分子生物学常用技术

分子生物学常用技术Tag内容描述：<p>1、目 录 第二十二章第二十二章 常用分子生物学技术 的原理及应用 The Popular Technology in Molecular Biology: Principle and Application 目 录 第 一 节 分子杂交与印迹技术 Molecular Hybridization & Blotting Technology 目 录 核酸分子杂交 (nucleic acid hybridization ) 在DNA复性过程中，如果把不同DNA单链 分子放在同一溶液中，或把DNA与RNA放在一 起，只要在DNA或RNA的单链分子之间有一定 的碱基配对关系，就可以在不同的分子之间形 成杂化双链(heteroduplex) 。 一、分子杂交与印迹技术的原理 目 录 复性 RNADNA 目 录 （一）。</p><p>2、分子生物学 常用技术及其应用 主要内容 n基 因 工 程 n重组DNA技术-基因工程 n核酸分子杂交技术 nPCR 技术 n基因诊断与基因治疗 第一节 基 因 工 程 n基因工程的基本概念 n工具酶 n载体 n重组DNA技术的基本原理 n重组DNA技术的基本过程 n基因工程在医学中的应用 一、基因工程的基本概念 nDNA重组：不同来源的DNA分子可以通 过末端共价连接而形成重新组合的DNA 分子的过程。 n基因工程：将基因进行克隆，并利用克 隆的基因表达、制备特定的蛋白或多肽 产物，或定向改造细胞乃至生物个体的 特性所用的方法及相关的工作。 二、工具酶 n限制性。</p><p>3、分子生物学常用技术,第一节 凝胶电泳,带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳（electrophoresis）。 电泳技术主要用于分离各种有机物（如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、脂类、核苷、核苷酸、核酸等）和无机盐，也可用于分析某种物质的纯度及分子量的测定等。 电泳技术在分子生物学领域应用非常广泛，特别是以琼脂糖和聚丙烯酰胺为支持介质的凝胶电泳，以操作简便、快速、灵敏、分离范围广等优点成为分离、纯化、分析和鉴定核酸的主要手段。,一、琼脂糖凝胶电泳,（一）原理 核酸分子是两性解离分子。在pH3.5时，碱基上的氨基基团解离，而三个。</p><p>4、PCR 技术,PCR(Polymerase Chain Reaction) Three steps: denaturation, primer annealing, polymerization.,The PCR cycle,95C step to denature the duplex DNA, An annealing step of around 55C to allow the primers to bind, 72C polymerization step. Mg2+,dNTPs are required in addition to template,primers,buffer and enzyme,历史 60s-70s：基因的体外分离技术。 Khorana（1971）：美国MIT教授、1968年诺贝 尔医学奖得主 “经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 核酸体外。</p><p>5、实验基本技术,分子生物学部分,存在问题,1. 基本的实验技能 2. 实验习惯 3. 责任感和安全性,态度决定一切!,核酸纯化技术 离心分离技术 凝胶电泳技术 核酸定量技术 分子杂交技术 序列分析技术 ,一 核酸纯化技术,原理,1. 核酸混合物成分: 结构类-细胞碎片，细胞器，其他 大分子-DNA，RNA，Protein，糖类，脂类等 小分子-氨基酸，小分子糖类和脂类，水，无机物等 2. 关键: DNA，RNAProtein 3. 方案： Protein变性 苯酚：强变性 25 氯仿：弱变性 24 异戊醇：消泡 1,4. 苯酚的处理：重蒸-饱和-pH 重蒸：去除醌类氧化物 饱和：防止核酸损耗 pH： 。</p><p>6、第六章,常用分子生物学技术的原理及应用 The popular technology in molecular biology: principle and application,第一节 分子生物学发展概述,分子生物学molecular biology是在分子水平上研究生物的结构、组织和功能的科学。 