川崎病患儿血浆中抗β2糖蛋白1抗体水平及其临床意义

川崎病患儿血浆中抗2糖蛋白1抗体水平及其临床意义北京医学2007年第29卷第1O期川崎病患儿血浆中抗132糖蛋白1抗体水平及其临床意义刘桂英张晓虹Z杜军保3谭岩Z李杏坤论着I摘要】目的探讨川崎病KD患儿血浆中抗B糖蛋白113GP1抗体水平及其临床意义方法采用ELISA法检测20例KD患儿血浆中抗132GP1抗体水平,并与正常儿童组对照结果20例KD患儿临床诊断时间平均98D,冠状动脉扩张CAD发生率6012/20,冠状动脉瘤CAA发生率255/20抗BGP1抗体阳性15例,阳性率为7515/20,抗PGP1抗体水平用A值表示为09090310,正常对照组A值为03510154,两者比较有显着性差异6566,P000112例CAD患儿A492为1119_01,8例无CAD患儿A492为0593_024二者比较有显着性差异T2404,P005结论KD患儿血浆中存在高水平的抗BGP1抗体,并发冠脉损伤的KD患儿抗132GP1抗体水平明显高于未并发冠脉损伤的患儿提示抗132GP1抗体是KD冠状动脉损伤的一种重要危险因子【关键词】川崎病抗B糖蛋白1抗体冠状动脉损伤THELEVELANDCLINICALVALUEOFANTIBETA2GLYCOPROTEINIANTIBODIESINTHEPLASMAOFCHILDREN,VITHKAWASAKIDISEASESLIUGUIYING,ZHANGXIAOHONG,DUJUNBAO,ETALPEDIATRICSDEPARTMENT,BEIJINGANZHENHOSPITAL,BEIJING100029【ABSTRACT】OBJECTIVETOEXPLORETHELEVELANDCLINICALVALUEOFANTIBETA2GLYCOPROTEIN1ANTIBODIES132GP1INTHEPLASMAOFCHILDRENWITHKAWASAKIDISEASESKDMETHODSENZYMELINKEDIMMUNOSORBENTASSAYFELISA1FORANANTIB2GP1ANTIBODIESWASESTABLISHEDTOANALYZETHEPLASMAOF20KDCHILDREN,ASWELLAS16HEALTHCHILDRENRESULTSCORONARYARTERYDILATATIONCADANDCORONARYARTERYANEURYSMSCAAWEREREPORTEDIN12/20PATIENTSAND5/20PATIENTSTHEPOSITIVERATEOFANTI一132GP1ANTIBODIESINTHEKDGROUPWAS7515/20THEREWASSIGNIFICANTDIFFERENCEINTHELEVELOFANTIB2GP1ANTIBODIESBETWEENPATIENTSWITHKD0909_0310ANDHEATHYCHILDREN4920351±0154,P0001,T6566THEANTI132GP1ANTIBODIESWASSIGNIFICANDYHIGHERINPATIENTSWITHCAD4921119_01,N12THANINTHOSEWITHOUT4920593_024,N8,P005,T2404CONCLUSIONSTHELEVELOFANTIP2GP1ANTIBODIESISSLSVATEDINKDGROUP,ANDISSIGNIFICANTLYHIGHERINCHILDRENWITHCORONARYARTERYLESIONSCALCOMPARINGWITHTHECHILDRENWITHOUTCALTHERESULTSSUGGESTTHATANTI一132GP1ANTIBODIESARESTRONGLYASSOCIATEDWITHKD,ANDISANIMPORTANTRISKINDICATOROFKDDEVELOPINGCAL【KEYWORDS】KAWASAKIDISEASEANTIBETA2一GLYCOPROTEIN1ANTIBODIESCORONARYARTERYLESIONS心血管系统损害是川崎病FKAWASAKIDISEASEKD主要并发症最严重的危害是发生冠状动脉损伤,尤其是冠状动脉瘤CORONARYARTERYANEURYSMS,CAA形成是KD患儿致死的主要原因但KD的病因和发病机制仍不清楚各国学者在对KD发病机制研究方面主要致力于探讨FL,血管损害机制尤其是对心血管损害的危险因素的研究_2现在认为系统性免疫激活,细胞因子增多和自身抗体生成增多是KD的特点415我们对2002年10月至2005年12月收治的20例KD患儿检测抗P2糖蛋白1抗体2GP1并探讨其临床意义,报告如下本课题为北京市科委科技计划资助项目F编号Z00051900436111首都医科大学附属北京安贞医院儿科邮编1000292吉林大学白求恩医学部第一医院3北京大学第一医院儿科北京医学2007年第29卷第10期对象与方法果比较采用T检验一,一般资料1本