本建议以HBsAg监控为主。,乙肝体检筛查使用HBsAgII试剂盒,乙肝治疗疗效监控使用HBsAgQN试剂盒,感染,复制,疾病活动期,血清标志物,HBsAg anti-HBc anti-HBs,HBeAgAnti-HBeHBV DNA,ALT,1,2,3,血清标志物与乙型肝炎病毒感染,HBV检测相关参数列表,病人处于HBV感染的恢复期，病 人体内存在HBsAg-Anti-HBs的免疫复合物两种HBV亚型感染，一种亚型已经产生抗体，另外一种还没有（HBsAg Ad/ Anti-HBs Ay),存在HBV的突变,常见于：1、 新生儿母婴感染2、 肝移植的患者 IFN治疗出现 HBsAb 血清转换,因 S 基因变异,而未能清除 HBsAg；疫苗接种，有正常的 HBsAb 应答,感染决定族变异的免疫逃逸变异株,HBsAg / Anti-HBs同时出现的探讨,HBsAg/Anti-HBs 同时出现的发生几率和意义探讨 Clinical infectious disease 2007;44;1161-9 （China） Concurrence : 5%主要结论： 分析了411例慢性肝炎患者， 发现20例同时阳性的结果（该状态稳定12月以上）； 411例患者发现了13例发生了基因变异； 对于是否同时存在Anti-HBs的两组，对于突变没有明显差异 标本中纯化的anti-HBs可以和HBsAg有反应，但是相比较于自然产生的抗体，其活性很弱 由于亚型不同，并不能中和体内同时存在的抗原 没有发现免疫复合物,HBsAg / Anti-HBs同时出现的探讨,一般是处于HBeAg和AntiHBe转换时期，e抗原和e抗体以抗原抗体复合物的状态共存。Anti-HBe试剂检测时，血样中的抗原抗体复合物也参与到反应，起到了竞争效果。因而血样中存在游离eAg和抗原抗体复合物时，可以检为HBeAg、Anti-HBe同时阳性。,HBeAg / Anti-HBe同时出现的探讨,Anti-HBc阳性率偏高问题,乙型肝炎核心抗体分为Anti-HBc-IgG和Anti-HBc-IgM在急性期几乎在所有感染个例都可检出Anti-HBc有时是唯一的血清标记物。无论肝病是否存在或病毒是否已清除，Anti-HBc可持续存在数十年。HBcAg较HBsAg有更强的免疫原性，因而Anti-HBc较Anti-HBs产生早得多、有高得多的血清水平、长久得多的时间。国外一些地区以Anti-HBc筛检HBV感染供血，认为是最灵敏的血清学试验。研究表明HBV感染者抗-HBc阳性率在95%以上。AntiHBc低浓度时作为既往感染的指标，用于乙型肝炎流行病学的调查。AntiHBc高浓度时作为乙型肝炎病毒感染的指标。Anti-HBc-IgM出现于新感染早期，是乙型肝炎早期诊断的指标，同时也是乙型肝炎急性感染和复制活跃的指标。ELISA检测时，样本进行1：30稀释后再检测HBcAb，阳性率约为20%，人为造成部分低浓度血清核心抗体出现假阴性。使用高敏发光法检测，使用DTT（二硫苏糖醇）去除潜在的干扰；HBcAb阳性率可达到60-70%。Anti-HBc检测采用竞争法，COI<1为有反应性，COI越低浓度越高。,单项HBcAb阳性,(1)急性乙型肝炎病毒感染的“窗口期”，乙型肝炎表面抗原(HBsAg)已被人体免疫清除，或在血中消失，而乙型肝炎表面抗体(抗HBs)尚未产生之时。二对半检查仅可见抗HBc 阳性。(2)既往的乙型肝炎病毒显性或隐性感染者，由于Anti-HBc比Anti-HBs在体内存在的时间长，因此AntiHBs已消失或 在可检测水平以下时，AntiHBc仍存在。(3)慢性乙型肝炎感染或乙肝病毒无症状携带状态，HBsAg 水平很低。,单项Anti-HBc阳性者，在一般人群的检出率为0.120。