海安凹陷富安油气区微生物异常分布研究

杨帆等海安凹陷富安油气区微生物异常分布研究一85一中涉及到的培养基的制备、分装均采用HUNGATE严格的厌氧操作技术。培养结束后用MPN计数方法计算出每个样品原始的含菌量。实验主要内容为土壤样品的稀释、接种以及甲烷氧化菌、丁烷氧化菌、烃氧化菌3种油气指示微生物的培养和计数。测试流程主要有以下几个步骤。231培养基的配置3种油气指示菌的培养基组分如下甲烷氧化菌培养基成分GLNANO为10，NH4C1为025，KH2PO4为026，K2HPO43H2O为074，MGSO47H2O为10，CAC122H2O为02，微量元素液10ML，PH7；微量元素溶液MGLFES047H2O为04，ZNSO47H2O为034，CUSO45H2O为01，MNSO4为03，NAMOO42H2O为024，HBO为01。丁烷氧化菌培养基成分GLMNSO7HO为10，CAC12为025，NH4C1为23，NH42SO4为1089，KNO4为201，NAH2PO4为22，微量元素液5ML，PH7。微量元素溶液MGLKHPO为45，FEC136H2O为30，MNC12为431，ZNC12为52，NIC1为20，NAC1为20，K2SO4为321，K1为30。烃氧化菌培养基成分LKNO为12，MGSO47H2O为025，KH2PO4为21，K2HPO43H2O为365，NAC1为20，微量元素液5ML，PH7；微量元素溶液MGLMNC1为23，NHC1为20，KNO3为12，ZNC12为42，H3BO3为15。培养基配置完成后，用纱布和牛皮纸对三角瓶进行包扎封口，置于高温高压蒸汽灭菌锅中121灭菌20MIN。232土壤样品梯度稀释接种土壤样品梯度稀释接种主要步骤如下以甲烷氧化菌为例首先取7个容积为100ML的三角瓶编号号至号，分别加入45ML无菌生理盐水；称取5G土壤样品置入号三角瓶中，震荡稀释后，号三角瓶中土壤样品稀释度为110；之后从号三角瓶中吸取5ML稀释液加入号三角瓶中，此时号三角瓶中土壤样品稀释度为1100；照此方法进行依次稀释，最终号至号三角瓶中土壤样品稀释度分别为110、110、110、110、110、110。、110。然后用5ML量程的移液枪吸取45ML甲烷氧化菌培养基，分别加入到21个7列，每列3个容积为10ML的无菌玻璃试管中；再用1ML量程的移液枪从号至号三角瓶中分别吸取05ML土壤样品稀释液，注入到所对应的无菌玻璃试管中号对应第1列，号对应第2列，号对应第7列，此时玻璃试管中的土壤稀释度为110、110、110、110、110。、110、110；最后用橡皮塞密封试管，用注射器充人1ML甲烷气体，目的是为甲烷氧化菌的生长提供碳源。若培养丁烷氧化菌则充入1ML的正丁烷气体；培养烃氧化菌充人12ML乙烷、丙烷、正丁烷体积比为111的混合气体。233恒温培养与结果统计样品稀释接种完成后置人恒温培养箱中培养。3种油气指示菌均为中温菌MESOPHILES，培养温度设置为30，培养周期为15D。培养结束后对结果进行观察和统计，其中有油气指示菌生长的培养管中培养基液面上方有菌膜产生，呈阳性，而没有油气指示菌生长的培养管中没有菌膜的生成，呈阴性。统计不同稀释梯度阳性试管的个数，根据MPN统计分配表可计算出每个土壤样品中油气指示菌的数量。3油气指示菌异常分布根据3种油气指示微生物的检测结果和油气微生物菌落数量的分布，结合研究区构造地质、油藏分布范围等特征，讨论油气微生物异常分布与地下油气藏及顶空轻烃之间的对比关系。油气指示微生物数量检测结果如图4、图5、图6所示，图中气泡颜色的深浅及大小与微生物数量成正比，多边形灰色区域为油藏的分布范围。31甲烷氧化菌甲烷氧化菌是一类高度专一地利用C化合物的细菌群体，是为识别石油与天然气聚集体而研究的第一类细菌，甲烷氧化菌对地下油气藏特别是天然气藏具有很好的指示性。