苎麻根中黄酮的提取与分离纯化研究

目 录摘 要 .1关键词 .11 前言 .21.1 苎 麻 概 述 .21.2 黄 酮 类 物 质 概 述 .21.2.1 黄酮类化合物的基本骨架 .21.2.2 黄酮类化合物的生物活性 .31.2.3 黄酮类物质提取方法 .41.2.4 黄酮类化合物的分离 .51.3 研 究 意 义 .72 材 料 与 方 法 .72.1 材 料 与 试 剂 .72.1.1 实 验 材 料 .72.1.2 试 剂 与 配 制 .72.1.3 仪器与设备 .72.2 实验方法 .82.2.1 前 期 处 理 .82.2.2 芦 丁 标 准 曲 线 的 制 作 .82.2.3 黄 酮 类 物 质 提 取 的 单 因 素 试 验 .82.2.4 黄 酮 类 物 质 提 取 的 正 交 试 验 .92.2.5 黄 酮 类 物 质 分 离 纯 化 .103 结果与分析 .103.1 芦 丁 标 准 曲 线 .103.2 提 取 黄 酮 类 物 质 的 单 因 素 试 验 .113.2.1 乙 醇 浓 度 对 黄 酮 提 取 率 的 影 响 .113.2.2 料 液 比 对 黄 酮 提 取 率 的 影 响 .123.2.3 回流提取温度对 黄 酮 提 取 率 的 影 响 .123.2.4 回流提取时间对 黄 酮 提 取 率 的 影 响 .133.2.5 pH 对黄酮提取率的影响 .133.3 正交试验法研究黄酮提取工艺的最优条件 .143.4 验证试验 .153.5 黄酮类物质的分离纯化工艺研究 .163.5.1 萃取 .163.5.2 树脂精制黄酮类物质 .163.6 苎麻根中黄酮化学物提取纯化工艺流程图 .194 分析与讨论 .204.1 黄酮含量测定 .204.2 单因素提取实验 .204.2.1 乙醇浓度对苎麻根黄酮提取率影响 .204.2.2 料液比对苎麻根黄酮提取率影响 .204.2.3 提取温度对苎麻根黄酮提取率影响 .204.2.4 提取时间对苎麻根黄酮提取率影响 .204.2.5 pH 对苎麻根黄酮提取率影响 .214.3 正交实验探究黄酮最佳提取工艺条件 .214.4 萃取 .214.5 聚酰胺树脂提纯黄酮 .214.6 操作相关问题 .225 结论 .22参考文献 .22致 谢 .231苎麻根中黄酮的提取与分离纯化研究学 生：曾 彪指导老师：彭国平(湖南农业大学生物科学技术学院，长沙 410128)摘 要：目的 研究苎麻根中黄酮类物质的提取分离纯化工艺。方法 单因素试验考察乙醇浓度、料液比、提取时间、温度、pH 对黄酮类物质提取的影响，正交试验法得出黄酮类物质的最优提取工艺，用乙酸乙酯萃取初步分离黄酮类物质，用聚酰胺树脂对黄酮类物质进行精制。结果 苎麻根中黄酮类物质的最佳提取工艺条件为：乙醇浓度为 70%乙醇，料液比为 1:7，提取时间为60 min，温度为 90 ，pH 为 7。提纯后的产品纯度为 87.3%。关键词：苎麻根；黄酮；正交实验法；提取；分离纯化Study on Extrction,Isolation and Purification of the Flavonids from Ramie RootStudent:ZengbiaoTutor:Guopin peng(College of Bioscience and Biotechnology, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China)Abstract: Objective Research Extrction,Isolation and Purification of the Flavonids from Ramie Root. Methods Single