消化系统疾病动物模型PPT课件

* 王慷慨 1消化系统疾病动物模型The animal models of digestives system diseases讲授内容n 胃炎动物模型n 消化性溃疡模型n 病毒性肝炎模型（乙型肝炎）n 脂肪肝、肝硬化模型n 胰腺炎模型* 王慷慨 2* 王慷慨 3第 一 节 急性胃炎动物模型 * 王慷慨 4Gastritis胃黏膜层的炎症（上皮细胞、固有层、黏膜肌）上皮细胞固有层黏膜肌急性固有层中性粒细胞浸润糜烂出血慢性浅表性： 淋巴细胞、浆细胞浸润萎缩性： 炎性细胞浸润，固有层腺体减少，细胞增生损伤与修复交替进行，病程迁延胃炎模型的种类* 王慷慨 51、 HP法2、药物、乙醇、应激法3、非甾体抗炎药法4、复合法5、酸制剂法* 王慷慨 6HP法Helicobacter pyloriSpiral-shaped Gram-negative, oxidase and catalase-positive motile bacterium with 4-6 flagella (Thruster and anchor)Microaerophilic, i.e. it requires oxygen but at lower levels than those contained in the atmosphere (5-8%)With its flagella and its spiral shape, the bacterium drills into the mucus layer of the stomach, and can either be found suspended in the gastric mucosa or attached to epithelial cellsBarry J. Marshall and J. Robin Warren got the Nobel Prize in 2005 2005诺贝尔医学奖， Warren和 Marshall* 王慷慨 7Produces adhesins which bind to membrane- associated lipids and carbohydrates and help its adhesion to epithelial cellsBreaks down urea (NH2CONH2) to NH3 and HCO-3Stomach acidity Chassaing B. Gastroenterology, 2011,140(6):17208* 王慷慨 8实验动物实验动物小鼠（ 18-22g），蒙古沙鼠（ 55-60g），仔犬、仔猪操作方法操作方法HP标准菌株灌胃（ 109-1010CFU/ml）法实验前 12小时禁食禁水实验前 1小时， 0.1mol/L 碳酸氢钠 0.5ml灌胃0.5ml /只 /次 每两天一次（隔天灌胃）8周时模型成功率 90%保证 HP活性及浓度* 王慷慨 9INFLAMMATION GASTRITISMAP3KINASESmuropeptideNaumann M, Trends in Microbiology, 2004, 12(1): 2936H. Pylori induces inflammation* 王慷慨 10体重 300g左右雄性 Wistar大鼠。酸制剂法 急性胃炎动物 模型实验动物实验动物大鼠禁食 24h，在清醒状态下，用下述试剂或物质灌胃：（ 1）水杨酸制剂（如 20 mmol/L阿司匹林或水杨酸溶液）按 100 mg/kg体重灌胃；（ 2） 10 mmol/L的醋酸；（ 3）不同浓度的盐酸（ 1， 10， 100 mmol/L）；（ 4）同种动物胆汁；（ 5） 2 mmol/L的牛磺胆酸；（ 6） 15%的乙醇；（ 2） -（ 6）可单独或几种合用（ 2ml左右）灌胃； 急性胃炎动物 模型操作方法操作方法11* 王慷慨 124h后处死动物，剖检可见胃内发生急性弥漫性炎症改变。胃黏膜表面有浅表糜烂、出血，粘膜层内见中性粒细胞浸润。