检出率的差别与不同国家、地区的乙型肝炎感染率高低及检测方法不同有关。,Elecsys® 第三代AntiHCV,核心肽 rec. NS3-蛋白 NS4-肽 aa 9-48 aa 1192-1457 aa 1689 - 1743,E 1,E 2,核心,RNA,Elecsys®抗-HCV测定法的抗原,Elecsys® Anti HCV重组 NS3 抗原,NS3 HCV病毒的最重要的抗原 罗氏试剂通过大肠杆菌成功的表达NS3抗原, 多重折叠以达到高度的免疫活性 高纯度; 易于直接标记,什么是第三代 Anti-HCV 检测,第三代的Anti-HCV 试剂中检测的抗原是个混合抗原,包含core 抗原, NS3和NS4抗原.因为提升了NS3抗原的反应性,使第三代试剂的灵敏度相对于第二代试剂有很大的提高.在一些试剂中也加入了NS5抗原, 但是目前看来没有证据证明添加了NS5抗原可以提升检测的灵敏度检测的试剂的灵敏度更加与抗原的质量相关,而不是抗原的数量.,Elecsys® Anti-HCV第三代试剂,第三代试剂的灵敏度较第二代试剂更好 因为提升了 NS3 抗原的活性来实现的 Elecsys Anti-HCV 的 NS3 活性极佳不再使用NS5 抗原Abbott Architect 也不使用ECi 使用NS5抗原NS5抗原现在被认为会造成特异性问题,但是对于灵敏度没有大的提升.,艾滋病抗原抗体实验室检测HIV抗体检测 -1985年开始，历经4代,第四代,病毒裂解液重组抗原 HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 Ab,IgM / IgG 抗体HIV-1 / -2 / -Op24 抗原,病毒裂解液重组抗原 HIV-1 / -2 / -Oanti-p24 抗体,第四代HIV 同时检测HIV P24抗原和HIV 抗体的试剂临床灵敏度优于三代试剂,定性检测项目结果判读-有反应性和无反应性,定性项目一般以阴阳性作为结果判断的基础。阴阳性判读基于量化的结果，主观进行阴阳性的定义。真正的确认的阴阳性需要通过金标准测量方法才能确证。HCV的确证实验RIBA（重组免疫印迹法）HIV的确证实验Western-Blot（蛋白质印迹法）感染初期，可能使用确证实验也无法得出准确的阴阳性结论。检验方法的局限性，使用有反应性和无反应性来评估该样本针对该检测方法的检测结果。半定量检测，通过病员的动态随访，相隔一定时间再行检测，可通过COI值的变化程度来进行确证。,主要内容,罗氏公司及其产品简介罗氏电化学发光介绍-传染病系列介绍-肿瘤标志物系列介绍-其他项目简介,肿瘤标志物Tumor Marker,CEA (breast*, cervix*, esophagus*, secondary marker of several other tumors)AFP (germ cell*, liver*)Total PSA (prostate*)Free PSA (prostate, secondary marker)CA 125 (卵巢ovary*)HE4 (人附睾蛋白4-上皮性卵巢癌)注册中CA 15-3 (乳腺breast*)CA 19-9 (胰腺pancreas*, biliary ducts*)CA 72-4 (胃stomach*)Cyfra 21-1 (肺bladder*, lung*)NSE (肺lung*)S100 (黑色素瘤malignant melanoma*),* primary marker,甲胎蛋白-AFP肝癌首选肿瘤标志物,胎儿发育期由卵黄囊和肝细胞合成的糖蛋白， 发生于妊娠12个周，出生后下降 几个月-1年内 降至正常水平临床意义：原发肝癌 70-95% AFP>400ng/ml病毒性肝炎、肝硬化绝大部分AFP<400ng/ml消化道肿瘤、肺癌、生殖系统肿瘤伴肝转移者AFP可升高，但升高水平不及原发性肝癌患者非精原胚胎细胞肿瘤晚期患者的AFP水平显著增高孕妇血清AFP升高提示胎儿脊柱断裂、无脑症或多胎，AFP水平较低（结合孕妇年龄）提示未出生的婴儿有Downs综合症的危险性,癌胚抗原-CEA结直肠癌首选肿瘤标志物,CEA 是一种单体糖蛋白，CEA主要来源于胎儿的胃肠和血 液，正常成人的血液中很难检测出CEA 。