中药制剂分析全套精品课件

更多医学精品 尽在医学吧 /rayshiu 本章学习要点 1、了解中药制剂的分类及中药制 剂分析的特点 2、熟悉中药制剂分析的一般程序 3、掌握中药制剂常用的定量分析 方法 一、定义 1、 中药制剂分析 以中医药理论为 指导 ，应用现代分析理论和方法，研究 中药制剂质量的一门应用学科。 第一节 概述 2、 中药制剂 以中医药理论为指 导 ，根据药典、制剂规范和其它规定 的处方，将中药的原料药物加工制成 具有一定规格，可以直接用于防病、 治病的药品。 二、 中药制剂分析的任务 （一）运用现代分析手段和方法（物理 学、化学、生物学和微生物学等），对 中药制剂的各个环节 （原料、半成品及 成品）进行质量分析。 目的 全面保证中药制剂质量 稳定、疗效可靠和使用安全。 （二）用现代科技手段，寻找测定 复方 制剂中的有效物质 ，研究符合中药分析 要求的定性、定量用对照品，采用更加 灵敏、准确、专属和快速的分析仪器和 方法，制定科学、规范的原料药材及中 药制剂的质量标准。 鞣质 地榆（止血） 其他（无药效） 有效 无效 1、 同一成分在不同药材中的药理作用不同 （一）中药制剂化学成分的多样性与复杂性 三、 中药制剂分析的 特点 五倍子 鞣质（ 70%） 槐米 芦丁（ 20%） 长春花 长春新碱（百万分之一） 美登木 美登木碱（千万分之一） 2、 各种有效成分在中药中含量相差悬殊 1、 中药市场混乱 同物异名 同名异物 （ 30多种，鳞毛蕨科、蹄盖蕨科、 紫萁科、乌毛蕨科） 贯众 （二）中药制剂原料药材质量的差别 同名异物现象严重： 重楼为百合 科 Paris polyphylla Smith. 的根茎又名七叶一枝花、蚤休、 草河车 。 拳参为蓼科 Polygonum bistra L.的 根茎又名 草河车 。 2、 中药材质量的不稳定性 生长环境、采收季节及部位差异 麻黄 东北 西北（ -）麻黄碱含量 （ +）麻黄碱含量 GAP 中药材生产质量管理规范 益母草 水苏碱 营养期含量最高 益母草碱 营养期含量最低 薄荷脑 秋季叶变黄时含量最高 丹参酮 11、 12月份含量最高 不同部位人参皂苷的含量 重量比 (%) 总皂苷含量 (%) 周皮 6.9 2.60 韧皮 46.6 3.04 木质部 46.5 0.31 （三）以中医药理论为指导原则，评价 中药制剂质量 按照中医理论的组方原则（君、臣 、佐、使），选取起主要治疗作用的药 物建立含量测定项目。同时也应考虑对 贵重药、毒性药的质量控制。 （四）中药制剂工艺及辅料的特殊性 1、 制剂工艺不同，有效成分的量也不同 例 三黄泻心汤干浸膏 有效成分与浓缩干燥方法的关系 (%) 常压 减压 逆浸透 成 分 浓缩 浓缩 喷雾 大黄酸葡萄糖苷 41.1 51.6 96.8 小檗碱 34.5 37.5 94.5 黄连碱 6.3 12.0 93.7 黄岑苷 77.4 77.6 98.5 丸、散、片、锭、合、酒、酊、 膏、露、茶、栓、颗粒、糖浆等 2、剂型繁多，辅料干扰大 蜡丸 蜂蜡 蜜丸 蜂蜜 糊剂 糯米粉、黄米粉 曲剂 发酵 胶剂 豆油、黄酒、冰糖 杂质来源 包括：药材中非药用部位 、泥砂、重金属、残留农药及霉变、虫 蛀、走油等产生的杂质。 （五） 中药制剂杂质来源的多途径性 成分复杂，而且大多数中药的有效 成分尚不十分清楚。 中药药效的发挥是 多种成分协同作用的结果，因此应从 整 体 上来控制中药的质量。 （六）中药制剂有效成分的非单一性 中药及其制剂的分类四、 中国药典（ 2000年版）一部（二十六种） 丸剂 胶剂 膏药 颗粒剂 滴眼剂 散剂 合剂 露剂 糖浆剂 软膏剂 片剂 酒剂 茶剂 滴丸剂 注射剂 锭剂 酊剂 搽剂 胶囊剂 滴鼻剂 栓剂 巴布膏剂 橡胶膏剂 气雾剂喷雾剂 煎膏剂（膏滋） 流浸膏剂与浸膏剂 （一） 中药材及其炮制品 中药材及其炮制品（饮片或提取物 等）是中药制剂的生产原料，是中药生 产过程中质量保证的首要环节。其质量 控制应严格按国家药品标准执行。 （二） 液体制剂 用药材提取物制备的液体制剂 合剂、糖浆剂、酒剂、茶剂、酊剂 滴鼻剂、滴眼剂、露剂、搽剂等 （无植物组织与细胞，故无显微鉴别） 1、 合剂与口服液 pH 装量 相对密度 微生物限度 一般检查项目 合剂系指药材用水或其他溶剂，采用 适宜方法提取，经浓缩制成的内服液体制 剂（单剂量合剂也可称为 “口服液 ”） 。 2、 酒剂与酊剂 酒剂 酊剂 含乙醇量（ GC） 甲醇量检查（ GC） 总固体 装量 微生物限度 一般检查项目 药材用蒸馏酒（白酒）提取制成 的澄清液体制剂 药物用规定浓度的乙醇提取或溶 解而制成的澄清液体制剂 3、 注射剂 pH 装量 相对密度 微生物限度 一般检查项目 合剂系指药材用水或其他溶剂，采用 适宜方法提取，经浓缩制成的内服液体制 剂（单剂量合剂也可称为 “口服液 ”） 。 （三） 半固体制剂 软膏 装量 微生物限度检查项目 常用基质 油脂性、水溶性 乳剂型（乳膏剂） 药物、药材细粉、药材提取物与 适量基质混合制成的半固体外用 制剂。 药材提取液的浓缩液 （四） 半流体制剂 煎膏剂 (膏滋 ) 流浸膏剂与浸膏剂（半流体或固体） （无植物组织与细胞，故无显微鉴别） 药材用水煎煮、去渣浓缩后，加炼 蜜或糖制成的半流体制剂 1、 煎膏剂 (膏滋 ) 相对密度 不溶物 装量 微生物限度 检查项目 应无焦臭、异味，无糖结晶析出 2、 流浸膏剂与浸膏剂（半 /固） 药材用适宜的溶剂提取，蒸去部 分或全部溶剂，调整浓度至规定标准 而制成的制剂。 装量 微生物限度检查项目 1ml流 浸膏 1g 原药材 1g 浸膏 2 5g 原药材 生产提取溶剂大多为水或稀醇， 检 测时一般需经有机提取后分析： （ 1）有效成分明确且有适当方法 ，测定 有效成分的含量 （ 2）有效成分不明或无定量方法的，可 测一定溶剂的浸出物含量 （ 3）对于流浸膏，有的测总固体量以控 制其质量 （四） 固体制剂 药材提取物、药材粉末加赋形剂、 制备而成。 丸剂、胶剂、颗粒剂、散剂、片剂、 胶囊剂、锭剂、胶剂、茶剂、栓剂 （有植物组织与细胞，可做显微鉴别） 1、 丸剂 指药材细粉或药材提取物加适宜的 黏合剂或其他辅料制成球形或类球形制 剂，分为蜜丸、水丸、水蜜丸、糊丸、 浓缩丸、蜡丸、微丸等。 检查项目 水分、重量差异 (按丸或重量 ) 装量差异 (按一次剂量分装的 ) 溶散时限、微生物限度 水分规定 大蜜丸、小蜜丸、浓缩蜜丸 15.0% 水蜜丸、浓缩水蜜丸 12.0% 水丸、糊丸、浓缩水丸 9.0% 装量差异 溶散时限 6丸，照崩解时限检查法 高 低瓶 ( ) %限量标示装量装量每袋 重量差异 第一法（按丸服用）每次最高丸数或每 丸（ 1.5g）， 10份 高 低 高 低 第二法（按重量服）每份 10丸， 10份 高 低 2、 散剂 一种或多种药材混合制成的粉末 状制剂，分内服和外用散剂。 