factor experiment investigated the influence of ethanol concentration, solid to liquid ratio, extraction time, temperature, pH on the extraction of flavonoids, the orthogonal experimental method to get the best conditions of flavonoids extraction technology, extract with ethyl acetate and isolate the flavonoids , flavonoids was refined by the polyamide resin. Results The best extraction conditions of flavonoids in roots of ramie were: ethanol concentration is 70%, solid to liquid ratio is 1:7, the extraction time is 60 min, the temperature is 90 , pH is 7. After purification, the purity of extraction is 87.3%.Keywords: Ramie Root; Flavonids; orthogonal experimental method; Extrction; Isolation and Purification.21 前言1.1 苎 麻 概 述苎麻(Boehnveria)为荨麻科苎麻属植物，原产于中国，种质资源十分丰富。目前，中国收集到的 2000 余份材料中约有 120 个种。苎麻作为我国历史悠久的天然纤维作物，种植面积和原料产量占世界的 95 以上，而且近几年苎麻由单一的纤维用途向新品种选育多用途、饲料专用苎麻新品种方向拓展，在国计民生中有着重要的地位。现代科学研究表明苎麻除作为重要的纤维作物外还具有及其重要的药用及保健价值。它的开发前景美好:首先，苎麻资源极其丰富且成本低廉 ;其次，苎麻具有多种药用成分，我国民间利用芒麻治疗疾病的历史悠久，明朝李时珍在著名的医学著作本草纲目中，对苎麻的部分药用功能作了详细的记载和阐述。现代医学研究表明：苎麻叶中含有绿原酸，绿原酸是选择性羟基自由基和过氧自由基的清除剂，对抗肿瘤、衰老、血液病、以及心、肝、肺、皮肤等各方面疑难疾病具有重大的意义。苎麻根含有黄酮类物质，它可以对血小板聚集及血栓的形成有很好的抑制作用，可以活化淤血、清理血管、促进血液循环。黄酮类物质被誉为“血管清道夫” 、 “微循环的保护神”。苎麻中的生物碱有抗肿瘤的作用，具有重大的研究价值。1.2 黄 酮 类 物 质 概 述黄 酮 类 化 合 物 广 泛 存 在 于 自 然 界 ， 是 一 类 重 要 的 天 然 有 机 化 合 物 。 其 不 同 的 颜色 为 天 然 色 素 家 族 添 加 了 更 多 的 色 彩 。 这 类 含 有 氧 杂 环 的 化 合 物 多 存 在 于 高 等 植 物及 羊 齿 类 植 物 中 。黄 酮 类 化 合 物 如 此 广 泛 分 布 于 植 物 界 中 ， 而 且 生 理 活 性 多 种 多 样 ， 引 起 了 国 内外 的 广 泛 重 视 ， 研 究 进 展 很 快 。 仅 截 至 到 1974 年 为 止 ， 国 内 外 已 发 表 的 黄 酮 类化 合 物 共 1674 个 (主 要 是 天 然 黄 酮 类 ， 也 有 少 部 分 为 合 成 品 ， 其 中 普 元 902 个 ，苷 722 个 )， 并 以 黄 酮 醇 类 最 为 常 见 ， 约 占 总 数 的 1/3， 其 次 为 黄 酮 类 ， 占 总 数 的1/4 以 上 ， 其 余 则 较 少 见 。 