人参与林蛙油配伍的保健食品体外致突变试验研究

人参与林蛙油配伍的保健食品体外致突 变试验研究 人参作为著名的中草药 , 在我国已经使用了几千年 之久 , 据神农本草经记载 ：人参主补五脏 , 安精神 , 定魂魄 , 止惊悸 , 除邪气 , 明目开心益智 , 久服轻身 延年。 林蛙油又称蛤蟆油、田鸡油、哈什蚂油 , 为雌性 林蛙干燥的输卵管制品 , 具有补肾益精、润肺养阴之功效 , 其主要分布东北长白山区。林蛙油中含有多种生理活性物 质 , 具有明显的生理保健作用。因此 , 本文采用 Ames 试验平皿掺入法对人参与林蛙油配伍的保健食品进行了体 外致突变效应初步探讨 , 为其保健食品开发利用提出科学 理论依据。 1 材料与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 试剂 人参与林蛙油配伍的保健食品 , 由本 实验室自制 ;敌克松、叠氮钠、二氨基芴、1, 8- 二羟基 蒽醌均购自 Sigma 公司 ;D- 生物素、L- 盐酸组氨酸购自 Fluka 公司 ;鼠伤寒沙门氏菌突变型菌株 TA97、TA98、TA100、TA102 和 S9 均购自上海启发实验有 限公司。 1. 1. 2 仪器 电热恒温培养箱、电热恒温水浴箱 , 均由上海基玮试验仪器设备有限公司产 ;立式压力蒸汽灭 菌仪(YXQ-LS-50G 型 ), 上海博迅实业有限公司医疗设备 厂产 ;METTLER TOLEDO-AB204-N 分析天平 , 上海产。 1. 2 方法 1. 2. 1 试验方法 依据保健食品安全性毒理学评 价程序和检验方法规范中介绍的平板掺入法进行试验。 试验设 5000、1000、200、40、8 g/ 皿 5 个剂量。取 g 受试物加二甲基亚砜至 50 ml 混均即为 5000 g/ 皿剂量 , 其余各受试物剂量 1/5 倍比递减稀释 ;上述受试液经灭菌 ( 时间 ：20 min,温度 ：121 , 压力 ： MPa) 后使用 ;另 设未处理对照、溶剂对照、阳性对照。在顶层琼脂中加入 ml 试验菌株增菌液、 ml 受试物溶液 , 代谢活化时加入 ml S9 混合液 ,混匀后倒入底层培养基平板上。37 , 培 养 48 h, 计数每皿回变菌落数。如果受试物的回变菌落数 是自发回变菌落数 2 倍以上 , 并具有剂量 - 反应关系者 则定为阳性。每个剂量做 3 个平行。整套试验在相同条件 下重复做 2 次并分别统计。 1. 2. 2 阳性对照 活化系统 TA97、TA98、TA100 采用二氨基芴 g/ 皿 , TA102 为 1, 8- 二羟基蒽醌 g/ 皿。非活化系统 TA97、TA98、TA102 为敌克松 g/ 皿 , TA100 为叠氮钠 g/ 皿。 1. 3 统计学方法 采用 统计学软件对数据进行统 计分析。计量资料以均数 标准差 ( x-s) 表示 , 采用 t 检验。 表示差异具有统计学意义。 2 结果 结果显示 , 将人参与林蛙油配伍的保健食品在鼠伤 寒沙门氏菌组氨酸营养缺陷型突变株 TA97、TA98、TA100、TA102 进行平板掺入试验 , 无论在 加和不加 S9 混合液时 ,85000 g/ 皿各剂量组均未引起 试验菌株的回复突变菌落数显著增加 , 与阴性对照组比较 差异无统计学意义 (P 溶剂对照组的菌落回变数与阴性对照 组相比差异无统计学意义 (P 阳性诱变剂诱发回变菌落数均 明显增加 , 与阴性对照比较差异有统计学意义 ()。 3 讨论 Ames 试验是国际上通用的遗传毒理学鉴定致突变的 必检项目之一。采用鼠伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型 菌株作为微生物 , 检测化学物的致突变性。人工诱变的鼠 伤寒沙门氏菌的组氨酸营养缺陷型菌株在其组氨酸操纵子 中有一个突变 , 突变菌株必需以来外源性组氨酸才能生长 , 在无组氨酸的选择性培养基上不能存活 , 诱变剂可使其基 因发生回复突变 , 使它在缺乏组氨酸的培养基上也能生长。 另外 ,Ames 试验在安全性评价方面具有举足轻重的作用 , 应在生物安全柜中操作及观察结果 , 注意严格无菌操作 , 以保证本次试验结果的可靠性。 本试验将人参与林蛙油配伍的保健食品与各标准菌 液混合后在最低营养板上培养 , 依据出现的回变菌落数及 致突变比值来判断其是否存在诱变物质。结果显示 , 在有 无 S9 的作用下 , 人参与林蛙油配伍的保健食品各剂量组 均未发现测试菌株回变菌落数超过阴性对照组回变菌落数 的 2 倍 , 且无剂量 - 反应关系 , 而阳性对照组各测试 菌株的回变菌落数均明显增加 , 并超过阴性对照组回变菌 落数的 2 倍以上 , 证实本实验条件下 , 鼠伤寒沙门氏菌 的组