检查项目 均匀度 水分 装量差异 微生物限度 均匀度 取供试品适量置光滑纸上，平 铺约 5cm2， 将其表面压平，在亮处 观察，应呈现均匀的色泽，无花纹 、色斑。 水分 9.0% 3、 颗粒剂 药材提取物与适宜辅料或药材细粉 制成的颗粒状制剂，分为可溶性颗粒剂 、混悬性颗粒剂、泡腾性颗粒剂。 检查项目 粒度 水分 溶化性 装量差异 微生物限度 粒度 1号筛 4号筛 8%(左右轻轻往返 3分钟 ) 溶化性 装量差异 多剂量包装 最低装量检查法 (附录 C) 平均装量 标示装量 每个装量 限量 % 溶化搅拌倍热水 52010g 单剂量包装 同丸剂 4、 片剂 药材提取物加药材细粉或药材细粉 与适宜辅料混匀压制而成的园片状或异 形片状的制剂，分为浸膏片、半浸膏片 和全粉片。 检查项目 重量差异 崩解时限 微生物限度 原粉片 30 浸膏片 1h 薄膜衣片 1h 5、 胶囊剂 硬胶囊剂 软胶囊剂 肠溶胶囊剂 检查项目 水分 装量差异 崩解时限 微生物限度 第二节 中药及其制剂分析 的一般程序 取样 鉴别 含量测定 检查 提取 纯化 记录、报告 供试品的制备 一、 取样 多采用 估计取样 ：将整批中药抽出一 部分具有代表性的供试样品进行分析、观 察，得出规律性 “ 估计 ” 的一种方法。 取样 有科学性、真实性和代表性，符 合均匀、合理的原则。 1、 中药材取样法 从同批药材包件中抽取样品，混 合均匀后采用 “ 四分法 ” 得到检验样品 。 2、 中药制剂取样法 各类中药制剂取样量至少够 3次检 测的用量，贵重药酌情取样。 （一） 提取方法 1、 萃取法 利用溶质在两种互不相溶的溶剂 中溶解度的不同，使物质从一种溶剂 转移到另一种溶剂中，将测定组分提 取出来的方法。 、 萃取法 供试品的制备二、 正丁醇 用于皂苷类 醋酸乙酯 用于黄酮类 氯仿 用于生物碱类 乙醚、石油醚 用于挥发油 （ 1）萃取溶剂的选择 （ 2）水相 pH的选择 酸性成分 比其 pKa低 12个 pH单位 碱性成分 比其 pKa高 12个 pH单位 （ 3）仪器和提取次数 （ 4）酒剂和酊剂 先挥去乙醇 （ 5）防止和消除乳化 分液漏斗 鉴别 1 次 含量测定 3 4 次 2、 冷浸法 样品置溶剂里，室温下浸泡一段时 间的提取方法 适宜易溶出的组分 适宜遇热不稳定的 药物 费时 （ 8 24小时） 特点 适用范围 适宜植物性粉末不宜动物性粉末 亲脂性 亲水性 石油醚 苯 氯仿 乙醚 乙酸乙酯 丙酮 乙醇 甲醇 水 3、 回流提取法 样品置有机溶剂中加热回流的提取 方法 加快溶出速度，省时 适宜受热稳定的药物 适宜较难溶出的组分 特点 仪器 普通回流装置 通过更换溶剂，使提取更完全 4、 连续回流提取法 样品置有机溶剂中加热，蒸发的 溶剂经冷凝流回样品管的提取方法 节省溶剂，提高提取效率 适宜受热稳定的药物 费时 特点 仪器 索氏提取器 A 普通 回流 装置 B 索氏 回流 装置 5、 水蒸气蒸馏法 适用于具挥发性的可随水蒸气蒸出 的组分的测定 麻黄碱、槟榔碱、丹皮酚、挥发油 6、 超声提取法 超声波振荡器 （超声波清洗器） 简便 省时 提取率高 利用超声波的助溶作用进行提取 原理： 超声波在液体中以疏密相间的形 式向物体辐射，出现 “ 空化 ” 现象（气 泡的形成、产生及破裂现象），形成超 过 1000个大气压的冲击力。 