至 于 双 黄 酮 类 多 局 限 分 布 于 裸 子 植 物 ， 尤 其 松 柏 纲 、 银杏 纲 和 凤 尾 纲 等 植 物 中 。 截 止 到 1993 年 统 计 ， 黄 酮 类 化 合 物 总 数 已 超 过 4000 个 。1.2.1 黄酮类化合物的基本骨架黄 酮 类 化 合 物 原 主 要 指 基 本 母 核 为 2-苯 基 色 原 酮 类 化 合 物 ， 现 在 则 是 泛 指 两个 具 有 酚 轻 基 的 苯 环 (A-环 与 B-环 )通 过 中 央 三 碳 原 子 相 互 连 结 而 成 的 一 系 列 化 合物 1。31.2.2 黄酮类化合物的生物活性（ 1） 对 心 血 管 系 统 的 作 用 2芦 丁 、 橙 皮 昔 、 d-儿 茶 素 、 香 叶 木 苷 等 有 维 生 素 P 样 作 用 ， 能 降 低 血 管 脆 性及 异 常 的 通 透 性 ， 可 用 作 防 治 高 血 压 及 动 脉 硬 化 的 辅 助 治 疗 剂 。 不 少 治 疗 冠 心 病 有效 的 中 草 药 或 活 血 化 淤 类 中 药 中 均 含 有 黄 酮 类 化 合 物 。 芦 丁 、 檞 皮 素 、 葛 根 素 、 人工 合 成 的 立 可 定 等 均 有 明 显 的 扩 冠 作 用 ， 并 已 用 于 临 床 。 有 些 黄 酮 类 成 分 有 降 低 血脂 及 胆 固 醇 的 作 用 。从 桑 根 皮 中 分 得 的 morucenin A、 C 及 桑 酮 kuwanon G、 H 在 大 白 鼠 及 家 兔身 上 示 有 明 显 的 降 压 作 用 3。另 据 报 道 ， 檞 皮 素 等 黄 酮 类 化 合 物 对 由 ADP、 胶 原 或 凝 血 酶 引 起 的 血 小 板 聚集 及 血 栓 形 成 也 有 抑 制 作 用 4。 这 与 一 些 含 有 黄 酮 类 成 分 的 活 血 化 淤 类 中 草 药 的作 用 机 制 可 能 有 某 些 程 度 的 内 在 联 系（ 2） 抗 肝 脏 毒 性 作 用从 水 飞 蓟 种 子 中 等 到 的 水 飞 蓟 素 、 异 水 飞 蓟 素 及 次 水 飞 蓟 素 等 黄 酮 类 物 质 经动 物 试 验 及 临 床 实 践 均 证 明 有 很 强 的 保 肝 作 用 。 临 床 上 用 以 治 疗 急 、 慢 性 肝 炎 、 肝硬 化 及 多 种 中 毒 性 肝 损 伤 等 疾 病 均 取 得 了 较 好 的 效 果 。 另 外 (+)-儿 茶 素 近 来 在 欧洲 也 用 作 抗 肝 脏 毒 性 药 物 ， 对 脂 肪 肝 及 因 半 乳 糖 胺 引 起 的 中 毒 性 肝 损 伤 均 有 一 定 效果（ 3） 抗 炎 作 用黄 酮 类 化 合 物 ， 如 芦 丁 及 其 衍 生 物 羟 乙 基 芦 丁 、 二 氢 棚 皮 素 以 及 橙 皮 苷 -甲基 查 耳 酮 等 据 报 道 对 角 叉 菜 胶 ， 5-HT 及 PGE 诱 发 的 大 鼠 足 爪 水 肿 、 甲 醇 引 发 的关 节 炎 及 棉 球 肉 芽 肿 等 均 有 明 显 的 抑 制 作 用 。 金 荞 麦 中 的 双 聚 原 矢 菊 苷 元 有 抗 炎 、祛 痰 、 解 热 、 抑 制 血 小 板 聚 集 与 提 高 机 体 免 疫 功 能 的 作 用 ， 临 床 用 于 肺 脓 肿 及 其 他感 染 性 疾 病 。4据 报 道 ， 黄 酮 类 化 合 物 的 抗 炎 作 用 可 能 与 前 列 腺 素 生 物 合 成 过 程 中 的 脂 氧 合 酶受 到 抑 制 有 关 5。