原代细胞培养

原代细胞培养Tag内容描述：<p>1、原代细胞的培养与建系 凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为 原代细胞。细胞的纯化或细胞克隆技术是细胞培养工作的基础。 第一节原代细胞的取材 人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。 一、取材的基本要求 .1取材要注意新鲜和保鲜 .2应严格无菌 .3防止机械损伤 .4去除无用组织和避免干燥 .5应注意组织类型、分化程度、年龄等 .6作好记录 二、各类组织的取材技术 皮肤和粘膜的取材 内脏和实体瘤的取材 血液细胞的取材 骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材 动物组。</p><p>2、原代细胞培养操作（鼠胎组织细胞培养为例）原代细胞培养操作（鼠胎组织细胞培养为例） 取材取材：用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。把整个孕鼠浸入盛有：用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。把整个孕鼠浸入盛有 7575乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超 净台。用消过毒的剪刀在躯干中部环行剪开皮肤，剖腹取出净台。用消过毒的剪刀在躯干中部环行剪开皮肤，剖腹取出 子宫置于无菌平皿中。用消过毒的剪刀剪开子宫，取出鼠胎子宫置于无菌平皿中。用消过毒的剪刀剪开子宫，取出鼠胎 ，。</p><p>3、原代细胞的培养与建系 细胞的来源多样，培养方法也各不相同，凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。原代细胞经分散接种之手段称为传代。凡能经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。若能稳定生长传至1020代以上的细胞可确立为细胞系。若有条件能开展单细胞克隆、纯化，经大量扩增后所形成的生物学特性稳定的克隆化细胞群，称之为细胞株或克隆细胞。此过程称为细胞的纯化或细胞克隆。这些基本技术是从事细胞培养工作的基础，只有熟悉和掌握了基本技术,才可能更快捷地学习和掌握其。</p><p>4、原代细胞培养之细胞分离技术原代细胞的分离和制作 人或动物体内（或胚胎组织）由于多种细胞结合紧密，不利于各个细胞在体外培养中生长繁殖，即使采用1mm3的组织块，也只有少量处于周边的细胞可能生存和生长，若需获取大量细胞，必须将现有的组织块充分散开，使细胞解离出来，常采用的方法如下： 一、悬浮细胞的分离方法 组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，最简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟，若悬液量大，可适当延长离心时间，但速度不能太高，延时也不能太长，以避免挤压或机械损伤细胞，离心沉淀用无钙、镁PB。</p><p>5、第四章 原代细胞的培养和建系,凡是来源于胚胎、组织器官及外周血，经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。 凡是经传代方式进行再次培养的细胞称为传代细胞。 若能稳定生长传至10-20代以上的细胞可确立为细胞系。 单细胞经克隆、纯化并大量扩增所形成的特性稳定的细胞群体称为细胞株或克隆细胞。,第一节 原代细胞的取材,人和动物细胞的取材是原代细胞培养成功的首要条件，直接影响细胞的体外培养。,一、取材的基本要求 1取材要注意新鲜和保鲜 2应严格无菌 3防止机械损伤 4去除无用组织和避免干燥 5注意组织类型、分化程度。</p><p>6、细胞的原代培养 (Cell primary culture),实验 十一,背景资料,原代培养(primary culture)： 从生物体取材进行培养，中途不分割培养物、不更换培养物的生长器皿。 细胞的生长条件： 无菌 温度 pH 渗透压 氧气 营养及生长调节因子,背景资料,培养细胞的生长类型,贴附型,成纤维细胞型细胞,上皮型细胞,游走型细胞,多形型细胞,悬浮型,1、成纤维细胞型： 胞体呈梭型或不规则三角形，中央有卵圆形 核，胞质突起，生长时呈放射状。 除真正的成纤维细胞外，凡由中胚层间充质起 源的组织，如心肌、平滑肌、成骨细胞、血管 内皮等常呈本型状态。 培养中。</p><p>7、原代细胞的分离与培养原代细胞的分离与培养 1.1. 实验原理实验原理 原代培养是指由体内取出组织或细胞进行的首次培养， 也叫初代培养。 原代培养离体时 间短，遗传性状和体内细胞相似，适于做细胞形态、功能和分化等研究。较为严格地说是指 成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二 倍体数。但实际上，通常把第 1 代至第 10 代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。 体外将动物某组织， 经酶法或机械处理法分离成单细胞， 并在合适的培养基中筛选出特 定细胞，使得目的细胞得以生存、生长和繁殖。</p><p>8、器械的清洗,2011.10.11,为何要进行清洗？,离体培养的细胞对任何有害物质都十分敏感，这些物质包括微生物、细胞残余物以及非营养成分的化学物质。 除一次性用品外，玻璃、塑料、橡胶和金属质地等其他培养用品，无论新。</p><p>9、细胞生物学实验报告 原代细胞培养 1 实验目的 了解原理代细胞培养的基本方法 初步掌握无菌操作的方法 2 实验用品 1 仪器及器材 显微镜 载玻片 盖玻片 镊子 手术剪 解剖盘 胶头滴管 微量移液管 培养皿 离心机 注射器。</p>