医学微生物学实验三胡11-3-22

医学微生物学 实验三南华大学病原学实验中心微生物学与免疫学教研室1、细菌的人工培养（讲授）2、细菌的培养方法：固体培养基接种法（自做）；半固体、液体培养基接种法（示教）3、葡萄球菌、链球菌培养及生化（示教）4、细菌的形态观察自阅片： 甲型链球菌、结核杆菌示教片： 淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、 炭疽炭疽杆菌杆菌实验内容第四节 细菌的人工 培养 p31一、 培养基 （ culture medium）：是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的 混合营养物 制品 。常用培养基的种类 按营养组成和用途分厌氧培养基基础培养基增菌培养基选择培养基鉴别培养基二、细菌在培养基中的生长情况 据物理状态分1、液体培养基：均匀混浊 、 沉淀生长 、 表面生长 （菌膜）；多用于增菌均匀混浊 对照沉淀生长2、固体培养基： 含 1.5%琼脂用于分离培养菌落 ： 单个细菌分裂繁殖成一堆肉眼可见的细菌集团。纯培养 ： 挑取一个菌落，移种到另一培养基中，生长出来的细菌均为纯种，称为 纯培养 。菌落特征 大小、形状、颜色、气味、透明度、光滑或粗糙、湿润或干燥、隆起或扁平、边缘整齐与否、是否溶血等 有助于细菌鉴定菌落（ S型）菌苔菌落（ R型）光滑型 (S型 )粗造型 (R型 )粘液型 (M型 )3、半固体培养基： 含 0.3%0.5%琼脂鞭毛菌 混浊生长 （ 沿穿刺线呈云雾状 /羽毛状）无鞭毛菌 沿穿刺线呈 线状生长用于 检测细菌的动力 和 保存菌种斜面划线示意图4、斜面培养基接种法应用：短期保存菌种三、 人工培养细菌的用途u在医学中的应用1.感染性疾病的病原学诊断 ： 明确病因，指导用 药2.细菌学的研究 ： 细菌遗传、变异、耐药性3.生物制品的制备 ： 疫苗、类毒素、抗毒素u在工农业生产中的应用 （抗生素、维生素、酶制剂等） u在基因工程中的应用 （ 基因工程菌 乙肝疫苗）进入实验内容讲授1、固体培养基 (平板 )接种法分区划线法 连续划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环灭菌接种环，取菌准备分区划线法原划线标本：混合菌液分组： 1人一个固体平板连续划线法菌落示意图细菌在 固体 培养基中的生长现象细菌在固体培养基中的生长现象菌 落 菌落特征 ：大小、形状、颜色、气味、透明度、表面光滑或粗糙、湿润或干燥、边缘整齐与否、溶血性等。 菌落类型： S型、 R型、 M型菌落。菌 苔 ： 指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌落（ S型）菌苔菌落（ R型）光滑型 (S型 )粗造型 (R型 )粘液型 (M型 )注意事项1、无菌操作2、密而不重叠3、勿划破琼脂4、做好标记， 第二天观察结果2、葡萄球菌培养（示教）营养要求不高，普通培养基生长良好菌 落 ： S型菌落，金黄色、表皮、腐生葡萄球菌各自形成 金黄色、白色、柠檬色 -脂溶性色素血平板：金黄色葡萄球菌形成的 -溶血环金黄色色素 白色色素3、链球菌培养（示教） 血平板上的菌落： 甲型溶血性链球菌形成草绿色溶血现象，乙型溶血性链球菌形成透明的完全溶血现象，丙型链球菌无溶血现象。甲链溶血草绿色溶血乙链溶血丙链不溶血4、常见致病菌的形态与染色性甲型溶血性链球菌甲型溶血性链球菌取材：纯培养物染色法：革兰染色放大倍数： 10X100自阅片之一结核分枝杆菌结核分枝杆菌取材：痰涂片染色法：抗酸染色放大倍数： 10X100自阅片之二菌体染成 红色 ，细长略微弯曲杆菌，单个或分枝状排列；（ 非抗酸菌及细胞染成蓝色 ）淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌示教片之一取材：泌尿道脓性分泌物染色法：革兰染色放大倍数： 10X100淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌中性粒细胞分叶核淋球菌染成 红色 /G-，肾形或豆形，成双排列肉毒梭菌肉毒梭菌示教片之二取材：纯培养物染色法：革兰染色放大倍数： 10X100G+粗短杆菌，芽胞呈椭圆形，比菌体粗，次极端，细菌呈 汤匙状或网球拍状产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌示教片之三取材：小鼠腹腔渗出液染色法：革兰染色放大倍数： 10X100G+粗大杆菌，两端几乎平切，在被感染得人或动物体内形成 明显的荚膜炭疽杆菌炭疽杆菌示教片之四取材：纯培养物染色法：革兰染色放大倍数： 10X100G+粗大杆菌，有氧条件下形成 椭圆形芽胞，位于菌体中央白喉棒状杆菌白喉棒状杆菌取材：纯培养物染色法：美蓝染色放大倍数： 10X100取材：纯培养物染色法： Neisser染色放大倍数： 10X100示教片之五 菌体细长弯曲的杆菌，粗细不一，常一端或两端膨大呈棒状；排列不规则，呈栅栏状、 V字形或 L字形。 异染颗粒1、细菌的人工培养（讲授）2、细菌的培养方法：固体培养基接种法（自做）；半固体、液体培养基接种法（示教）3、葡萄球菌、链球菌培养及生化（示教）4、细菌的形态观察自阅片：甲型链球菌、结核杆菌示教片：淋球菌、肉毒杆菌、产气荚膜杆菌、白喉杆菌、 炭疽杆菌炭疽杆菌第 2页： 实验名称： 细菌平板划线分离法 （记录实验结果