（ 4） 抗 菌 及 抗 病 毒 作 用木 犀 草 素 、 黄 岑 苷 、 黄 岑 素 等 均 有 一 定 程 度 的 抗 菌 作 用 。 近 来 还 有 檞 皮 素 、 桑色 素 、 二 氢 檞 皮 素 及 山 奈 酚 等 抗 病 毒 作 用 的 报 道 6。（ 5） 解 痉 作 用异 甘 草 素 及 大 豆 素 等 具 有 类 似 婴 粟 碱 解 除 平 滑 肌 痉 挛 样 的 作 用 。 大 豆 苷 、 葛 根黄 素 等 葛 根 黄 酮 类 成 分 可 以 缓 解 高 血 压 患 者 的 头 痛 等 症 状 。 此 外 ， 有 些 黄 酮 类 化 合物 具 有 止 咳 、 祛 痰 平 喘 作 用 ， 其 平 喘 作 用 与 分 子 中 的 。 -不 饱 和 酮 结 构 有 关 。 还据 报 道 ， 有 些 黄 酮 类 化 合 物 对 环 核 苷 磷 酸 二 酯 酶 具 有 一 定 程 度 的 选 择 性 抑 制 作 用 ，且 多 数 黄 酮 苷 元 的 抑 制 作 用 要 比 黄 酮 苷 强 7。 由 于 黄 酮 类 化 合 物 在 植 物 界 中 分 布很 广 ， 甚 至 在 人 类 日 常 生 活 中 用 到 的 粮 食 、 蔬 菜 以 及 水 果 中 也 有 相 当 大 的 含 量 。 因此 有 的 学 者 认 为 ， 黄 酮 类 化 合 物 与 仅 在 有 限 数 量 植 物 中 分 布 的 生 物 碱 类 不 同 ， 不 大可 能 期 望 它 们 具 有 显 著 的 生 理 活 性 。 但 近 期 分 子 生 物 学 的 研 究 结 果 显 示 某 些 黄 酮 类化 合 物 有 着 显 著 的 生 理 活 性 8。（ 6） 雌 性 激 素 样 作 用染 料 木 素 、 金 雀 花 异 黄 素 、 大 豆 素 等 异 黄 酮 类 均 有 雌 性 激 素 样 作 用 ， 这 可 能是 由 于 它 们 与 己 烯 雌 酚 的 结 构 相 似 的 缘 故 9。1.2.3 黄酮类物质提取方法（ 1） 有 机 溶 剂 提 取 法甲 醇 和 乙 醇 是 最 常 用 的 黄 酮 类 化 合 物 提 取 溶 剂 ,高 浓 度 的 醇 ( 如 90 %左 右 ) 适 宜 于 提 取 苷 元 , 60%左 右 浓 度 的 乙 醇 或 甲 醇 水 溶 液 适 宜 于 提 取 苷 类 。 欧 美 国 家 采用 的 主 要 溶 剂 法 工 艺 有 : 醇 (酮 )浸 提 -卤 代 烃 萃 取 -酮 /铵 盐 萃 取 法 、 酮 浸 提 - 氨 水沉 淀 -混 合 酮 萃 取 法 、 酮 浸 提 -卤 代 烃 萃 取 -铅 化 物 沉 淀 法 和 醇 (酮 )浸 提 -甲 苯 /丁 醇萃 取 树 脂 法 10。（ 2） 微 波 提 取 法微 波 加 热 是 透 入 内 部 的 能 量 被 物 料 吸 收 置 换 成 热 能 对 物 料 的 加 热 , 形 成 独 特的 物 料 受 热 方 式 , 具 有 均 匀 性 的 特 点 , 同 时 具 有 反 应 高 效 性 和 强 选 择 性 等 特 点 , 而 且 具 有 操 作 简 便 、 副 产 物 少 、 提 取 率 高 等 优 点 。 本 法 多 用 在 药 材 的 浸 出 , 在 黄酮 类 化 合 物 的 提 取 上 取 得 了 良 好 的 效 果 。 李 姣 娟 等 人 对 微 波 法 提 取 川 桂 叶 总 黄 酮 工艺 条 件 进 行 研 究 11, 以 65 %乙 醇 按 照 固 液 比 120, 在 85 条 件 下 提 取 9 min, 5连 续 提 取 2 次 , 总 黄 酮 得 率 为 22.36 mg/g。