【毕业学位论文】（Word原稿）柑橘木虱及其高毒力病原真菌生物学特性研究

i 分类号： 单位代码： 10389 密 级： 学 号： 1091514 福建农林大学硕士学位论文 柑橘木虱及其高毒力病原真菌 生物学特性研究 学 科 门 类：农学 一级学科名称：植物保护 二级学科名称：农药学 研 究 方 向：生物农药与仿生农药 研 究 生： 陈建利 指 导 教 师：关雄 教授 刘波 研究员 完 成 时 间：二 O 一二年 二 月 o 2011 创性声明 本人声明，所呈交的学位（毕业）论文，是本人在指导教师的指导下独立完成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位（毕业）论文的规定，即学校有权送交论文的复印件，允 许论文被查阅和借阅 ; 学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在 年后解密可适用本授权书。 不保密，本论文属于不保密。 学位（毕业）论文作者亲笔签名： 日期： 指导教师亲笔签名： 日期 i 目录 目录 . i 中文摘要 . I . 一章 前言 . 1 1 柑橘木虱及其防治的重要性 . 1 橘木虱的形态学研究 . 1 橘木虱的分布 . 2 橘木虱的寄主 . 2 橘木虱的危害性及防治的重要性 . 2 2 柑橘木虱防治现状 . 3 业措施对柑橘木虱 的防治 . 3 物源农药对柑橘木虱的防治 . 3 学农药对柑橘木虱的防治 . 4 物农药对柑橘木虱的防治 . 5 物源农药对柑橘木虱的生物防治 . 5 虫天敌对柑橘木虱的生物防治 . 6 生物源农药对柑橘木虱的生 物防治 . 7 3 真菌杀虫剂的研究概况 . 8 菌杀虫剂在微生物防治中的地位 . 8 菌杀虫剂的研究现状、瓶颈和前景 . 8 菌杀虫剂的研究现状 . 8 菌杀虫剂的研究瓶颈、对策及发展前景 . 10 4 研究目的及意义 . 12 第二章 柑橘木虱形态、行为及趋性研究 . 13 1 引言 . 13 2试验材料和方法 . 13 验材料 . 13 源与寄主 . 13 试柑橘品种嫩梢 . 13 法 . 14 长期一致柑橘木虱的获得 . 14 橘木虱的形态特征和行为观察 . 14 橘木虱在两种寄主间趋性试验 . 14 橘木虱在多个寄主间趋性试验 . 14 据分析 . 15 3试验结果 . 15 橘木虱形态特征 . 15 . 15 虫 . 15 虫 . 16 橘木虱的行为观察 . 17 动 . 17 食 . 17 配 . 17 化 . 17 橘木虱在 2 个柑橘品种间的趋性 . 18 橘木虱在多个柑橘品种间的趋性 . 18 4 讨论 . 19 第三章 柑橘木虱的 过冷却点测定 . 22 1引言 . 22 2试验材料及方法 . 22 验虫源 . 22 要试剂和仪器 . 22 验方法 . 22 橘木虱成虫过冷却点和结冰点测定 . 22 橘木虱水分含量测定 . 23 橘木虱糖类含量测定 . 23 橘木虱氨基酸含量测定 . 24 3 试验结果 . 24 冷却点与结冰点的测定 . 24 个月份温室内及温室外的柑橘木虱成虫过冷却点及结冰点频数分布 24 个月份温室内及温室外的柑橘木虱成虫过冷却点及结冰点方差分析 27 012 年 2 月份温室内外柑橘木虱含水量 . 28 012 年 2 月份温室内外柑橘糖类含量的测定 . 29 萄糖标准曲线制作 . 29 012 年 2 月份温室内外柑橘糖类含量的测定 . 29 橘木虱成虫体氨基酸含量变化 . 30 4 讨论 . 31 第四章 高毒力病原真菌的分离、筛选与鉴定 . 32 1 引言 . 32 2 材料与方法 . 32 料 . 32 试材料 . 32 源与寄主 . 32 养基 . 32 学试剂与仪器 . 32 法 . 33 橘木虱病原真菌的分离、纯化与保存 . 33 橘木虱病原真菌的初步筛选 . 33 橘木虱病原 真菌的鉴定 . 33 3 结果与分析 . 34 橘木虱病原真菌的分离、纯化与保存 . 34 橘木虱病原真菌的筛选 . 35 橘木虱病原真菌真菌的鉴定 . 36 橘木虱病原真菌的分子鉴定 . 39 4 讨论 . 40 第五章 高毒力病原真菌的生物学特性研究 . 42 1 前 言 . 42 2 材料与方法 . 42 料 . 42 试菌株 . 42 养基 . 42 要试剂及仪器 . 43 验方法 . 44 橘木虱病原真菌对柑橘木虱成虫致病力的复筛 . 