蛋白质的分离纯化

蛋白质的分离纯化Tag内容描述：<p>1、Protein Engineering南华大学生化与分子生物学教研室办公室第3教学楼315室版权声明本课件版权所有未经允许不得转载。Protein Engineering曹运长博士、副教授南华大学生化与分子生物学教研室Emailcaoychang163.comTel: 15886467200SeparationPurification and Identification of Proteins进行蛋白修饰时需要单一蛋白质为原料需要单一蛋白质来研究其结构与功能需要大量纯化经过改造的蛋白质作为产品开发。为什么要分离、纯化与鉴定蛋白质蛋白质分离、纯化与鉴定的理论基础分子大小带电性质变性与复性溶解特性结晶特性分子表面特性分子形状紫。</p><p>2、2） 利用溶解度差别影响蛋白质溶解度的外部因素有：1、溶液的pH；2、离子强度；3、介电常数；4、温度。但在同一的特定外部条件下，不同蛋白质具有不同的溶解度。1、等电点沉淀：原理：蛋白质处于等电点时，其净电荷为零，由于相邻蛋白质分子之间没有静电斥力而趋于聚集沉淀。因此在其他条件相同时，他的溶解度达到最低点。在等电点之上或者之下时，蛋白质分子携带同种符号的净电荷而互相排斥，阻止了单个分子聚集成沉淀，因此溶解度较大。不同蛋白质具有不同的等电点，利用蛋白质在等电点时的溶解度最低的原理，可以把蛋白质混合物分开。。</p><p>3、第一章 蛋白质的分离与纯化,蛋白质分离纯化的一般原则（掌握） 分配层析的基本理论（重点掌握） 蛋白质的层析分离技术 离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等 主要掌握操作要点及操作过程的注意事项 蛋白质的电泳分离技术 不连续系统原理（重点掌握） SDS-PAGE技术（重点掌握）、IEF（一般了解） 蛋白质的浓缩（了解）,第一节 蛋白质分离纯化的一般原则,根据实验目的选择合适的材料，应遵循：,目的蛋白含量及生物活性尽可能高,材料来源方便、成本低、易操作,可溶性及稳定性要尽可能好,材料的选择,注意：不同的生物体、不同生理状态、不。</p><p>4、蛋白质的分离纯化,（一）材料 1、选材 2、破碎 3、混合物的分离 （二）粗分级 （三）细分级 （四）结晶,蛋白质的分离方法,根据蛋白质的溶解度差异分离 沉淀技术 根据蛋白质分子大小的差异分离 根据蛋白质的荷电差异分离 根据蛋白质与某些物质的吸附差异吸附分离 利用生物分子专一性结合的特性亲和层析,蛋白质的分离方法,可逆沉淀： 等电点沉淀、盐析法、有机溶剂沉淀 不可逆沉淀： 热变性沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀,透析只用于除盐类和小分子杂质,透析只用于除盐类和小分子杂质,超过滤除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质,加压,蛋白质溶。</p><p>5、蛋白质的理化性质及分离纯化,第一节 蛋白质的理化性质,第二节 蛋白质的分离纯化,第三节 蛋白质的分子量测定,第四节 蛋白质的含量测定与纯度鉴定,第一节 蛋白质的理化性质,一、蛋白质的酸碱性质,二、蛋白质的紫外吸收性质,四、蛋白质的变性和复性,五、蛋白质的呈色反应,三、蛋白质的胶体性质和沉淀,一、蛋白质的酸碱性质,在某pH时蛋白质所带正电荷与负电荷恰好相等，即蛋白质的净电荷为零时的pH称等电点（pI）。,没有其他盐类干扰时, 蛋白质质子供体基团解离出来的质子数与质子受体基团结合的质子数相等时的pH称为等离子点。,蛋白质等电点。</p><p>6、第六章 蛋白质的分离纯化和表征,重点： 一、蛋白质的胶体性质与蛋白质的沉淀 二、蛋白质的分离纯化方法 三、蛋白质的含量测定与纯度鉴定 难点： 蛋白质分子量的测定,第一节：蛋白质的酸碱性质 1两性解离 蛋白质分子中有很多酸性解离基团和碱性解离基团，是具有两性解离性质的化合物。 各种解离基团的解离度与溶液的pH有关，pH越低，碱性解离度越大，蛋白质分子带正电荷越多，负电荷越少；pH升高，则解离情况相反。,2等电点 调节溶液的pH可以改变蛋白质分子的带电状况。在特定pH条件下，某种蛋白质分子所带正负电荷相等，静电荷为零，这一p。</p><p>7、蛋白质的理化性质及分离纯化,第一节蛋白质的理化性质,第二节蛋白质的分离纯化,第三节蛋白质的分子量测定,第四节蛋白质的含量测定与纯度鉴定,第一节蛋白质的理化性质,一、蛋白质的酸碱性质,二、蛋白质的紫外吸收性质,四、蛋白质的变性和复性,五、蛋白质的呈色反应,三、蛋白质的胶体性质和沉淀,一、蛋白质的酸碱性质,在某pH时蛋白质所带正电荷与负电荷恰好相等，即蛋白质的净电荷为零时的pH称等电点（pI）。,没。</p><p>8、第五节蛋白质的分离 纯化和表征 一 蛋白质的理化性质 一 蛋白质的两性解离与等电点 由于蛋白质分子中氨基酸残基的侧链上及末端存在游离的氨基和游离的羧基 因此蛋白质与氨基酸一样具有两性解离的性质 因而也具有特定。</p><p>9、欢 迎 登 陆 生物化学教学网站,Chapter7 Protein的分离、纯化和表征,一、Protein的酸碱性质,（一）Protein的两性解离,提问：为什么蛋白质具有两性（酸、碱性）？,答：含有酸碱氨基酸残基 碱/酸 越大 pI ？ 越大,（二）Protein的等电点（PI） 1、定义：使蛋白质分子所带正电荷与负电荷相等，即净电荷为零时的溶液的pH值称为PI(isoelectric point。</p><p>10、Chapter7 Protein的分离、纯化和表征 一、Protein的酸碱性质 （一）Protein的 解离 1、主链上两个末端NH2和COOH的解离 2、侧链上基团的解离 电泳 （二）Protein的等电点（PI） 1、定义：使蛋白质分子所带正电荷与负电荷相等，即净电 荷为零时的溶液的pH值称为PI(isoelectric point). 2、当pH值 PI 时，蛋白质带负电荷当pH值。</p><p>11、蛋白质的分离纯化方法2.1根据分子大小不同进行分离纯化蛋白质是一种大分子物质,并且不同蛋白质的分子大小不同,因此可以利用一些较简单的方法使蛋白质和小分子物质分开,并使蛋白质混合物也得到分离。根据蛋白质分子大小不同进行分离的方法主要有透析、超滤、离心和凝胶过滤等。透析和超滤是分离蛋白质时常用的方法。透析是将待分离的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液进行分离。超滤是利用离心力或压力强行使水和其它小分子通过半透膜,而蛋白质被截留在半透膜上的过程。这两种方法都可以将蛋白质大分子与以无机盐为主的小分子分。</p>