（ 3） 超 临 界 萃 取 法超 临 界 流 体 萃 取 是 利 用 超 临 界 流 体 在 临 界 压 力 和 临 界 温 度 附 近 具 有 的 特 殊 性 能作 为 溶 剂 进 行 萃 取 的 一 门 科 学 , 最 常 用 的 超 临 界 流 体 为 CO2。 应 用 CO2-SPE 技术 提 取 分 离 黄 酮 类 物 质 , 具 有 萃 取 速 度 快 , 效 率 高 , 操 作 简 单 等 特 点 , 产 品 中 没有 残 留 有 机 溶 剂 , 与 传 统 的 萃 取 分 离 工 艺 相 比 优 势 是 明 显 的 。 此 外 , 超 临 界 CO2 萃 取 较 易 与 其 它 先 进 技 术 联 用 , 成 为 新 型 而 有 效 的 分 离 分 析 技 术 。 余 希 成 通 过 单因 素 和 正 交 实 验 研 究 ,对 超 临 界 CO2 流 体 萃 取 海 金 沙 黄 酮 类 化 合 物 的 工 艺 进 行 了优 化 设 计 12。1.2.4 黄酮类化合物的分离一柱色谱法 13分 离 黄 酮 类 化 合 物 常 用 的 吸 附 剂 或 载 体 有 硅 胶 、 聚 酰 胺 及 纤 维 素 粉 等 。 此 外 ，也 有 用 氧 化 铝 、 氧 化 镁 及 硅 藻 土 等 。（ 1） 硅 胶 柱 色 谱硅 胶 是 一 种 常 用 的 极 性 吸 附 剂 ， 其 主 要 有 优 点 是 惰 性 、 吸 附 量 大 和 容 易 制 备 成各 种 类 型 的 硅 胶 。 硅 胶 的 结 构 是 无 定 形 的 ， 为 多 孔 性 物 质 ， 分 子 中 具 有 硅 氧 烷 的 交链 结 构 ， 同 时 在 颗 粒 表 面 又 有 很 多 硅 醇 基 。 硅 胶 是 一 种 酸 性 吸 附 剂 ， 适 用 于 中 性 或酸 性 成 分 的 层 析 。 同 时 硅 胶 又 是 一 种 弱 酸 性 阳 离 子 交 换 剂 ， 其 表 面 上 的 硅 醇 基 能 释放 弱 酸 性 的 氢 离 子 ， 当 遇 到 较 强 的 碱 性 化 合 物 ， 则 可 因 离 子 交 换 反 应 而 吸 附 碱 性 化合 物 。此 法 应 用 范 围 最 广 ， 主 要 适 用 于 分 离 异 黄 酮 、 二 氢 黄 酮 、 二 氢 黄 酮 醇 及 高 度 甲基 化 (或 乙 醚 化 )的 黄 酮 及 黄 酮 醇 类 。 少 数 情 况 下 ， 在 加 水 去 活 化 后 也 可 用 于 分 离 极性 较 大 的 化 合 物 ， 如 多 羟 基 黄 酮 醇 及 其 苷 类 等 。 供 试 硅 胶 中 混 存 的 微 量 金 属 离 子 ，应 预 先 用 浓 盐 酸 处 理 除 去 ， 以 免 干 扰 分 离 效 果 。（ 2） 聚 酰 胺 柱 色 谱聚 酰 胺 是 由 酰 胺 聚 合 而 成 的 高 分 子 物 质 ， 色 谱 常 用 的 是 聚 己 内 酰 胺 。 对 分 离 黄酮 类 化 合 物 来 说 ， 聚 酰 胺 是 较 为 理 想 的 吸 附 剂 。 其 吸 附 强 度 主 要 取 决 于 黄 酮 类 化 合物 分 子 中 羟 基 的 数 目 与 位 置 及 溶 剂 与 黄 酮 类 化 合 物 或 与 聚 酰 胺 之 间 形 成 氢 键 缔 合 能力 的 大 小 。 聚 酰 胺 色 谱 可 用 于 分 离 各 种 类 型 的 黄 酮 类 化 合 物 ， 包 括 苷 及 苷 元 、 查 耳酮 与 二 氢 黄 酮 等 。（ 3） 葡 聚 糖 凝 胶 (Sephadex gel)柱 色 谱对 于 黄 酮 类 化 合 物 的 分 离 ， 主 要 用 两 种 型 号 的 凝 胶 :Sephadex-G 型 及6Sephadex-LH20 型 。 