第四章 生物制品生

第四章 生物制品生产基本技术第一节 菌种与毒种选育技术n 一、生物制品毒种的标准n 生物学性状明显，历史清楚 ：形态、生理、生化典型、血清学、来源、代数等清楚。n 遗传学纯一稳定 ：稳定纯一的菌种，才能制造出高质量稳定的疫苗。n 免疫抗原、反应抗原好 ：高质量疫苗的基础。n 毒力在适当范围内 ：灭活疫苗应该是强毒，弱毒疫苗安全，中等毒力的如 ND-I系， IBD中等毒力苗。测定毒力要用敏感动物进行。n 二、强毒种的选育n 1、强毒种的用途：灭活疫苗、诊断试剂、抗血清、攻毒试验。n 2、强毒种来源：典型传染病分离培养 ;保藏中心提供。n 3、强毒种分离：n a、纯粹试验（分离培养、鉴定）。n B、致病力（动物、鸡胚、细胞试验）。n C、抗原性（免疫及反应抗原试验）n D、稳定性（传代不变异）n 达到： 毒力强，纯粹，抗原好，稳定 的菌种，最后冻干保藏。这就是 强毒菌种的标准n 复壮：弱毒菌种在敏感动物或细胞上多次传代，达到毒力增强的目的（日本 731部队用人试验，目的是增强细菌毒力，做细菌武器使用。）。n 三、弱毒种的选育n 1、用途：弱毒疫苗，诊断试剂，免疫血清。n 2、来源：自然界筛选和人工诱变。n 3、弱毒筛选途径：n 自然界弱毒筛选：同源弱毒 新城疫 I系异源弱毒 火鸡疱疹病毒疫苗，它们都是在自然界寻找发现的。n 人工诱变筛选：化学诱变：洗衣粉、锥黄素、醋酸铊等加入培养基。物理诱变：高温培养，干燥，紫外线等。生物诱变：通过钝感动物，细胞以及细胞培养获得。n 4、初选的依据： 生物性状改变 猪丹毒杆菌变长丝状，菌落光滑变粗糙。 病毒蚀斑变异。 温度敏感变异。 药物敏感变异 营养变异 宿主变异第三节 细菌培养技术n 细菌培养技术是生物制品制造的基础，一些内容在微生物学已经学习过，这里主要讲一些重要的细菌培养技术。一、细菌生长规律与条件n 大家一定要熟悉细菌的生长曲线，因为不同的生物制品，要用不同时期的细菌，如细菌疫苗，要对数期或稳定期细菌；芽孢疫苗，要衰老期细菌；外毒素要老龄细菌。n 其次，要根据不同细菌用不同的培养基进行培养，用不同的培养方法（需要氧气，微需氧，厌氧。另培养温度， pH，渗透压等。）。二、细菌培养的基本技术n 步骤：先分离出单个菌落 斜面培养基 生化或血清鉴定 菌种保存 生产生物制品 先接种到斜面菌种 小三角瓶肉汤 大三角瓶肉汤。n （一）细菌分离培养 （目的是稀释病料，得到单个典型菌落）。n 1、需氧菌分离培养：分段划线、倾注培养。n 2、微需氧培养：鸭疫巴氏杆菌，牛布氏杆菌病，猪传染性胸膜肺炎菌等，用蜡烛缸方法。 3、厌氧菌培养：用疱肉基，物理除氧气（加氮气，氢气），化学除氧：焦性没食子酸加烧碱。厌氧罐厌氧培养箱n （二）细菌的规模培养n 生物制品是产品，一般要大规模培养，才能满足基层需要。n 1、菌种接种量： 1-3%，过少生长慢，过度带入有害产物多，影响生长。n 2、培养时间：菌苗，对数期和稳定期的细菌好；芽孢疫苗：衰老期细菌；外毒素：需要 1周时间培养。在培养过程中，如果有少量污染，可以提前灭活终止培养。n 液体静止培养：一般细菌疫苗多用，用大三角瓶（ 5000ml）或发酵罐，装入培养基1/2-2/3 量，需氧培养，要 5小时摇动一次，增加氧气浓度。培养厌氧细菌，可以装满培养基，上面加少量石蜡油，隔绝空气，下加肝块或肉渣（疱肉基），它们氧化，吸收氧气，达到除氧气目的。液体培养含菌量低，多需要浓缩。n 3、培养方法：根据不同制品的性质和要求，选育不同方法。n 固体表面培养：多用于诊断剂，也有菌苗生产。可随意调节细菌浓度，但操作麻烦，劳动量大。n 培养方法有克氏瓶，大平皿，到入菌液， L玻棒刮抹接种，培养后加生理盐水，再用 L棒刮洗下细菌混悬液。n 液体深层通气培养（发酵罐）：可自动调节温度、氧气、 pH、营养、搅拌，