7、 超临界流体萃取 （ SFE法） 当压力和温度超过气体的临 界点时所形成的单一相态 超临界流体： 是一种处于超临界点之上 的流体，是介于气体与液体之间的一种 物相，兼有气体与液体的一些特性。 气体 超临界流体 气体 T 压力 T 压力 SFE 工艺流程 超临界流体萃取与化学法萃取相比有以 下突出的优点： （ 1） 它具有与液体相似的密度，因而具 有与液体相似的较强的溶解能力； （ 2）溶质在流体中的扩散系数与气体相 似，具有传质快，提取时间短的优点； （ 3）超临界流体的表面张力为零，易渗 透到样品中，带走测定组分； （ 4）超临界流体在通常状态下为气体， 萃取后溶剂可立即变成气体而逸出，易 达到浓集的目的； （ 5） CO2是一种不活泼的气体 , 萃取过程 不发生化学反应 ,且属于不燃性气体 ,无味、 无臭、无毒，故安全性好； （ 6） CO2价格便宜，纯度高，易取得，且 在生产过程中循环使用，从而降低成本； （ 7）该技术易与其他仪器联用实现自动化 （二） 纯化方法 1、 萃取法 利用药物与杂质溶解性能的不同进 行分离 例 生物碱盐 氨水 H2O 2、 柱色谱法 （ 1）保留测定组分在柱上，洗去杂质， 再用适当溶剂洗下组分 （ 2）保留杂质于柱上 常用固定相 硅胶 氧化铝 大孔吸附树脂 鉴别试验三、 黄连 小檗碱（抗菌消炎） 麻黄 麻黄碱（支气管哮喘） 乌头 乌头碱（毒性） 洋地黄 强心苷（强心） 延胡索 延胡索乙素（镇痛） 鉴定有临床疗效的已知成分 （一） 显微鉴别 （含生药粉制剂） 丸剂、片剂、胶囊剂、散剂 快速，简便，覆盖面大 选择原则 1、应选有专属性的特征进行鉴别 2、多来源的药材应选择共有的特征进 行鉴别 1、水牛角浓缩粉 2、麝香 3、珍珠 4、朱砂 5、雄黄 6、黄连 7、栀子 8、郁金 9、黄芩 安宫牛黄丸 （二） 化学鉴别 抗干扰能力差 显色、 、 、荧光 例 二妙丸中苍术的鉴别 苍术酮 苍术炔 试剂组分 褪色醚层样品 乙醚 4KMnO （三） 色谱鉴别 TLC法 应用最多 （ Rf、 颜色、荧光） GC法 适用于含挥发性成分的 药物 HPLC法 常与含量测定同时进行 阴、阳对照法 阳性对照 将要鉴别的药材按制剂工 艺处理，再按鉴别方法提 取的溶液 阴性对照 把制剂中要鉴别的药材除 去，用剩下的各味药按制 剂工艺处理，再按鉴别方 法提取的溶液 OO O O O O O O O O O 阴 样 阳 对 品 对 例 大补阴丸 黄柏的 TLC法鉴别 样 品 对照 药材 小 檗 碱 O O O O O 例 薄层板的选择： 硅胶 G板（可加 0.30.5% 的 CMC-Na） 多用 氧化铝板 常用于生物碱类药物 聚酰胺板 常用于黄酮类及酚类药物 纤维素板 常用于氨基酸类药物 定义： 中药材或中药制剂经适当处理后 ，采用一定的分析手段，得到的能够标 定该中药材或中药制剂特性的共有峰的 图谱。 （四）中药鉴别新技术中药指纹 图谱 2、色谱指纹图谱的基本属性 整体性 将指纹图谱作为一个整体来 分析和比较它的综合特征以达到鉴别的 目的。 模糊性 强调分析、比较指纹图谱的 相似性，而不是完全相同。 是一种综合的、量化的色谱鉴别手段 。 色谱指纹图谱在中药质量评价中能色谱指纹图谱在中药质量评价中能 够尽可能多地反应中药的全貌。够尽可能多地反应中药的全貌。 不需要清楚每一个组分的化学结构不需要清楚每一个组分的化学结构 ；不需要对每一个组分都进行定量；只；不需要对每一个组分都进行定量；只 要求不同批号的同一种药品的指纹图谱要求不同批号的同一种药品的指纹图谱 保持一致。