用 葡 聚 糖 凝 胶 分 离 黄 酮 类 化 合 物 的 机 理 是 ： 分 离 游 离 黄 酮 时 ，主 要 靠 吸 附 。 凝 胶 对 黄 酮 类 化 合 物 的 吸 附 程 度 取 决 于 游 离 酚 羟 基 的 数 目 。 但 分 离 黄酮 苷 时 ， 则 分 子 筛 的 性 质 起 主 导 作 用 。 在 洗 脱 时 ， 黄 酮 苷 类 大 体 上 是 按 分 子 量 由 大到 小 的 顺 序 洗 出 柱 体 的 。（ 4） 活 性 炭 柱 色 谱活 性 炭 是 使 用 较 多 的 一 种 非 极 性 吸 附 剂 。 一 般 需 要 先 用 稀 盐 酸 洗 涤 ， 其 次 用 乙醇 洗 ， 再 以 水 洗 净 ， 于 80 干 燥 后 即 可 供 层 析 用 。 层 析 用 的 活 性 炭 ， 最 好 选 用 颗粒 活 性 炭 ， 若 为 活 性 炭 细 粉 ， 则 需 加 入 适 量 硅 藻 土 作 为 助 滤 剂 -并 装 柱 ， 以 免 流速 太 慢 。 活 性 炭 主 要 且 于 分 离 水 溶 性 成 分 ， 如 氨 基 酸 、 糖 类 及 某 些 甙 。 活 性 炭 的 吸附 作 用 ， 在 水 溶 液 中 最 强 ， 在 有 机 溶 剂 中 则 较 低 弱 。 故 水 的 洗 脱 能 力 最 弱 ， 而 有 机溶 剂 则 较 强 。 例 如 以 醇 -水 进 行 洗 脱 时 ， 则 随 乙 醇 浓 度 的 递 增 而 洗 脱 力 增 加 。 活 性炭 对 芳 香 族 化 合 物 的 吸 附 力 大 于 脂 肪 族 化 合 物 ， 对 大 分 子 化 合 物 的 吸 附 力 大 于 小 分子 化 合 物 。 利 用 这 些 吸 附 性 的 差 别 ， 可 将 水 溶 性 芳 香 族 物 质 与 脂 肪 族 物 质 分 开 ， 单糖 与 多 糖 分 开 ， 氨 基 酸 与 多 肽 分 开 。（ 5） 氧 化 铝 柱 色 谱用 稀 硝 酸 或 稀 盐 酸 处 理 中 性 或 碱 性 氧 化 铝 ， 不 仅 可 中 和 氧 化 铝 中 含 有 的 碱 性 杂质 ， 并 可 使 氧 化 铝 颗 粒 表 面 带 有 NO3+或 Cl-的 阴 离 子 ， 从 而 具 有 离 于 交 换 剂 的 性质 ， 适 合 于 酸 性 成 分 的 层 析 ， 这 种 氧 化 铝 称 为 酸 性 氧 化 铝 。 供 层 析 用 的 氧 化 铝 ， 用于 柱 层 析 的 ， 其 粒 度 要 求 在 100-160 目 之 间 。 粒 度 大 于 100 目 ， 分 离 效 果 差 ， 小于 160 目 ， 溶 液 流 速 太 慢 ， 易 使 谱 带 扩 散 。 样 品 与 氧 化 铝 的 用 量 比 ， 一 般 在1:20-50 之 间 ， 层 析 柱 的 内 径 与 柱 长 比 例 在 1:10-20 之 间 。 在 用 溶 剂 冲 洗 柱 时 ， 流速 不 宜 过 快 ， 洗 脱 液 的 流 速 一 般 以 每 半 -1 小 时 内 流 出 液 体 的 毫 升 数 与 所 用 吸 附 剂的 重 量 (克 )相 等 为 合 适 。（ 6） 高 效 液 相 色 谱 在 分 离 分 析 黄 酮 类 化 合 物 中 的 应 用高 效 液 相 色 谱 具 有 分 离 效 能 高 ， 分 析 速 度 快 ， 样 品 用 量 少 等 优 点 ， 特 别 适 用 于那 些 沸 点 高 、 极 性 强 、 热 稳 定 性 差 的 化 合 物 。 例 如 生 化 物 质 、 药 物 、 离 子 型 化 合 物及 天 然 产 物 。 黄 酮 类 作 为 重 要 的 天 然 产 物 成 为 现 代 HPLC 最 早 分 析 的 样 品 之 一 14。