项目3发酵技术生产生物药物任务1发酵法生产白细胞介素

项目 3：发酵技术生产生物药物任务 1：发酵法生产白细胞介素教学安排：1. 员工培训由老师讲解白细胞介素 -2生产的理论基础。分配实操任务：白细胞介素发酵生产。2. 学生模拟组建运营一个白细胞介素 -2生产企业，撰写计划书 (在理论教学期间完成 )。市场部：白细胞介素 -2的结构、功能、用途，白细胞介素 -2市场状况与销售预测，竞争对手状况与分析。技术部：确定白细胞介素 -2生产的工艺流程及工艺参数，编制生产操作规程，确定生产车间的布局。品控部：制定白细胞介素 -2的质量标准，生产取样分析操作规程，质量检测标准和操作规程。总经理：协调监督各部工作，最后拿出完整的计划书。3. 计划书实施。计划书要先经过老师的审核，然后实施。实施过程中考核操作技能。实施后及时进行实训报告的撰写也总结。l 一 蛋白质类药物l1 蛋白质类激素l 垂体蛋白激素和促性腺激素。l2 血浆白蛋白l3 蛋白质类细胞生长调节因子l4 黏蛋白。l5 胶原蛋白。l6 碱性蛋白质。l7 蛋白酶抑制剂。l 二、生产用微生物的来源及发酵特性l1 大肠杆菌宿主菌特点l 优点： 遗传背景清晰，容易培养；l 缺点：形成包涵体；不能修饰蛋白。l 表达形式温度敏感型乳糖诱导型l 2 酵母宿主菌特性l 优点：可对蛋白修饰；蛋白折叠正确；l 缺点：生产较慢。常用甲醇诱导型。l3 基因工程菌发酵控制要点l(1) 培养基l 兼顾生长与外源基因表达。l(2)接种量l 接种量适中，影响生长速度和迟滞期的长短。l(3) 温度l 影响酶活性。l(4)溶解氧l 维持较高 DO值。l (5) 诱导时机l 微生物生长旺盛后。l(6) pHl 根据生长期与生产期的需求控制。l 三、白细胞介素的结构与功能l Interleukin，简称 IL。l 目前批准上市的有 IL-2、 IL-6、 IL-12等。l IL-2分子量为的糖蛋白，它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的细胞增殖。重组白介素可用于临床研究。主要用于 肾癌 、 黑色素瘤 和 非何杰金淋巴瘤 有效（）。细胞代表个有单核巨噬细胞，和淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外，细胞（不象细胞）介导杀伤不受的约束。 l 四 、生产工艺l 1 工艺流程图IL-2工程菌 斜面 摇瓶 发酵制备包涵体洗涤与裂解凝胶过滤与复性检定与包装l 2 生产过程及工艺过程l(1)发酵l 工程菌为大肠杆菌，温度敏感型。l 种子用 LB培养基；l 发酵用 M9CA培养基， 30度 10小时，后提高温度至 42度，诱导 3h。l (2) 分离纯化l 包涵体制备l 离心收集，菌体悬于 EDTA溶液中，用超声波破碎细胞，后 8000r/min离心，收集沉淀 (包涵体和细胞碎片 )。l 包涵体洗涤及裂解：l l 用 Tris-HCl洗涤 3次，离心收集沉淀，用盐酸胍变性，离心收集上清液。 l 凝胶过滤及复性：l 上清过 Sephacryl S-200柱，醋酸液洗脱，收集洗脱峰。l 干燥：l 用冷冻真空干燥。l 作业：l1 蛋白