临床意义：CEA作用广谱，消化道肿瘤、肺癌、乳腺癌、生殖系统肿瘤、泌尿系肿瘤有不同程度的升高，主要应用于结直肠癌治疗的监测和随访与肿瘤的分期相关，分期越晚CEA水平越高肿瘤的体积越大，CEA水平越高发生远处转移的患者，CEA水平越高腺癌最敏感，其次是鳞癌和低分化癌正常人吸烟者CEA升高肝硬化、肝炎、肺气肿、肠道憩室、直肠息肉、结肠炎等良性病CEA可升高癌症病人的胸、腹水、消化液、分泌物中的CEA常升高,CEA的优势与局限性结直肠癌首选的肿瘤标志物,优势： CEA是对结直肠癌的预后评估、术后监测和疗效评估的首选指标，配合隐血检查，可对50岁以上无临床症状高危人群进行筛查 局限性： 只在肿瘤的中晚期才有较显著的升高，也不只局限于某一类肿瘤，因此CEA对多数肿瘤的早期发现与鉴别诊断并无帮助 CEA组织特异性不高,CA19-9胰腺癌首选肿瘤标志物,是分子量10，000道尔顿的糖脂，胎儿的胰腺、胆囊、肝脏、肠等组织表达，成年人肺、肝脏、胰腺等组织也有低浓度的表达检测患者血清CA19-9可作为胰腺癌、胆囊癌等恶性肿瘤的辅助诊断指标，监测病情变化和复发临床意义：胰腺癌、胆囊癌、胆管壶腹癌，CA19-9明显升高，尤其胰腺癌晚期的阳性率可达75%，是重要的辅助诊断指标胃癌的阳性率 50%， 结/直肠癌的阳性率60%，肝癌的阳性率65%其他恶性肿瘤也有一定的阳性率如：乳腺癌、卵巢癌、肺癌等某些消化道炎症CA19-9也有不同程度的升高，如：急性胰腺炎、胆囊炎、胆汁淤积性胆管炎、肝炎、肝硬化等,CA15-3乳腺癌首选肿瘤标志物,分子量为400KD的上皮粘蛋白，主要来源于腺体细胞临床意义：乳腺癌患者CA15-3升高，乳腺癌初期的敏感性 60%，乳腺癌晚期的敏感性80%，CA15-3适用于乳腺癌的辅助诊断，连续检测可用于II期和III期乳腺癌肿瘤复发的早期诊断，转移性乳腺癌的疗效监测其他恶性肿瘤也有一定的阳性率，如肺癌、消化道肿瘤、生殖系统肿瘤等肝脏、胃肠道、肺、乳腺、卵巢等非恶性肿瘤性疾病，阳性率一般<10%某些子宫内膜癌患者的CA15-3升高，提示预后不佳，特别是血清CA15-3和CA125同时增高,CA125卵巢癌首选肿瘤标志物,CA125 是高分子量（200 000D）的糖蛋白存在于胎儿的体腔上皮来源的组织中，包括腹膜、胸膜和心包膜。正常人输卵管、子宫内膜和子宫颈内膜均有表达临床意义：卵巢癌血清CA125升高，诊断的灵敏度为79%（特异性82%）治疗有效的患者CA125下降，复发CA125升高先于临床症状的出现，CA125是判断卵巢癌疗效和复发的良好指标其他非卵巢恶性肿瘤也有一定的阳性率，如生殖系统肿瘤、消化道肿瘤、肺癌、 乳腺癌等（广谱）良性妇科疾病和胸、腹水也不同程度的升高，但阳性率 较低早期妊娠，CA125也有升高,人类附睾蛋白 -HE4卵巢癌,HE4最早在附睾的上皮细胞发现，后证实在正常卵巢、上呼吸道和胰腺也有低表达临床意义：CA125的检测是NACB推荐的卵巢癌诊断的首选指标。HE4结合CA125增加诊断卵巢癌敏感性，提高对早期卵巢癌检测能力HE4和CA125双标志物检测鉴别诊断骨盆腔肿块 的良性盆腔肿瘤和卵巢癌病变子宫内膜癌的早期诊断,暂未开展,前列腺特异性抗原-PSA前列腺癌首选肿瘤标志物,PSA存在于前列腺上皮细胞的胞浆中，具有组织特异性PSA的水平与年龄相关，年龄越大，PSA水平越高临床意义： PSA是目前广泛应用于前列腺癌的肿瘤标志物。