组试验组20例,男L2例,女8例,男JZ为151,年龄9个月11岁,平均32岁均符合国际上公认的日本川崎病研究会诊断标准1984正常对照组L6例,男LO例,女6例,男女为1671,年龄19岁平均3O岁均为同期体检中心健康儿童均除外心脏病和慢性病史二,方法1样本采集试验组KD患儿均未用激素,阿司匹林和或静脉注射丙种球蛋白IVIG治疗抽取2N1L静脉血,加入枸橼酸钠19抗凝试管中,3000R/MIN离心10MIN,取上清,一2O冻存,备用同种方法处理对照组正常儿童血样2ELISA法检测患儿血清中抗BGP1抗体6样品均设3复孑L对照包括空白对照无BGP1的CBS包被,无二抗对照,阴性对照正常血清孑L和阳性对照加兔抗人13ZGP1抗血清用含10IG/MLBGP1吉林大学第一医院中心实验室制备碳酸盐包被缓冲液CBS包被抗原,包被96孑L酶标板北京中山生物技术公司,100L/孑L,4过夜,弃去包被液,O01MO/LPH74磷酸吐温缓冲液PBS,含005TWEEN一20洗3次,每次3MIN,甩干2牛血清白蛋白BSA,SIGMA封闭,100FIIL,37封闭IH,PBS洗涤3次,每次3MIN,甩干,加入待测血清1100稀释稀释缓冲液含2BSA的O01MOL/LPH7_4磷酸吐温缓冲液,2BSAPBS,100L/孑L,37孵育2H其中阴性对照加正常血清,阳性对照加一抗,即12000稀释兔抗人BGPI抗体吉林大学第一医院中心实验室制备,100L/孑LL,PBS洗3次,甩干,加入二抗,即辣根过氧化物酶标记羊抗人IGGHRP一羊抗人IGG,12000稀释,ANOGEN,加拿大,100L/孑L,37,2H,其中阳性对照3复孑L,加二抗为HRP一羊抗兔IGG12000稀释,北京中山生物技术公司,100L/孑L,PBS洗3次,甩干,加底物邻苯二胺一HO华美生物公司溶液,100L/孑L,室温避光2OMIN,加终止液2MHSO,500L/孑L,终止反应,酶标仪BIDRAD,MODEL,550,MICROPLATEREADER测492NM处光密度A值A492,A值2倍以上为阳性正常对照不足OO5,按OO5计算三,统计学方法应用SPSS115统计软件KD患儿与对照组结结果一,临床资料试验组KD患儿发热时间710D平均77D超声心动图检查冠状动脉扩张CAD12例60,其中8例为左,右冠状动脉均扩张405例CAA25临床诊断时间812D,平均98D左心室扩大伴二尖瓣反流3例1524H动态心电图2O例均有窦性心动过速1O例持续I度房室传导阻滞IAVB,4例ST段抬高,8例V波倒置,ST段下移所有患儿血沉均增快14例C一反应蛋白量增加,LO5364MG/L正常为O8MG/L,尤其冠状动脉病变患儿增加明显63264MG/L血小板变化范围为8O724X10L,抗“O“,类风湿因子正常,血培养阴性抗核抗体均阴性二,KD患儿血中抗BGP1抗体水平1试验组患儿抗BGP1抗体水平A税值为09090310,正常对照组A492值为0351±O154,两者比较有显着性差异T6566,P0001抗体阳性L5例,阳性率为752试验组中并发冠状动脉病变患儿与未并发冠状动脉病变患儿的比较试验组抗BGP1抗体L5例阳性,包括L2例CAD患儿CAD患儿A492为111901,无CAD患儿A492为0593±O24,二者比较有显着性差异T2404,P005讨论KD又称皮肤黏膜淋巴结综合征是多发于有亚洲血统儿童但所有人种均有发病的,尤其是5岁以下儿童的以急性全身血管炎为主要病变的急性发热出疹性疾病日本医师川崎富作在1967年首次报告近年来发病率逐渐上升并取代风湿热而成为儿童后天心脏病的主要原因本病发病季节以春夏为主发病高峰年龄4岁以内者占80病死率为O2519951999年北京KD流行病学调查显示5岁儿童其发病率逐年升高5岁以下儿童发病率从1995年的L82/LO万上升到1999年的278/10万平均发病率为229/10万,低于日本,与美国相似,高于其他西方国家而四川I,广东,陕西,江苏的平均发病率分别为706/10万,593/10万,234/L0万,253/10万,均低于北京然而,经过近40年的研究,对其病因,发病机制仍未明确诊断标准以临床表现为依据缺乏特异性,使早期诊断相对困难增加了患儿冠脉损伤的危险性4L未治的KD发生冠状动脉并发症为2530病死率为L2其中6以上死于心肌梗死21995年至1999年北京地区KD发生冠状动脉并发症为2157现在认为系统性免疫激活,细胞因子增多和自身抗体生成增多是KD的特点4L在KD血浆中存在的循环抗体如中性粒细胞胞浆抗体,抗内皮细胞抗体,抗心磷脂抗体等,它们对IL一1B,TNFC或一IFN刺激的血管内皮细胞具有细胞毒作用但对其特异性仍有争议5可能与血管损伤的发生过程有关132GP1是血浆中一种较丰富的糖蛋白在血浆中含量为每100ML血浆中含L020MG因其与血浆中脂类结合故又称其为载脂蛋白H,其蛋白部分为一条含326个氨基酸残基的多肽链但其病理生理作用还不完全清楚1990年美国3个独立的实验组在对存在于自身免疫疾病中