第04章分析方法验证new

JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*药品检验工作的基本程序取样 鉴别 检查含量测定写出检验报告1JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第四章第四章 药物定量分析与分析方法验证药物定量分析与分析方法验证二二 .定量分析方法的特点定量分析方法的特点三三 .药物分析方法的验证药物分析方法的验证 四四 .生物样品分析方法的基本要求生物样品分析方法的基本要求一一 .定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法2JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法一、概述含卤素药物CX乙烯型卤和芳卤烯丙型卤和苄卤卤代烷型3JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三氯叔丁醇 六氯对二甲苯泛影酸 碘他拉酸第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法4JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法不经有机破坏经有机破坏直接测定 配位滴定法氧化还原滴定法水解后测定 碱水解酸水解经还原分解后测定湿法破坏 凯氏定氮法干法破坏 高温灼烧法氧瓶燃烧法5JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*(一 )、直接测定法 葡萄糖酸钙 EDTA配位滴定 富马酸亚铁 邻二氮菲 -硫酸铈滴定 葡萄酸锑钠 间接碘量法(二 )、经水解后测定法适用范围： 金属原子不直接于碳原子相连或某些 C-M键结合不牢固的有机金属药物。6JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*1、碱水解法三氯叔丁醇 银量法返滴定2、酸水解法适用范围： 含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物。EDTA配位滴定7(三 )、经还原分解后测定法适用范围： 碘原子直接与芳环连接的含碘有机化合物。8JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*三、经有机破坏的分析方法含氮、硫、硫柳汞、氯化钠的生物制品、含氮有机合成药物测定的前处理和生物制品中金属元素测定时生物基质的去除。u H2SO4-HNO3u H2SO4-HClO4u H2SO4-H2SO4u HNO3-KMnO4分解剂 /消化剂 辅助分解剂 凯氏定氮法测定含有氨基和酰胺结构的药物结构(一 )湿法破坏9凯氏烧瓶K2SO4(提高消解温度 )CuSO4(加快消解速度 )硫酸碱液硼酸 (吸收液 )甲基红 -溴甲酚绿指示剂硫酸滴定空白校正10JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*(二 )干法破坏1.高温灼烧法用于含卤素、含磷药物和药物中砷盐的检查。常加入无水碳酸钠、硝酸镁、氢氧化钙、氧化锌等辅助灰化。2.氧瓶燃烧法系指将含有待测元素的有机药物置于充满氧气的密闭的密闭的燃烧瓶中充分燃烧，使有机结构部分彻底分解为 CO2和 H2O，待测元素根据电负性的不同转化为不同价态的氧化物，被吸收于适当的吸收液中，再根据其性质和存在方式选择方法进行分析。 11JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第一节第一节 定量分析样品的前处理方法定量分析样品的前处理方法12JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*13一、容量分析方法1.滴定度每 1ml规定浓度的滴定液所相当的被测药物浓度。被测药物 滴定液第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点1415JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点二、光谱分析法(一 )紫外 -可见分光光度法u 仪器校正u 空白溶剂校正u 吸收峰波长确定u A (0.30.7)16JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点含量测定方法1.对照品比较法原料药17JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*2.吸收系数法习题一 维生素 B2含量测定取本品 75mg，精密称定，置烧杯中，加冰醋酸 1ml与水 75ml，加热溶解后，加水稀释，放冷，移置 500ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀；精密量取 10ml，置100ml量瓶中，加 1.4%醋酸钠溶液 7ml，并用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法在 444nm的波长处测吸收度，按维生素 B2的吸收系数 为 323计算第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点18JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点3.计算分光光度法4.比色法19JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*特点： 灵敏度高，可达 10-10 10-12g/ml 要求低浓度下测定 须做空白测定 荧光弱的药物可衍生化后测定(二 )荧光分析法20JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*(三 )色谱分析法1.HPLC示例一 炔诺酮的含量测定 照高效液相色谱法 (附录 D 测定 )色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇 -水 (65:35)为流动相，检测波长为 244nm。理论塔板数按炔诺酮峰计算不低于 1500，炔诺酮峰与内标物质峰的分离度及主成分峰后一杂质峰与主成分峰的分离度均应符合要求。21JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点测定法 取本品约 25mg，精密称定，置 25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取此溶液 2ml与内标溶液 3ml，置 10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，取 20l注入液相色谱仪，记录色谱仪，记录色谱图；另取炔诺酮对照品适量，精密称定，同法测定。按内标法以峰面积计算，即得。22JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*定量分析的方法 (外标法 )0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0Time, min0%50%100%Rel. Int. (%)23JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*定量分析的方法 (内标法 )0.2 0.6 1.0 1.4 1.8 2.2 2.6 3.0Time, min0%50%100%Rel. Int. (%)24JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第二节第二节 定量分析方法的特点定量分析方法的特点测定法 取本品约 35mg，精密称定，置 10ml棕色量瓶中，精密加入内标溶液 2ml，用石油醚 (30 60C) 溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取 1l注入气相色谱仪，测定，即得。本品含 -蒎烯 (C10H16)不得少于 70%。25JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*第三节第三节 药品分析方法的验证药品分析方法的验证目的： 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求效能指标： 评价分析方法的尺度效能指标包括 : 精密度 , 准确度 , 检测限 ,定量限 ,选择性 , 线性与范围 , 耐用性26JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*一、准确度（ accuracy） 系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。(一 )含量测定方法回收率 (Recovery)回收试验加样回收试验33 ，至少 9个测定结果27JILIN UNIVERSITYCOLLEGE OF LIFE SCIENCE*二、精密度 (Precision)系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。表示： 偏差 (d)、标准偏差 (s),、 相对标准偏差 (RSD)重复性 : 同一实验室 ,同一人多次测定的精密度中间精密度 : 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性 : 不同实验室，不同人测定的精密度28三、专属性 (Specificity)v 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性。目视法信噪比法 S/N=3四、检测限 (Limit of Detection, LOD)药物能被检出的最低浓度 (g/ml)五、定量限 (Limit of Quantitation, L