八 十 年 代 以 来 ， HPLC 在 黄 酮 类 中 的 应 用 获 得 了 飞 速 的 发 展 15， 其 中 反 相 高 压 液相 色 谱 (RP-HPLC)扮 演 着 中 心 角 色 。 黄 酮 类 分 析 中 以 C18 柱 应 用 最 为 普 遍 ， 过 去主 要 用 于 分 析 极 性 较 大 的 苷 和 苷 元 ， 现 亦 用 于 低 极 性 的 普 元 ， 其 次 是 CS 柱 。 甲醇 -水 和 乙 睛 -水 体 系 一 直 是 优 选 的 流 动 相 。 近 来 来 ， Pietta 对 丙 醇 -环 醚 (THF 或7二 氧 杂 环 己 烷 )-水 体 系 在 药 用 植 物 提 取 物 黄 酮 类 分 析 中 的 应 用 做 了 一 系 列 研 究 ， 证明 此 体 系 在 许 多 情 况 下 比 传 统 的 甲 醇 (乙 腈 )-水 体 系 优 越 。1.3 研 究 意 义目 前 国 内 对 苎 麻 中 的 药 理 活 性 成 分 的 研 究 并 不 成 熟 ， 特 别 在 关 于 苎 麻 药 理 活 性成 分 的 提 取 ， 分 离 ， 纯 化 等 领 域 的 研 究 上 鲜 有 报 道 ， 严 重 阻 碍 了 苎 麻 活 性 成 分 的 精深 加 工 ， 开 发 具 有 药 用 和 保 健 价 值 的 药 品 、 饮 料 、 食 品 等 工 业 发 展 的 进 程 。 本 项 目主 要 是 研 究 苎 麻 根 黄 酮 类 物 质 的 提 取 分 离 纯 化 工 艺 ， 构 建 一 套 针 对 苎 麻 根 中 黄 酮 类物 质 的 生 产 工 艺 ， 促 进 苎 麻 粗 制 品 加 工 产 业 的 发 展 ， 推 进 苎 麻 由 资 源 优 势 向 经 济 优势 的 转 化 ， 创 造 出 巨 大 的 社 会 和 经 济 效 益 。2 材料与方法2.1 材 料 与 试 剂2.1.1 实 验 材 料苎麻根由湖南农业大学苎麻基地提供。2.1.2 试 剂 与 配 制(1)4%氢氧化钠溶液配制方法：称取 16 g 氢氧化钠于 384 g 蒸馏水中溶解。(2)5%亚硝酸钠溶液配制方法：称取 5 g 亚硝酸钠固体于 95 g 蒸馏水中溶解。(3)10%的 硝 酸 铝 溶 液 配 制 方 法 ： 称 取 17.6 g 硝 酸 铝 合 九 水 于 83.4 g 水 溶 解 。(4)70%的 乙 醇 溶 液 配 制 方 法 : 用 蒸 馏 水 将 700 mL 无 水 乙 醇 定 容 至 1000 mL。(5)乙 酸 乙 酯 。(6)聚 酰 胺 树 脂 、 AB-8、 NKA-9、 D101。2.1.3 仪器与设备FW177 型 中 草 药 粉 碎 机 （ 天 津 市 泰 斯 特 仪 器 有 限 公 司 ） ；加 热 回 流 装 置 ；SHZ-D（ ） 循 环 水 式 真 空 泵 （ 巩 义 市 英 峪 予 华 仪 器 厂 ） ；旋 转 蒸 发 仪 R-1001N（ 郑 州 长 城 科 工 贸 有 限 公 司 ） ；Agilent-8453E 紫 外 可 见 分 光 光 度 计 ；500 mL 分 液 漏 斗 ；cm 层 析 柱 。82.2 实验方法2.2.1 前 期 处 理将 采 集 的 苎 麻 根 洗 净 ， 切 成 薄 片 ， 放 在 烘 干 箱 中 50 烘 72 h， 将 烘 干 的 材料 于 中 草 药 搅 碎 机 中 搅 成 粉 末 ； 过 80 目 筛 ， 收 集 粉 末 备 用 。2.2.2 芦 丁 标 准 曲 线 的 制 作标 准 曲 线 制 备 :精 密 称 取 芦 丁 标 准 品 3 mg， 置 于 试 管 中 ， 加 入 80%乙 醇 溶 液2.4936 g 溶 解 ， 得 到