44 落生长速率 . 44 孢量及孢子萌发率测定 . 44 原真菌胞外蛋白酶活性测定 . 45 原真菌胞 外几丁质酶活性测定 . 45 原真菌胞外脂肪酶活性测定 . 46 据处理 . 47 3 试验结果 . 47 原真菌的生长速率 . 47 原真菌的产孢量及孢子萌发率 . 48 原真菌胞外蛋白酶活性测定 . 49 原真菌胞外几丁质活性测定 . 50 原真菌胞外脂肪酶活性测定 . 52 4 讨论 . 53 第六章 高毒力病原真菌的抗逆性 . 54 1 引言 . 54 2 材料与方法 . 54 料 . 54 株 . 54 要试剂和仪器 . 55 法 . 55 子液的配置 . 55 原真菌分生孢子的抗旱能力测定 . 55 原真菌分生孢子的抗紫外能力测定 . 55 度对菌落生长速率的影响 . 55 度对不同病原真菌对柑橘木虱致病力的影响 . 55 度对不同 病原真菌对柑橘木虱致病力的影响 . 55 3 试验结果 . 56 原真菌分生孢子抗旱能力 . 56 同紫外照射时间下病原真 菌孢子萌发率 . 57 同温度对病原真菌生长速率的影响 . 58 同温度下病原真菌对柑橘木虱的致病力 . 60 同湿度下病原真菌对柑橘木虱的致病力 . 61 4 讨论 . 62 七章 结论与展望 . 63 参考文献 . 65 个人简历 . 70 致 谢 . 72 I 中文摘要 本研究从福建省福州市西湖公园采集柑橘木虱成虫作为虫源，在福建省农科院农业生物资源所微生物研究中心人工气候室内，以九里香盆栽苗为寄主 建立柑橘木虱种群，在此基础上对温室内柑橘木虱的形态 、行为 进行了研究及验证，并在室内测定了柑橘木虱对不同柑橘品种的趋性 ，测定了柑橘木虱的过冷却点及耐寒生化物质 。在柑橘木虱野外生境及成虫尸体上分离筛选得到了 7 株柑橘木虱病原真菌，对这 7 株病原真菌进行形态学和分子生物学的鉴定，并对 4 株对柑橘木虱成虫致病力较强的菌株的生物学特性及抗逆性进行了研究。主要的结论如下： （ 1）在 视显微镜下观察柑橘木虱的卵和若虫的形态特征，并测量卵及各龄若虫体长，发现柑橘木虱的卵芒果状，顶端尖细，末端钝圆，长 虫随着虫龄的增大，体色加深，体型增大， 温室内从卵到羽化约 17d 左右， 对成虫形态特征和成虫的交尾、产卵、羽化、取食等行为进行观察。采用柑橘木虱对 2 种寄主的选择试验和对多个寄主的选择性试验 2种方法 来测定柑橘木虱成虫对 13个不同柑橘品种的趋性，结果表明柑橘木虱成虫对纽荷尔脐橙、福橘、 现出较高的趋性。 （ 2）对 柑橘木虱的过冷却点测定表明， 柑橘木虱 成虫的过冷却点可达到 至 ，表现出柑橘木虱相当强的耐寒能力 ，同时温室外低温胁迫能迫使柑橘木虱调节自身生化物质降低过冷却点。对温室内外过冷却点存在差异的柑橘木虱成虫生化物质分析表明，结合水，海藻糖及氨基酸组成柑橘木虱的抗寒性物质，过冷却点的降低起到重要的作用。 （ 3）从柑橘木虱的生境及死亡虫体上分离筛选得到 7 株对柑橘木虱成虫有致病力的菌株分别为 7 株菌株对柑橘木虱的致死率分别为 40%、 100%、 100%、 100%。通过形态学和分子生物学鉴定得到，菌株 球孢白僵菌 ，菌株 株 蜡蚧轮枝菌。 （ 4）对筛选得到的 4 株对柑橘木虱成虫致病力较高的菌株进行生物学特性研究，结果表明， 养基上生长的菌株生长速率、产胞量及孢子萌发率 总体优于其他两种培养基，测定了 4 株菌株的胞外蛋白酶、胞外几丁质酶、胞外脂肪酶，并对这三种酶的产量与对柑橘木虱成虫的致病力进行相关分析表明，胞外蛋白酶和胞外几丁质酶与柑橘木虱的校正死亡率呈极显著相关，而胞外脂肪酶与橘木虱的校正死亡率呈显著相关。 （ 5）对筛选得到的 4 株对柑橘木虱成虫致病力较高的菌株进行抗逆性研究。采用不同浓度的 拟干旱条件，结果表明 4 株病原真菌的孢子萌发率随着 度的增大而下降明显，孢子萌发受到明显抑制；在 254外下照射不同的时间，测定紫外对 4 株菌株孢子萌发的影响 ，结果表明，紫外严重影响了菌株孢子活力，照射 10，孢子活力全部散失；在不同温度下测定 4株病原真菌的菌落生长速率及对柑橘木虱成虫的致病力，结果表明， 4 株菌株的最适生长温度温 25 ，与 25 病原真菌对柑橘木虱成虫的致病力最大相一致；在不同相对湿度下测定了 4 株柑橘木虱病原真菌对柑橘木虱成虫的致病力，结果表明，随着湿度的下降， 4 株菌株对柑橘木虱的致病力也急剧下降，在