保持一致。 3、指纹图谱的应用 味莲 雅莲 云莲 I IIIII 诃 子 小诃子 大诃子 绒毛诃子 人参须根 人参主根 不同产地高良姜的气相指纹图谱 指纹图谱研究过程中的 注意事项 ： 1、在药效学指导下进行研究，保证指 纹图谱反映的化学成分包括中药材中 有效部位所含的绝大部分成分或有效 成分的全部。 2、样品的预处理过程及测定方法应简 便、经济、易行，且专属性、准确度 与重现性好。 杂质检查四、 主要项目 水分 总灰分和酸不溶性灰分 重金属 砷盐 残留农药 杂质来源及检查意义 水分 结块、霉变或有效成分水解 灰分 控制药物本身及泥土、沙石 等无机杂质 砷盐 剧毒，常由除草剂、杀虫剂 或化肥引入 重金属 环境污染和使用农药引入 残留农药 有毒 杂质限量计算方法 杂质限量 杂质最大允许量 样品量 100 V C S 100% L = V: 标准溶液的体积 C: 标准溶液的浓度 S:样品量 烘干法 （不含或少含挥发性成分） 甲苯法 （含挥发性成分） 减压干燥法 （含挥发性成分贵重药） GC法 （一） 水分测定法 酸不溶性灰分的测定 总灰分的测定 （二） 总灰分和酸不溶性灰分的测定 灰化恒重 炭化供试品 已恒重坩埚 600500 炭化灰化 过滤总灰分 已恒重坩埚HCld WHO规定植物药 铅 10ppm 镉 0.3ppm 干法破坏 湿法破坏 硫代乙酰胺法 （三） 重金属的测定 干法破坏（ ChP） 湿法破坏（ USP） (调到中性 ) 灰化炭化供试品 低温 600500 3HNO 蒸干蒸干第一法 HClOH2 第一法消化供试品 凯氏烧瓶 O 碱融法破坏 湿法破坏 碱融法 （四） 砷盐的测定 法 古蔡氏法供试品 有机破坏 DDCAg - H+ ( ) 灰化炭化供试品 6005002 OHCa +3 4AsO （五） 残留农药的测定 1、 总氯量的测定 2、 总磷量的测定 3、 GC法 中国药典中药制剂含量测定所占比例 版本 % 1977 1.48 1985 5.31 1990 8.73 1995 12.81 2000 62.09 （ HPLC 36% TLCS 24% GC 3%) 含量测定项目的选定五、 测定项目的选定原则 1 首选君药及贵重药、剧毒药建立 含量测定方法 2 其次考虑臣药及其他味药 3 有效成分明确的，可选有效成分 4 成分类别清楚的，可测某一类总 成分的含量 5 检测成分应归属某单一药味 6 检测成分应与中医用药的功能主 治相近 7 确无法含量测定的，可测定浸出 物含量 化学分析法 色谱法 常用定量方法 分光光度法 （一） 化学分析法 重量分析法 容量分析法 特点 A、 准确度、精密度高 B、 抗干扰能力差 例 过滤 HCl残渣滤液样品 乙醇 D OHNH 23乙醚恒重称重 D 昆明山海棠片 （二） 分光光度法 UV法 比色法 特点 A、 灵敏度高 B、 简便、快速 C、 精密度稍低 D、 干扰多 小檗碱 nm,max 360350345=l 芦丁 nm,max 359299266259=l 黄芩苷 nm,max 314271240=l 丹皮酚 nmmax 274=l （三） TLCS法 测定薄层板上斑点对单色光的吸 收或反射的强度而进行定量的方法 特点 A、 分离效果好 B、 适用于无法用 UV、 HPLC 法测定的组分 C、 准确度、精密度低于 HPLC 