的抗心磷脂抗体研究时发现132GP1是决定抗心磷脂抗体与心磷脂结合的辅助因子10随着132GP1这一辅助作用的发现人们开始研究血浆中BGP1与自身免疫病的关系,如在具有血栓形成和习惯性流产的患者血清中可以检测到高滴度的抗B2GP1抗体及132GP1特异性的T淋巴细胞在冠状动脉损伤,心肌梗死的患者体内发现了具有病理作用的抗132GP1抗体等说明132GP1是一些自身免疫疾病中重要的自身抗原在内皮细胞免疫激活,血管炎和血栓形成过程起致关重要的作用尤其是抗132GP1抗体的出现,血小板的激活增加了血栓形成的危险性1】对KD患儿长期随访研究发现无论在急性期是否存在可测到的冠状动脉损害其急性期的血管炎都会造成心脏表面冠状动脉的持续性内皮细胞功能不良患儿成年后更易发生冠心病5因此许多学者在不断探讨KD病因和发病机制尤其是探索心血管损害机制及冠状动脉损害的危险因素以期控制血管炎症,防止或减轻CAD减少日后发生冠状动脉狭窄和梗死的概率,降低急性期猝死率尤其是对青年人可降低发生冠状动脉硬化,心肌梗死的概率我们采用ELISA方法测定了KD患儿血浆中的抗132GP1抗体水平结果发现,KD患儿抗132GP1北京医学2007年第29卷第1O期抗体水平均明显升高20例KD患儿中L5例抗BGP1抗体阳性,阳性率为75更为重要的是,并发冠状动脉损伤的KD患儿抗B2GP1抗体水平明显高于未并发冠状动脉损伤的患儿这些结果提示抗BGP1抗体与KD具有一定的相关性,是冠状动脉损伤病理过程中的重要危险因子之一但是由于本组入选病例严格要求未用任何药物全部符合诊断标准样本数量少其特异性尚有待于进一步研究参考文献1KATOHCARDIOVASCULARCOMPLICATIONSINKAWASAKIDISEASECOFONARYARTERYLUMENANDLONGTERMCONSEQUENCESPROGPEDIAIRCARDIOL,2004,191371452MCCRINDLEBWCARDIOVASCULARCOMPLICATIONSCORONARYARTERYSTRUCTUREANDFUNCTIONMINERVAPEDIAIR,PROGPEDIAIRCARDIOL,2004,191471523DUONG1TR,SILVERMANED,BISSESSARMV,ETA1SUPERANTIGENICACTIVITYISRESPONSIBLEFORINDUCTIONOFCORONARYARTERITISINMICEANANIMALMODELOFKAWASAKIDISEASEINTIMMUNOL20031579894NEWBURGERJW,TAKAHASHIM,GERBERMA,ETA1DIAGNOSIS,TREATMENT,ANDLONGTERMMANAGEMENTOFKAWASAKIDISEASEASTATEMENTFORHEALTHPROFESSIONALSFROMTHECOMMITTEEONRHEUMATICFEVERENDOCARDITISANDKAWASAKIDISEASECOUNCILONCARDIOVASCULARDISEASEINTHEYOUNG,AMERICANHEARTASSOCIATIONCIRCULATION,2004110274727715NEWBURGERJW,FULTONDRKAWASAKIDISEASECURROPINPEDIATR,2004,165085146HANLYJG,SMITHSAANTIP2一GLYCOPROTEINGPIAUTOANTIBLDIES,ANNERINVBINDINGANDTHEAUTIPHOSPHOLIPIDSYMDROMECLINEXPIMMUNOL,2000,1205375437李晓辉,李晓静,李蕙,等19972001年四川省川崎病流行病学调查临床儿科杂志,2006,243063088KARASAWAKADVANCESINTHEIMAGINGOFVASCULARCOMPLICATIONANDTHEIRIMPACTPROGPEDIATRCARDIOL,2004,191531609SHULMANST,ROWLEYAHADVANCESINKAWASAKIDISEASEEURJPEDIATR,2004,16328529110HAMMELM,SCHWARZENR,GRIESA,ETA1MECHANISMOFTHEINTERACTIONOFBETA2GLYCOPROTEIN1WITHNEGATIVELYCHARGEDPHOSPHOLIPIDMEMBRANESBIOCHEMISTRY,2001,40141731418111LOIZOUS,SINGHS,WYPKEMAE,ETA1ANTICARDIOLIPIN,ANTIBETA2一GLYCOPROTEIN1ANDANTIPROTHROMBINANTIBODIESINBLACKSOUTHAFRICANPATIENTSWITHINFECTIOUSDISEASEANNRHEUULDIS,2003,621】O6一L1】1收稿20070328