血清中的PSA由前列腺上皮和尿道球腺产生，是组织特异性抗原PSA联合直肠指诊可以对高危人群（家族史和年龄大于50岁）进行筛查PSA的水平与年龄和前列腺癌的分期呈正相关监测前列腺癌治疗的疗效和肿瘤的复发,游离的前列腺特异性抗原-fPSA,血清中游离的PSA单独检测fPSA对于诊断前列腺癌意义较小当PSA小于10ng/ml时，fPSA/PSA可以增加前列腺癌的诊断的特异度前列腺癌的fPSA/PSA比值低于正常人和前列腺增生的患者,CA72-4胃癌首选肿瘤标志物,发现于1981年，高分子量的粘蛋白参考值：<2.5U/ml临床意义：诊断胃癌的灵敏度为28-80%（特异性95%），CA72-4升高程度与胃癌的分期有关，手术完全切除可迅速下降至正常值，复发的病例CA72-4的升高先于临床诊断，还可用于胃癌的预后评估对粘液性卵巢癌诊断灵敏度高于CA125，可动态监测卵巢癌的治疗效果结/直肠癌、胰腺癌、肝癌、肺癌、乳腺癌、卵巢癌也有一定的阳性率,暂未开展,NSE(神经元特异性烯醇化酶)小细胞肺癌标志物Cyfra 21-1(细胞角蛋白19 片段)非小细胞肺癌标志物,肺癌 世界卫生组织（WHO）对肺癌的分型为四种：鳞状细胞癌、腺癌、大细胞及小细胞肺癌。也有简单的分型为小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)和非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)。,在各类肺癌中，小细胞癌的预后最差。 一般起源于较大支气管，大多为中央型肺癌。小细胞癌分化程度低，生长快 ，恶性程度较高，预后凶险。小细胞肺癌患者自诊断起的中位生存期不足三个月，二年生存率小于1%。,NSE（神经元特异性烯醇化酶）小细胞肺癌首选肿瘤标志物,分子量为80KD的蛋白酶，主要来源于神经细胞核神经内分泌细胞，以及这些细胞引发的肿瘤细胞中NSE是检测小细胞肺癌的首选的肿瘤标志物NSE是神经内分泌肿瘤和精原细胞瘤的肿瘤标志物临床意义：小细胞肺癌的鉴别诊断、监测疗效和肿瘤的复发神经母细胞瘤的鉴别诊断、监测病情变化、疗效、复发等，NSE对儿童型神经母细胞瘤阳性率为90神经内分泌肿瘤 NSE升高，如黑色素瘤、嗜铬细胞瘤、甲状腺髓样癌、胰岛细胞瘤等精原细胞瘤的诊断，与疾病的临床分期相关,暂未开展,CYFRA21-1（细胞角蛋白片段19）非小细胞肺癌首选肿瘤标志物,血清CYFRA21-1是指细胞角蛋白片段19，角蛋白是构成细胞骨架的一种中间丝状物（上皮细胞的支架蛋白），分子量为30KD良好的组织特异性，是非小细胞肺癌（NSCLC）首选肿瘤标志物临床意义：非小细胞肺癌的诊断和鉴别诊断，与肿瘤的病理组织分型和TNM分期相关对手术、化疗和放疗的治疗的效果进行监测对非小细胞肺癌预后进行评估，初始血清高水平显示 预后不良检测横纹肌浸润性膀胱癌的病程，诊断和随访。,暂未开展,S100黑色素瘤首选肿瘤标志物 / 脑损伤的标志物,S100蛋白分子量为10.5KD的钙结合蛋白S100A1和S100B是最先发现的成员。由中枢神经系统细胞表达，特别是星形胶质细胞、黑色素瘤细胞和其他一些组织也有表达临床意义：恶性黑色素瘤患者，特别是II、III和IV期的患者，血清S100浓度的升高提示疾病的进展，连续检测有助于疗效的评估多种类型的大脑损伤，脑脊液中S100的浓度会升高，并能 释放到血中，多种疾病导致的脑损伤，如脑外伤、中风和 脑肿瘤的患者血清中能检测出S100,暂未开展,肺癌的实验室诊断,肺癌常用的肿瘤标志物：CYFRA21-1、NSE、CEA、CA125,胃癌的实验室诊断,胃癌是我国消化道肿瘤发病率最高的肿瘤早期胃癌多无症状或仅有轻微症状，当临床症状明显时，病变已属晚期胃癌临床常用的标志物 CA72-4、 CEA 、CA19-9,卵巢癌的实验室诊断,卵巢癌是女性生殖系统肿瘤仅次于宫颈癌、宫体癌的第三位妇科肿瘤，居女性恶性肿瘤的第六位，死亡率居妇科恶性肿瘤的第一位。