2000年版中国药典（ 2000年版） 薄层扫描法品种 品种数量 TLCS数量 占总数 % 534（药材） 20 3.74 458（成药） 32 6.99 978（总数） 52 10.73 1、 选择测定条件 （ 1）薄层色谱条件 分离好 不拖尾 （ 2）检测方法 吸收测定法 荧光测定法 反射法 透射法 （ 3）扫描方式 单波长 双波长 线性扫描法 锯齿扫描法 外标法 内标法 （ 4）散射参数 SX 薄层板的散射使 Kubelka-Munk方程 ECLA （ 1）薄层板 均匀、平整 2、 注意事项 （ 2）点样量 准确 （ 4）显色剂 均匀、适当 （ 5）保护斑点 用相同大小洁净玻璃盖住 薄层板，并用透明胶纸封住边缘，以起固 定和隔绝空气作用 （ 3）斑点 应完全分离，不拖尾 样 样 对 对 样 样 对 对 样 样 对 对 低 高 低 高 低 高 外标法（两点校正法） （四） HPLC法 RP - HPLC 色谱柱 ODS 流动相 甲醇 - 水 PIC 反离子 氢氧化四丁基铵 色谱柱 RP - PIC 反离子 烷基磺酸盐 无机阴离子 外标法和内标法 2000年版中国药典（ 2000年版） HPLC法品种 品种数量 HPLC数量 占总数 % 534（药材） 54 10.11 458（成药） 48 10.48 978（总数） 102 20.59 应用实例 -小青龙合剂 处方 麻黄 125g 桂枝 125g 白芍 125g 干姜 125 五味子 125g 细辛 62g 甘草 (蜜炙 ) 法半夏 188g NOTES： 合剂是在传统汤剂基础上改进 后的一种新剂型 生物碱 桂皮醛 芍药甙 挥发油 三萜皂甙 应用实例 -小青龙合剂 制法 以上八味，细辛、桂枝提取挥发油， 蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与白芍、麻黄 、五味子、甘草加水煎煮至味尽，合并煎液， 滤过，滤液和蒸馏后的水溶液合并，浓缩至约 1000ml。 法半夏、甘姜照流浸膏剂项下渗漉 法，用 70%乙醇作溶剂，浸渍 24小时后进行 渗漉，漉液浓缩，与上述药液合并，静置，滤 过，滤液浓缩至 1000ml， 加入苯甲酸钠 3g与 细辛、桂枝挥发油，搅匀，即得。 性状 本品为棕黑色的液体；气微香 ，味甜、微辛。 功能与主治 解表化饮，止咳平喘。 用于风寒水饮，恶寒发热，无汗，喘 咳痰稀。 用法与用量 口服，一次 10-20ml， 一 日 3次，用时摇匀。 方药分析： 君 麻黄 发汗为君 臣 桂枝 解表为臣 佐 甘草 恐发汗太过 , 佐以甘草缓之 使 白芍、干姜、细辛、法半夏、五 味子 几药合力共为使。 本方可外发汗，内行水，散表里之邪。 汉代张仲景 伤寒论 小青龙汤 近代由重庆桐君阁中药厂该汤剂为合剂 本方治疗伤寒表不解，心下有水气 ，干呕，发热而咳。近代也用于慢性支 气管炎，支气管哮喘、肺气肿，均见咳 、喘、痰白清稀者。 供试品溶液与阴性对照液的制备： 取合剂 10 ml， 石油醚分 3次萃取， 合并石油醚萃取液 油层 ，浓缩至 1ml， 为 供试品溶液 A； 水层 用 Na2CO3调 PH11-12， 用氯仿萃取 ，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，残 渣用 1ml甲醇溶解，为 供试品溶液 B； NOTES： 阴性对照液 如上法同步进行 。 