生物学实验3-细胞

基础生物学实验三 光学显微镜的结构和使用 动物细胞的基本形态与显微测量 细胞器的显示与观察 细胞膜的通透性 植物细胞骨架的光学显微镜观察 液泡系和线粒体的活体染色 实验一普通光学显微镜的结构和使用【实验目的】了解普通光学显微镜的构造及原理，熟练掌握其操作方法；了解人血与蛙血细胞的形态差异。【实验原理】显微镜种类：显微镜的组成系统：光学、机械、电子。普通光镜的光学系统：物镜、目镜、聚光器、光阑等。普通光镜的机械系统：镜筒、镜臂、物镜转换器、调焦螺旋（粗调和细调）、载物台、镜座等【实验步骤】A： 显微镜的使用取用显微镜时，右手握镜臂，左手托镜座，避免倾斜；接通电源，打开光圈，上升聚光器；标本片置于载物台上，材料对准通光孔；低倍下调焦；选择合适区域推到中央，换高倍镜调焦（细调）；观察绘图；结束时将显微镜复原到非工作状态 。显微镜使用的注意点：禁止单手提拿显微镜和随意拆卸零部件；低倍下调焦时先上升载物台（或下降镜筒），再缓慢下降载物台或上升镜筒，使物镜镜头与玻片距离由小到大调焦。一般直接转换成高倍镜后细调焦距；观察标本时两眼同时睁开；调节合适的光圈和电流强度可使成像更清晰；如果使用 100油镜，应在标本上滴一滴香柏油，使镜头底端与该介质接触。观察完后及时用二甲苯擦拭油镜头。注意其它镜头不得接触香柏油。【实验步骤】B： 操作练习： 血细胞涂片的观察材料：人血和蛙血涂片观察内容：血细胞的组成；两种红细胞的形态差异等。附：字母装片，精液涂片。【作业】绘图：人血和蛙血细胞形态实验二动物细胞的基本形态与显微测量【实验目的】掌握光镜下多种细胞的形态和结构特征；掌握显微测微尺的使用和测量细胞大小的方法。【 实验原理】动物各种不同组织的细胞具有不同的形态大小等特征上皮组织：单层扁平上皮单层立方上皮单层柱状上皮复层扁平上皮结缔组织：骨软骨血液肌 组织：骨骼肌心肌平滑肌神经组织单层柱状上皮与复 层 扁平上皮骨骼肌细胞与心肌细胞平滑肌细胞神经元肝细胞【实验原理】显微测微尺由目镜测微尺和镜台测微尺组成，台尺的每小格已知 0.01nm， 在相应放大倍数的物镜下对目尺加以标定后，即可通过目尺准确测量细胞的大小。【实验步骤】A. 分别观察肠上皮细胞、骨骼肌细胞、心肌细胞、神经细胞和肝细胞等切片，注意比较鉴别细胞的形态结构，核形态数量和位置等特征。B. 蛙血细胞大小的测量1.蛙血涂片的制备2.目镜测微尺的标定3.细胞大小的测量【作业】1. 绘图：各种细胞的形态结构2. 记录 5个以上的蛙血细胞的长、短径，得到平均细胞大小实验三细胞器的显示与观察【实验目的】了解光镜下细胞器的形态和分布掌握超活染色法制作光镜标本的基本方法【实验原理】活体染色是能使活的细胞或组织着色且无毒害的一种染色方法。可用于研究生活状态下的细胞形态结构和生理或病理变化。活体染料被特异性地固定和堆积在细胞内某种细胞器上而显色。活体染色分为体内活染和体外活染（超活染色）。詹纳斯绿 B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒体进行超活染色。其原理是由于线粒体内细胞色素氧化酶系的作用，使 JGB保持氧化状态，呈亮绿色；而周围的细胞质中染料被还原为无色的色基。【实验步骤】A. 人口腔上皮细胞线粒体的超活染色与观察B. 用牙签刮取口腔颊部粘膜的上皮细胞，在洁净的载玻片上与 1d JGB染液混匀，染色 15min以上。盖上盖玻片，光镜下观察线粒体的形态和分布。C. B. 小鼠肝脏细胞线粒体的超活染色与观察D. 取小鼠肝脏边缘较簿组织，置于含 Ringer液平皿中 挤压洗涤 2-3次，吸去 Ringer液，加 JGB染液染色 30min， Ringer液 洗涤 1次后转移至载玻片，将组织拉碎，去稍大的组织块，盖上盖玻片，镜检。E. C. 高尔基复合体标本的观察F. 兔脊神经节切片G. D. 动物细胞中心体标本观察【作业】绘图：人口腔上皮细胞（显示线粒体）小鼠肝细胞（显示线粒体）兔脊神经节细胞（显示高尔基体）实验四细胞膜的通透性【实验目的】掌握细胞膜的选择通透性和细胞内外水分子交换的原理。【实验原理】细胞与周围环境之间可进行选择性物质交换。水分子通常以简单扩散的方式通过细胞膜，如果细胞内外存在渗透压差时，水分子表现从渗透压低的一侧向高的一侧扩散。将红细胞置于低渗溶液中，溶剂很快进入细胞内，发生溶血，释放出血红蛋白，重新封闭的红细胞膜构成血影。而在高渗溶液中，动物细胞发生脱水皱缩。将红细胞置于数种等渗溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，有的不能通过，能通过的溶质通过的速度也有差异。随着溶质的进入，红细胞内渗透压提高，带动水分的摄入，最终引起溶血。通过溶血时间的测定可估计红细胞膜对各种溶质通透性的大小。【实验步骤】1、 制备 10兔红细胞悬液：兔心脏抽血，加肝素抗凝，加等渗氯化钠稀释 10成不透明的悬液。2、在 1支试管加 5ml蒸馏水，再加 0.5ml 10 红细胞悬液，观察溶血现象的发生。3、 10支试管分别加 5ml不同的等渗溶液，再加 0.5ml 10 红细胞悬液，观察溶血现象是否发生，记录溶血发生时间。4、显微镜