由于卵巢癌发病率逐年增高以及早、晚期预后差异显著，在临床上缺乏特异性的早期诊断方法，5年生存率仅15%-20%.临床常用的肿瘤标志物： CA125、HE4、CEA、 其他：HCG、AFP、CA72-4,肿瘤标志物常用检测套餐,男性：AFP，CEA，PSA，fPSA，CA724，CA199，Cyfra211，NSE，CA724，CA125，女性：AFP，CEA，CA125，HE4，CA153，CA724，CA199， Cyfra211，NSE肺癌：CYFRA21-1、NSE、CEA、CA125胃癌： CA72-4、 CEA 、CA19-9卵巢癌： CA125、CEA、HE4,肿瘤标志物（TM）的合理应用及注意事项,动态记录：建立自身对照： （1） CEA快速增高4ng/mL/6月，表示骨和肝转移。 （2）CEA缓慢增加24ng/mL/6月，表示脑、软组织和皮肤转移。 （3）TM上升，应在1430天重复测定。,了解生物半衰期，选择合理检测时间 例如：CEA T1/2=3天， 若术前CEA 100 ng/mL的患者， 要降至参考范围（3.0 ng/mL ）则需20天左右； 若术前CEA 20 ng/mL的患者， 要降至参考范围（3.0 ng/mL ）则需10天左右，,肿瘤标志物（TM）的合理应用及注意事项,常用肿瘤标志物的生物特性和临床应用,肿瘤标志物的检查频率,合理的肿瘤检测频率： 首次治疗前（手术、放疗、化疗和激素治疗） 各种治疗后：术后2-10天，根据相应的肿瘤标志物的半衰期而定 首次治疗1-2年3个月检查一次，首次治疗后3-5年每6个月检查一次 怀疑有复发或者转移时 肿瘤重新分期和肿瘤标志物明显升高，2-4周内应跟踪检查,肿瘤标志物的临床应用原则中国指南,定期随访原则:治疗后6 周做首次测定3 年内每3 月测定一次35 年每半年一次57 年每年一次随访中如发现有明显升高1 月后复测一次，连续2 次升高，可预示复发或转移常早于临床症状和体征的出现；对于临床及时处理有极大帮助联合检测原则: 同一种肿瘤可有一种或几种肿瘤标志物异常合理选择几项灵敏度、特异性能互补的肿瘤标志物构成最佳组合，进行联合检测比如肺癌,肿瘤标志物应用注意事项：PSA禁止应用于女性常规检查CA153仅在男性已确定为乳腺癌时使用前列腺活检，导尿，膀胱镜等创伤性插管都能使血清PSA水平明显升高。女性经期检测CA125会升高23倍妊娠或异位妊娠会使CA125轻度升高，良性腹水CA125明显升高同一肿瘤可以含有多种肿瘤标志物，不同肿瘤也可能有共同的标志物。,应用注意事项：,化疗可能会使TM一过性升高肾衰可引起CEA和某些TM异常升高胆汁淤积可引起CA199显著升高同一TM在不同的检测系统上检测结果会有差别，甚至相差23倍。同一的检测系统上TM检测结果升高或降低达±25时才认为有临床意义。,肿瘤标志物检测可能的影响因素,罗氏肿瘤标志物临床联合应用,首选指标 辅助指标,罗氏肿瘤标志物的临床指征：一级标志物，二级标志物和三级标志物,一级标志物-对决策有重要的指导意义二级标志物-结合首选方案，能起到帮助三级标志物-结合其他诊断措施，能起到帮助Roche Elecsys 是目前 唯一能全自动检测CA724、Cyfra211、NSE、S100的系统,主要内容,罗氏公司及其产品简介罗氏电化学发光介绍-传染病系列介绍-肿瘤标志物系列介绍-其他项目简介,自身免疫检测,Anti-CCP 