由图4中甲烷氧化菌数量的分布情况可知A剖面上油气藏边界有2个异常高值点，其余异常值大多数分布在油气藏上方。在油气藏范围之外的剖面上，甲烷氧化菌数量较少，在剖面南部有个别高值点；B剖面上甲烷氧化菌高值区主要分布在油气藏上方，相对于A剖面分布较集中。在油藏范围之外剖面东西方向上，微生物数量呈低值。虽然甲烷氧化菌数量高值大多数分布在油气藏上方，但相对较离散，且其计数结果在同一个数量级上，因此甲烷氧化菌指标对下伏油气藏的指杨帆等海安凹陷富安油气区微生物异常分布研究87A】顶空气甲烷含量分布B顶空气C含量分布图7顶空气含量分布图FIG7DISTRIBUTIONOFHEADSPACEGASCONTENT顶空轻烃指标表明，在油藏上方地表土壤中确实存在烃类异常，而烃类异常直接引起了土壤中微生物的生长发育，最终在油藏上方形成了油气微生物高值异常分布。5认识与结论通过富安区块油气藏上方地表土壤中油气指示微生物数量的异常分布研究，可以得出以下认识和结论1地表土壤中特定微生物的生长发育与下伏油气藏有着密切的关系，通过MPN法能够检测到这类特定微生物，并可判断出其分布情况与油气藏的响应关系。2甲烷氧化菌、丁烷氧化菌和烃氧化菌在油藏上方地表土壤中异常发育，均对油气藏分布有良好的指示作用，在本区丁烷氧化菌是最理想的应用指标。3作为一种勘探方法，油气微生物技术具有其特定的应用条件和局限性，在应用时应结合地质、化探等手段综合分析，才能更好地发挥其作用。参考文献1DAVISJB，STUDIESOFSOILSAMPLESFROM“PARAFFINEDIRT”BEDJAAPGBULLETIN，1952，36218621882STRAWINSKIRJAMICROBIOLOGICALMETHODOFPROSPECTINGFOROILCJJWORLDOIL，1955111041153SOLIGIORGIOGGEOMICMBIOLOGICALPROSPECTINGJAAPGBULLETIN1954，38255525584SOLIGIORGIOGMICROORGANISMSANDGEOCHEMICALMETHODSOFOILPROSPECTINGJAAPGBULLETIN，1957，411341405STRAWINSKIRJ，COXWBMICROBESLOCATEGASPRODUCTIONINFIELDTESTJWORLDOIL，19597936HITZMANDOCOMPARISONOFGEOMICROBIOLOGICALPROSPECTINGMETHODSUSEDBYVARIOUSINVESTIGATORSJDEVELOPMENTSININDUSTRIALMICROBIOLOGY，1961233427张树政石油微生物学在中国的发展M北京科学出版社，19988阿特拉斯RM石油微生物M北京石油工业出版社，19919吴传芝微生物油气勘探技术及其应用J天然气地球科学，2005，1618287WUCHUANZHIMIEOBIALOILANDGASEXPLORATIONTECHNIQUEANDITSAPPLICATIONJNATURALGASGEOSCIENEE，2005，161828710袁志华，赵青，王石头，等大庆卫星油田微生物勘探技术研究J石油学报，2008，296827831YUANZHIHUA，ZHAOQING，WANGSHITOU，ETA1MICROBIALPROSPECTINGTECHNOLOGYFOROILANDGASINSATELLITEOILFIELDOFDAQINGAREAJACTAPETROLEISINICA，2008，29682783111梅海，林壬子，梅博文，等油气微生物检测技术理论、实践和应用前景J天然气地球科学，2008，196888892MEIHAI，LINRENZI，MEIBOWEN，ETA1MICROBIALOI1一GASDETECTIONTECHNOLOGIESTHEORY，PRACTIC