急性胃炎动物 模型结结 果果病病 变变* 王慷慨 13* 王慷慨 14观察指标： ？组织： HE，免疫荧光，干湿重比等NOS， PGE2等PCR：特定基因或炎症因子Western：特定激酶或信号分子，特定基因等* 王慷慨 15第 二 节急性胃溃疡动物模型 * 王慷慨 16溃疡病的病因n 致溃疡因素 :胃酸、胃蛋白酶、非甾体抗炎药不合理应用、幽门螺杆菌感染等。n 防御因素 ：粘液 -碳酸氢盐屏障、粘膜屏障、粘膜血流量、胃上皮细胞的更新、表皮生长因子和内生性前列腺素等。n 溃疡的形成主要由于 防御因素 和 致溃疡因素 的平衡失调所致。* 王慷慨 17 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物 模型在抗溃疡药物药效学试验中，应激法、幽门结扎法和醋酸法制备的胃溃疡模型为必做实验，利血平法和乙醇法可任选其一。乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松* 王慷慨 18 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物 模型治疗性给药 醋酸法复制的模型预防性给药 其他模型乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松* 王慷慨 19 应激法 幽门结扎法 药物法 醋酸法 常用的方法急性胃溃疡动物 模型阳性对照药：H2受体拮抗药 西咪替丁，雷尼替丁，法莫替丁等加强胃黏膜防御功能 甘珀酸，果胶铋，硫糖铝乙醇组胺促胃液素肾上腺类固醇水杨酸盐血清素利血平保泰松* 王慷慨 20研究抗胃溃疡药物胃黏膜形态观察胃分泌试验胃黏膜血流量测量胃粘液测定抗炎镇痛试验抑制幽门螺杆菌试验等* 王慷慨 21幽门结扎法胃溃疡模型 * 王慷慨 22幽门结扎后，可刺激胃液分泌并使高酸度胃液在胃中潴留，损伤胃黏膜造成胃溃疡。成年大鼠，雄雌均可。成年大鼠，雄雌均可。幽门结扎法胃溃疡模型造模机制造模机制实验动物实验动物* 王慷慨 231.给药 3天。实验前大鼠禁食 (24h)不禁水。2.自胸骨剑突下沿腹中线切开腹壁，切口约23cm。在左侧肋缘部位用手指轻轻上推暴露胃。3.在胃幽门与十二指肠连接处用结扎线将幽门结扎，注意勿将邻近的其他器官、血管结扎。同时经十二指肠给予受试药。缝合腹壁切口，用纱布包扎切口。幽门结扎法胃溃疡模型操作方法操作方法* 王慷慨 244. 幽门结扎后，停止供水供食，术后 18h处死大鼠，取胃固定、剖检。5. 沿胃大弯剪开胃壁，洗净胃内容物，将胃壁展开，胃黏膜面向上用大头钉固定在蜡板上。 6. 用肉眼或放大镜观察胃黏膜面，记录每只动物产生的溃疡数、溃疡程度、溃疡面积（或溃疡指数）及病变的情况。幽门结扎法胃溃疡模型* 王慷慨 25病变程度的评价 1 溃疡面积 通过溃疡中心量取的最大纵径和横径S= （ d1/2）（ d2/2）式中 S为溃疡面积， d1为通过溃疡中心量取的最大纵径， d2为通过溃疡中心量取的最大横径。幽门结扎法胃溃疡模型* 王慷慨 26病变程度的评价 2 溃疡指数 可计数 前胃 部溃疡面积，以其总和作为溃疡指数。 幽门结扎法胃溃疡模型* 王慷慨 27病变程度的评价 3 溃疡程度（ Okabe法） 在解剖显微镜下测量溃疡面积，将每只鼠溃疡面积的总合分为 5个等级作为溃疡指数：溃疡面积 (mm2)：1-12 13-25 26-37 38-50 50mm 2或穿孔溃疡指数 : 1级 2级 3级 4级 5级幽门结扎法胃溃疡模型* 王慷慨 28模型组溃疡指数给药组溃疡指数模型组溃疡指数给药组溃疡指数溃疡抑制百分率溃疡抑制百分率 100%模型组溃疡指数模型组溃疡指数发生溃疡的动物数发生溃疡的动物数溃疡发生百分率溃疡发生百分率 100%实验动物数实验动物数病变程度的评价 3 溃疡程度（ Okabe法）幽门结扎法胃溃疡模型* 王慷慨 29形成的溃疡主要发生在对胃液抵抗力较弱的前胃部（瘤胃），多为圆形或椭圆形。但病变较表浅，属于胃黏膜急性出血性糜烂，与人类胃溃疡的典型病变差距较大。结结 果果幽门结扎法胃溃疡模型* 王慷慨 30