章病毒感染的检查方法和防治原则ppt课件

第 25章 病毒感染的检查方法和防治原则Examination and Strategy of Prevention and Therapy for Viral InfectionHigher Education PressHigher Education Press第一节 病毒感染的检查方法一、标本的采集和送检用于分离病毒或检测其核酸的标本，应采集急性期标本，要根据感染部位采集标本，应严格注意无菌操作。由于病毒在室温中很易被灭活，应在采集和运送标本中注意冷藏。Higher Education PressHigher Education PressThe principle for the collection of specimen for viral diagnosis is same as that for bacteria in addition to the following. 1. Adding antibiotics into the specimen. 2. The viral specimen stored into the low temperature or ice-bag and transported to the lab ASAP. Stored at the -70oC or liquid nitrogen in lab.3. The pathological tissue stored in the 50% neutral glycerol 4. The serum taken at onset of illness and 2-3weeks after recover to compare the titre of antibodies.Higher Education PressHigher Education Press二、病毒分离培养的方法1. 动物 animals接种：如鼠、兔、犬、牛和猴等。2. 鸡胚 chicken embryo接种：针对有些病毒，如流感病毒、痘病毒。3. 细胞 cell culture培养：有三种类型的细胞。Isolation and identification of viruses in the lab is Gold standard for diagnosis. Higher Education PressHigher Education Press（ 1）细胞类型 原代细胞 Primary cell culture ：对多种病毒的易感性高，主要用于从标本中分离病毒。 传代细胞 Continuous passage cell line ：是指可在体外连续传代的细胞。大多数来自肿瘤组织或二倍体细胞，如 Hela细胞或自发转化的原代细胞系，如中国地鼠卵巢细胞（ CHO）。这些细胞系的染色体与正常细胞不同，为多倍体。 二倍体细胞 Diploid cell line ：则为在体外连续传代 50100代后，仍保持其二倍染色体数目的细胞。Higher Education PressHigher Education Press（ 2）病毒增殖指标 细胞病变效应（ cytopathic effect, CPE） ：溶细胞型病毒感染细胞后，可出现细胞团缩、裂解或细胞肿大、数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状、脱落或死亡等。 A. 未接种病毒的细胞 B. CPE的细胞（ Hela细胞，柯萨奇病毒感染）Higher Education PressHigher Education Press 血吸现象： 感染细胞膜上带有病毒（正黏病毒，副黏病毒）血凝素与加入的红细胞结合。 干扰现象：当两种病毒感染同一种细胞时，常发生一种病毒抑制另一种病毒复制增殖的现象。 Higher Education PressHigher Education Press(三 )病毒的鉴定 病毒的形态学鉴定：电子显微镜、光学显微镜 病毒血清学鉴定 病毒成分鉴定Higher Education PressHigher Education Press（ 4）病毒定量方法空斑形成单位（ plaque forming unit, PFU）： 测定病毒数量可用空斑形成单位。一个空斑是标本中一个病毒大量复制所致，有感染性的病毒经适当稀释后接种于单层细胞，由于单个病毒的复制增殖使局部单层细胞脱落，此即空斑。50组织细胞感染量（ TCID50）红细胞凝集试验光镜、电镜分离培养免疫荧光ELISA分子生物学技术Southern blotPCRNorthern blot病毒感染的检测方法Higher Education PressHigher Education Press三、病毒感染的血清学诊断采用免疫标记技术，即用荧光素、同位素、生物素和酶等标记已知的特异性抗体，用于检测病毒感染局部脱落细胞或分泌物细胞中的抗原，来早期诊断病原。机体血清中出现抗某种病毒的抗体，除患过相应的疾病外，亦可因隐性感染或疫苗接种而产生。因此，抗体效价必须明显高于正常人群的水平或随病程递增才有诊断价值。Higher Education PressHigher Education Press用已知的病毒与血清中未知的抗体进行反应。The known antigen of virus used for the detection of unknown antibody in the serum.1. neutralizing test: NT test2. complement fixation test, CF test:3. hemoagglutination inhibition test:4. agar immuno-diffusion test:Higher Education PressHigher Education PressHigher Education PressHigher Education Press新病毒的鉴定identification of newly viruses:1. types of viral nucleic acid: DNase and RNase used for confirm of DNA or RNA.2. Detection of physic-chemical properties3. morphological observation:4. serological diagnosis5. gene sequence and match. Higher Education PressHigher Education Press第二节 病毒感染的防治原则一、病毒感染的预防1. 人工主动免疫 病毒疫苗可分成 传统疫苗 和 新型疫苗 两类。传统疫苗：灭活疫苗、减毒活疫苗和亚单位疫苗等。新型疫苗：主要指基因工程技术生产的疫苗，包括基因工程亚单位疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗等。Higher Education PressHigher Education Press灭活疫苗：乙脑疫苗、狂犬疫苗、流感灭活疫苗、HAV和 HBV疫苗等。减毒活疫苗：脊髓灰质炎疫苗、麻疹疫苗、 HAV疫苗、腮腺炎疫苗、风疹疫苗等。常见的疫苗种类Higher Education PressHigher Education Press2. 人工被动免疫 常用的人工被动免疫制剂有免疫血清、胎盘球蛋白、丙种球蛋白，以及与细胞免疫有关的转移因子等。 administration of specific antibody, purified immunoglobulin or cytokins to allow the body to acquire the specific immunity immediately.Higher Education PressHigher Education Press二、病毒感染的治疗1. 核苷类药物2. 病毒蛋白酶的抑制物3. 干扰素或干扰素诱生剂4. 抗病毒基因治疗5. 免疫制剂6. 中草药 Higher Education PressHigher Education Press（一）抗病毒化学制剂1. 核苷类药物(1) 疱疹净（ IDU）(2)阿昔洛韦（ acyclovir, ACV）和 丙氧鸟苷 (acyclovir,ACV)是目前最有效的抗疱疹病毒药物之一 .机制： 竞争病毒 DNA复制酶(3) 拉米呋定 (lamivudine) ：抑制慢性乙型肝炎患者体内 HBV的复制。机制：抑制病毒逆转录酶(4)病毒唑：抑制 DNA和 RNA病毒复制。流感病毒、呼吸道合胞病毒的治疗Higher Education PressHigher Education Press2. 非核苷类反转录酶抑制剂 nevirapine是第一个新合成的非核苷类反转录酶抑制剂，1996年获准用于治疗 HIV3. 蛋白酶抑制剂 ：英迪纳瓦 (indinavir)是 1996年批准的新一代蛋白酶抑制剂，用于 HIV.4. 其他抗病毒药物 ：金刚烷胺能阻止脱壳，主要用于治疗甲型流感。 Higher Education PressHigher Education Press(二 )干扰素和干扰素诱生剂的应用1 干扰素 (IFN)2 IFN诱生剂 : polyI:C、甘草甜素、芸芝多糖等（三） 中草药防治病毒感染 ： 板蓝根、黄芪、大青叶等（四） 基因治疗 (gene therapy) ：目前还处于研究阶段(1)反义寡核苷酸 (antisense oligonucleotide, asON)人工合成的，与靶基因或 mRNA某一区段互补的核酸片断，结合于靶基因 /mRNA上 ,从而封闭基因的表达。包括：反义 DNA， 反义 RNA， 其来源可有人工合成和体内表达两类。 (2) 核酶 (ribozyme) ： 是既能与靶基因序列结合又具酶活性的一类 RNA分子 。(3) 干扰