抗环瓜氨酸肽抗体,风湿病介绍,风湿病：是一种全身性疾病，主要累及结缔组织，大多数病人有关节、肌肉的病变，与机体的免疫学异常有关，属于自身免疫性疾病,骨关节炎,脊柱骨关节病,类风湿关节炎,风湿病,结缔组织病SLE,血管炎,感染性关节炎,代谢性骨病,关节外风湿病,晶体性关节病,Anti-CCP 介绍,1998年，Anti-CCP在类风湿关节炎患者的关节滑膜液里发现第一代的抗瓜氨酸肽抗体，采用ELISA法检测，特异性高大于90%，但是敏感性只有30-40%2002年，采用ELISA法检测（96孔板，手工）的第二代的Anti-CCP产品产生，在保持特异性的情况下，敏感度显著提高达60-80%Elecsys Anti-CCP是采用电化学发光法全自动环瓜氨酸肽第三代检测方法,特异性高达97%，敏感度67%（Cut-off值=17 U/mL)。,Anti-CCP抗环瓜氨酸肽抗体,类风湿关节炎(RA)是一种比较常见的自身免疫性疾病类风湿关节炎(RA)现行的诊断标准： - 临床表现 - X线检查 - 类风湿因子（RF）检测 缺点：符合此标准时病人常已出现骨关节破坏RF缺乏特异性，20-30%的患者RF阴性不利于早期诊断早期干预治疗,2009 ACR/EULAR 联合推荐类风湿关节炎的诊断标准每个范畴取最高值，总分超过6分即可诊断为RA,受累关节 - 1个中到大的关节（0分）- 2-10中大关节（1分） - 1-3小关节（2分） - 4-10小关节（3分） -超过10个小关节（5分）滑膜炎持续时间 -少于6周（0分） - 6周或更长的时间（1分）急性期反应物 - C -反应蛋白和红细胞沉降率均正常（0分）C反应蛋白或ESR异常（1分）血清学 -类风湿因子和抗瓜氨酸合成蛋白抗体阴性（0分）-两个测试至少有之一是低滴度阳性。低滴度定义为超过正常上限，但不高于3倍正常值上限（2分）-至少有一个试验高滴度阳性，如滴度超过3倍正常上限（3分）,ACR(American College of Rheumatology)美国风湿病学院 European League Against Rheumatology（欧洲抗风湿病联盟）,Anti-CCP与RF 比较Anti-CCP特异性更高,1.KarayevD, Morris RI, Metzger AL, Rheumatology Diagnostics Laboratory, Los Angeles, CA2.Schulze-KoopsH et al.Dtsch. Med. Wochenschrift 2006 131 264-2713.Data Eurodiagnostica,Anti-CCP临床应用,对类风湿关节炎的诊断特异性更高结合RF诊断类风湿关节炎的灵敏度可达85% 特异性可达98%Anti-CCP有助于类风湿关节炎的早期诊断（3-6个月） Anti-CCP可以提示预后情况,糖尿病标志物Diabetes Marker,C-Peptid （C肽）Insulin,C肽（C-Peptide）,概述：胰岛素（Insulin）是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白质合成的激素。C肽（C-Peptide）是胰岛细胞的分泌产物，它与胰岛素有一个共同的前体胰岛素原一个分子的胰岛素原经酶切后，裂解成一个分子的胰岛素和一个分子的C肽C-肽浓度水平能更好地反映胰岛细胞功能；且不受外源性胰岛素干扰、不与胰岛素抗体反应，不受肝脏酶灭活，半衰期比胰岛素长 治疗用的胰岛素不含C肽，因此，C肽不受外源性胰岛素的影响，这是在研究胰岛B细胞功能方面比胰岛素优越之处，可以用于接受胰岛素治疗的病人。C肽释放试验在某种意义上可代替胰岛素释放试验。C肽释放试验用于正接受胰岛素治疗的患者。