1950年，Astbury在一次学术报告中，首次提出并使用了分子生物学这一名词术语。 医学分子生物学是应用分子生物学技术和理论来阐明人体正常生理活动和病理过程及其调控的分子机理的一门科学。,概 述,一、分子生物学一些重要的理论知识,1.分子生物学发展史上一些重要的事件 （1）1865年，“遗传学之父”G.Mendel根。</p><p>7、质粒的提取(碱法),分子生物学基本技术（一）,三峡大学生物化学教研室,实验目的,了解碱法提取质粒的原理； 掌握碱法提取质粒的方法。,一实验背景,质粒是染色体外的DNA分子，大小可为1kb到200kb。 大多数来自细菌的质粒是双链、共价闭合环状的分子，以超螺旋形式存在。它是细菌内的共生型遗传因子。 其复制和遗传独立于细菌染色体，但复制和转录依赖于宿主编码的蛋白和酶。,质粒特点,质粒能在细菌中垂直遗传并且赋予宿主细胞一些表型，是比病毒更简单的原始生命。 质粒通过细菌的结合作用，从雄性体转移到雌性体， 是细菌有性繁殖的性因子. 。</p><p>8、第十四、二十一章 基因工程、分子生物学常用技术段里原理及其应用复习测试（一）名词解释1DNA重组 2基因工程 3限制性核酸内切酶 4基因组DNA文库 5cDNA文库 6聚合酶链反应（PCR） 7载体 8转化 9感染 10核酸分子杂交 11Southern印迹杂交 12Northern印迹杂交 13斑点印迹 14原位杂交 15DNA芯片 16基因诊断 17基因治疗（二）选择题A型题：1 限制性核酸内切酶作用特点不包括： A在对称序列处切开DNABDNA两链的切点常不在同一位点C酶切后产生的DNA片段多半具有粘性互补末端DDNA两链的切点常在同一位点E酶辨认的碱基一般为46个2限制性核酸内切酶：。</p><p>9、分子生物学常用技术,第一节 凝胶电泳,带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳（electrophoresis）。 电泳技术主要用于分离各种有机物（如氨基酸、多肽、蛋白质、酶、脂类、核苷、核苷酸、核酸等）和无机盐，也可用于分析某种物质的纯度及分子量的测定等。 电泳技术在分子生物学领域应用非常广泛，特别是以琼脂糖和聚丙烯酰胺为支持介质的凝胶电泳，以操作简便、快速、灵敏、分离范围广等优点成为分离、纯化、分析和鉴定核酸的主要手段。,一、琼脂糖凝胶电泳,（一）原理 核酸分子是两性解离分子。在pH3.5时，碱基上的氨基基团解离，而三个。</p><p>10、第5章 常用分子生物学技术的原理及其应用 习题 引自网络精品课程 一 选择题 一 A型题 1 分子杂交实验不能用于 A 单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B 双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C 单链 RNA 分子之间的杂交 D 单。</p><p>11、第19章：分子生物学常用技术4学时 分子杂交、PCR、基因测序 蛋白质研究技术(双向电泳，酵母双杂交) 基因转移与基因剔除(含RNA干扰) 第20章：基因工程4学时 第21章：基因诊断与基因治疗4学时,第四篇：分子生物学技术与应用,第十九章,分子生物学常用技术,分子生物学技术能帮助我们干什么？,揭示生物大分子(DNA、RNA、蛋白质)的结构与功能 DNA 水平：基因序列分析、拷贝数和。</p><p>12、分子生物学常用技术,最了解的： PCR，电泳，ELISA，DNA提取，质粒酶切，NB，SB，转化，薄层层析，接种，培养，PAGE，细胞培养，磷酸钙转染，脂质体转染，表达蛋白，RNA提取，CHIP，配溶液，感受态制备，重组子过程的试剂盒，微生物的筛选及鉴定，质粒提取，HPLC，定量PCR,最不了解的： 分子杂交，DNA重组质粒的连接，转化和筛选，DNA分子探针，分子克隆，引物设计，RT-PCR，色谱。</p><p>13、第5章 常用分子生物学技术的原理及其应用 习题 （引自网络精品课程） 一、选择题 （一）A型题 1 分子杂交实验不能用于 A 单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B 双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C 单链 RNA 分子之间的杂交 D 单链 DNA 分子之间的杂交 E 抗原与抗体分子之间的杂交 2 关于探针叙述错误的是 A 带有特殊标记 B 具有特定序列 C 必须是双链的核酸片段。</p>