1、桂皮醛的鉴别 取供试品液 A、 阴性对照液、桂皮醛 对照液（ 1ug/ml） 15ul， 点于同一硅胶 G 板上，环己烷 -乙酸乙酯（ 17： 3）展开， 晾干，喷 2， 4 二硝基苯肼乙醇 T.S， 供 试品 A与对照品在相应位置上显相同的橙 色斑点，而阴性对照液无此斑点。 2、细辛挥发油的鉴别 取供试品液 A、 阴性对照液、细辛挥 发油对照液（ 1： 10乙醚液） 5ul， 点于同 一硅胶 G板上，环己烷展开，晾干，喷 10%香草醛浓硫酸 T.S， 加热至显色，供 试品 A与对照品在相应位置上显相同的粉 红色斑点，而阴性对照液无此斑点。 3、麻黄碱的鉴别 取供试品液 B， 阴性对照液，麻黄碱 对照品液（ 1mg/ml） 各 5ul， 点于同一 硅胶 G， 氯仿 -甲醇 -浓氨水（ 20： 5： 0.5 ）展开，晾干，喷茚三酮 T.S， 加热至斑 点显色，供试品 B与对照品在相应位置 上显相同的蓝紫色斑点，而阴性对照液 无此斑点。 取合剂 5ml， 上聚酰胺柱， DW洗 脱，洗脱液水浴浓缩至干，用 1ml甲醇 溶解，为供试品溶液 C； 聚酰胺柱再用 95%乙醇洗脱，弃取 洗脱液，用 3M氨乙醇液洗脱，收集洗 脱液水浴蒸干， 1ml甲醇溶解，为供试 品溶液 D。 4、芍药甙的鉴别 取供试品液 C、 阴性对照液、芍药甙 对照液（ 1mg/ml） 10ul， 点于同一硅胶 G板上，氯仿 -乙酸乙酯 -甲醇 -冰醋酸 -甲 酸（ 8： 1： 2： 0.04）展开，晾干，喷 10%硫酸乙醇液，加热至显色，供试品 C与对照品在相应位置上显相同的紫色 斑点，而阴性对照液无此斑点。 5、甘草酸的鉴别 取供试品液 D、 阴性对照液、甘草酸 铵对照液（ 2mg/ml） 2ul， 点于同一硅胶 G板上，乙酸乙酯 -甲酸 -冰醋酸 -蒸馏水（ 30： 2： 2： 4）展开，晾干，喷 10%硫酸 乙醇液，加热至显色， UV灯 365nm观察 ，供试品 D与对照品在相应位置上显相同 的紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。 含量测定 HPLC法测定芍药甙的含量 仪器与色谱条件 BECKMAN 332型高效液相色谱仪 163型可变波长紫外检测仪， 220nm 427型记录及数据处理仪 色谱柱为 YWGC18 流动相乙腈 -水（ 15： 85） 标准曲线制备 精密称取芍药甙 5.08mg， 溶 于水至 50ml量瓶中，定容，分别吸取 0.50、 1.00、 1.50、 2.00ml于 10ml量瓶中定容。 回收率测定 精密吸取除去白芍制成的合剂 （ 即阴性对照液 ） 0.3ml与适量芍药甙对照品 液，通过 0.5g聚酰胺柱，用水洗脱至 50ml量 瓶中至刻度，依前述条件测定，平均回收率 为 99.42%， RSD为 0.23%（ n=3）。 样品测定 取自制小青 龙合剂摇匀，用 滤纸过滤，精密 吸取 0.3ml滤液 通过聚酰胺柱， 以不同回收率测 定条件进行测定 。 分析实例 万氏牛黄清心丸 处方 牛黄 10g 朱砂 60g 黄连 200g 黄芩 120g 栀子 120g 郁金 80g 制法 以上六味，除牛黄外，朱砂水 飞或粉碎成极细粉；其余黄连等四味粉 碎成细粉；将牛黄研细，与上述粉末配 研，过筛，混匀。每 100g粉末加炼蜜 100-200g制成大蜜丸，即得。 性状 本品为红棕色至棕褐色的大蜜丸 ；气特异，味甜、微涩、苦。 