,性激素Fertility Marker / Hormones,ACTH（促肾上腺皮质激素）CortisolDHEA-S（硫酸脱氢表雄甾酮）EstradiolFSHLHProlactinProgesteroneSHBG（性激素结合蛋白）TestosteronehCG+ß (primary tumour marker for chorion)hCG STAT*hGH（人生长激素）,泌乳素（PRL）检测的影响因素,鉴别高泌乳素血症主要需检测小分子有生物活性的PRL，而巨PRL会干扰到其检测。巨泌乳素分子可引起高PRL已被确认相当长的时间了， 它是造成高泌乳素血症的常见原因，美国和英国的临床实验室，接近10%的高PRL样本是由巨泌乳素引起的。有25%的样本会因巨泌乳素导致PRL假性升高。聚乙二醇(PEG)沉淀法样品预处理联合电化学发光法作为巨泌乳素血症的筛检试验，在英国已作为常规的检测，但国内实验室开展较少。,生理性PRL升高：如运动，进食，精神创伤，刺激，紧张等引起的PRL暂时性升高 药物影响： 口服避孕药、雌激素治疗、抗多巴胺药物、抗精神抑郁药和胃病药物，均有可能使PRL分泌过多。,ATCH的分泌会影响到肾上腺皮质分泌的糖皮质激素（皮质醇）的分泌。同时皮质醇的分泌也会反过来调节下丘脑和腺垂体的功能，而负反馈的调节ACTH的分泌。临床上可以通过检测皮质醇与ATCH的变化，并将两者结合起来进行相关疾病的鉴别诊断。,Cortisol与ATCH的联合检测,概述：,· SHBG的生理作用。运输性激素的重要载体。肝脏通过调节SHBG的产生来影响性激素的活性。同样,吸收入血的性激素水平也影响SHBG的浓度。SHBG的水平被认为是受雌二醇/睾酮（E2/T)的比值调控。E2/T上升时SHBG的水平也上升E2/T下降时SHBG的水平也随之下降,SHBG(性激素结合球蛋白),血液中睾酮60%与SHBG结合，38%与白蛋白（ALB）结合，2%为游离状态，结合的无生物活性。具有代谢活性的睾酮仅为2%，其余的与蛋白质结合而运转；,性激素结合球蛋白又称睾酮-雌二醇结合球蛋白,由肝脏合成并释放入血,分子量95KD,由两个亚基组成。,SHBG的应用,性激素结合球蛋白(SHBG )临床应用,女性多毛症及男性化：SHBG水平可较正常水平下降50，游离睾酮增加90。 男性性腺功能减退：有部分病人，血浆总睾酮水平正常，而性激素结合蛋白水平升高。这些病人检测SHBG很有意义。针对上述病人推荐进行SHBG、 ALB（白蛋白）、总睾酮(TT)、雌二醇（E2）的联合检测。,甲状腺功能：甲亢病人SHBG水平上升；甲减病人SHBG下降。,肝硬化、慢性肝炎、脂肪肝患者;SHBG水平可升高。这种升高是由于 E2在肝脏的代谢减少导致E2/T的平衡改变，引起SHBG升高。,SHBG的应用,性激素结合球蛋白(SHBG )临床应用,高胰岛素血症的特异性标志：SHBG可以作为高胰岛素血症的特异性标志，。 胰岛素水平升高可抑制肝脏SHBG 的合成，致血SHBG水平降低，继而使性激素水平发生紊乱，造成糖、脂肪代谢障碍，反之则又进一步降低了胰岛素敏感性，所以SHBG紊乱暗示代谢状态紊乱。糖尿病的发病和胰岛素抵抗的预测指标肥胖男性2型糖尿病患者，SHBG水平的降低与肥胖、胰岛素浓度增高以及与胰岛素抵抗具有密切关系。,有必要同时检测: SHBG、 ALB、总睾酮(TT)、雌二醇（E2）、胰岛素（INS）、C肽,SHBG的临床意义,性激素结合球蛋白(SHBG )临床应用,1. SHBG测定有助于性激素变化的研究。2. SHBG增高见于:男性性腺功能减退、甲亢、服用含E2的避孕药、肝脏疾病。 3. SHBG降低见于:女性多毛症及男性化、多囊卵巢综合症、肥胖、甲状腺机能减退症。,游离睾酮指数的计算和临床应用,计算游离雄激素指数（Free Androgen Index）比总睾酮值能更准确的反映体内的雄激素活性。,