功能主治 清热解毒，镇惊安神。用于 热邪内闭，烦躁不安，神昏谵语，小 儿高热惊厥。 方药分析 本方来源于明 .痘疹世医 心法 ，本方为清心开窍剂，主治热 邪内陷心包所致窍闭神昏症。 方中牛黄，清心解毒，豁痰开窍为 君药；黄连、黄芩、栀子清热泻火，为 臣药；朱砂清心，重镇安神，郁金行气 开窍共为佐使药，合用以奏透邪泻热， 开窍安神之效。 方药分析 牛黄 清热解毒药，主含胆酸类成分。 黄连 清热燥湿药，主要为小檗碱。 黄芩 清热燥湿药，主要为黄酮类。 栀子 清热泻火药，主含栀子甙。 朱砂 安神药，主含硫化汞（ HgS）。 郁金 活血去瘀药，主含挥发油。 鉴 别 q 显微鉴别 郁金 糊化淀粉团块几乎无色。 栀子 种皮石细胞。 黄芩 纤维淡黄色，梭形，厚壁，孔沟细胞 黄连 纤维鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显。 朱砂 不规则块状物或颗粒状物，暗红棕 色、鲜红色或棕黄色。 郁金 糊化淀粉团 块 栀子 种皮石细胞 黄芩 纤维 黄连 纤维 朱砂 不规则块状 物或颗粒状物，暗 红棕色、鲜红色或 棕黄色 q 化学鉴别 1、朱砂的鉴别 取本品 3g， 加水适量，研匀，反复洗 去悬浮物，可得少量朱红色沉淀，取出， 加入盐酸 1ml及铜片少量，加热煮沸，铜 片由黄色变为银白色。 HgS + 2HCl + Cu CuCl2 + Hg + H2S 2、人工牛黄的鉴别 取本品，剪碎，加硅藻土 0.6g， 研匀 ，加氯仿 10ml、 冰醋酸 0.5ml， 加热回流 30min,放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加 乙醇 2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品 溶液。 胆酸和猪去氧胆酸加乙醇制成 1ml含 1mg的混合溶液，作为对照品溶液。 TLC法 CMC-Na， 硅胶 G 展开剂 醋酸乙酯 -正己烷 -醋酸 -甲醇 （ 32:6:1:1） 显色剂 10%磷钼酸乙醇液， 1100C,10min 人工牛黄 供试品 牛黄空白 猪去氧胆酸 胆酸 3、黄芩的鉴别 供试品溶液的制备：取本品 3g， 剪 碎，加硅藻土 0.5g， 研匀，加甲醇 20ml ， 加热回流 1hr,放冷，滤过，滤液作为 供试品溶液。 对照品溶液的制备：黄芩甙对照品 加甲醇制成每 1ml含 1mg的溶液，作为对 照品溶液。 TLC法 CMC-Na， 硅胶 G （ 4%醋酸钠） 展开剂 醋酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水 （ 5:3:1:1） 显色剂 2%三氯化铁乙醇液 使 斑点更为集中 -OH与 Fe+3络 合 黄芩甙 供试品 黄芩空白 4、栀子的鉴别 供试品溶液的制备：取本品 3g， 加 乙醚 15ml， 研磨，弃去乙醚。残渣挥干 乙醚，加醋酸 乙酯 30ml， 加热回流 1hr, 放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇 3ml 溶解，滤过， 滤液作为供试品溶液。 对照品溶液的制备：栀子甙对照品 加甲醇制成每 1ml含 1mg的溶液，作为对 照品溶液。 TLC法 CMC-Na， 硅胶 G 展开剂 醋酸乙酯 -丙酮 -甲酸 -水