hplc测定颈复康颗粒中葛根素含量

HPLC 测定颈复康颗粒中葛根素含量 任丽娜 赵玉佳（指导教师） 郭强（修改教师） (牡丹江医学院药学院 07 级制药工程专业 黑龙江 牡丹江 157011) 【摘 要】目的：采用 HPLC 法简便、快速、准确测定颈复康颗粒中葛根素的含量。方法： 采用 HPLC 法测定颈复康颗粒中葛根素的含量测定方法。选择色谱柱、流动相、流速、检测 波长等色谱条件建立高效液相色谱法测定颈复康颗粒中葛根素含量。结果：平均回收率为 99.90%，RSD 为 1.29%。理论板数按葛根素峰计算应不低于 2000。线性范围为在不小于 0.80mg，葛根素的微克数与峰面积积分值成良好的线性关系。结论：结果表明本方法操作 简便、准确，可用于颈复康颗粒中葛根素的测定。 【关键词】：颈复康颗粒；葛根素；高效液相色谱法 Abstract Objective :To establish the determination of puerarin in Jingfukang Granules by HPLC. Methods:In this method ODS C18 column was used , methanol-water(25:75) was used as a mobile phase .The detection wave-length was at 344nm. Result:The detection range was0.80mg at least . There was a good linear relationship between consistence and apex-area. The regress equation was Y=8146351.67X+15417.27. The recovery of the added sample was 99.90%，And RSD is1.29%. Conclusion :This method was simple and the result was reliable. Key wordsJingfukang Granules; puerarin; HPLC 葛根为豆科植物野葛puerarin lobata(wild) Ohwi或甘葛藤(P.thomsonii Benth)的干燥根。 含丰富的异黄酮类化合物，主要成分是葛根素(Puerarin) ，化学名为 7,4-二羟基-D-葡萄 糖基异黄酮。葛根素具有调节心肌功能，抗心肌缺血，扩张血管，抗高血压，降血糖、血 脂等功效 1。颈复康颗粒为非处方药药品，收载于中华人民共和国药典2005版一部 2 。颈 复康颗粒是纯中药制剂，由葛根、羌活、乳香、没药、地龙、土鳖虫、丹参、川芎、白芍 等22味药物组成。具有益气养血，活血通络，祛风止痛之功能，用于颈椎骨质增生引起的 脑供血不足，头晕，头痛，颈项僵硬，肩臂酸痛，手臂麻木等症 3-5。随着应用的进展，目 前已用于治疗多种疾病，并取得了很好效果。颈复康颗粒是在颈复康冲剂主要成分及生药 量不变的基础上，对生产工艺进行较大改革，采用喷雾干燥、干法造粒、挥发油等先进技 术生产出的复方中药制剂 6。 颈复康颗粒是在颈复康冲剂的基础上改变剂型而制得的，处方中葛根的有效成分为葛 根素、大豆苷和大豆苷元等异黄酮类化合物 7。为有效地控制其药品质量，保证临床用药 效果，有人对其进行定性与定量分析研究 8。葛根药材及其中成药、制剂中葛根素含量的 测定方法主要有：紫外分光光度法、荧光薄层扫描法和高效液相色谱法(HPLC)等。其中 HPLC法集分离与检测于一体，用于药品中葛根素含量的测定具有快速准确、样品处理简 单等优点。本文采用了HPLC法，此方法简便，灵敏，重现性好，准确度高，适用于本品 质量控制中的主药含量测定和有关物质检查。本实验结果表明，该方法分离好，灵敏度高， 准确、快速，方法简便，可作为质量控制指标之一。 1 材料 高效液相色谱仪 Shimadzu LC2010HT（日本岛津）电子天平 FA2004N （上海精密科学 仪器有限公司）超声波清洗器 HS3120（天津市恒奥科技发展有限公司）色谱甲醇（天津市 大茂化学试剂厂）颈复康颗粒（国药准字 Z13022204 承德颈复康药业集团有限公司） 葛根素对照品（中国药品生物制品检定所） 2 方法 2.1 含量测定 2.1.1 最大吸收波长的选择 精密吸取葛根素 (0.2mg/mL)对照品溶液 1mL，置 10mL 量瓶中加甲醇稀释至刻度，用紫外 可见分光光度计，从 200-400nm 全波长扫描，葛根素最大吸收波长为 250nm。 2.1.2 色谱条件 色谱柱：YMC-C18 柱(4.6mm150mm,5um，大连依利特科学仪器有限公司)；柱温：室温； 流动相：甲醇水(25：75)；流速为 1mL/min；检测波长：250nm；进样量：20uL。理论板 数按葛根素峰计算应不低于 2000。 2.1.3 供试品溶液的制备 精密称定本品 0.5g，研细，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 25ml，密塞，精密加甲醇 25mL，超声（功率 30W）提取 30min，放冷，再测定体积，用甲醇补足减失的重量，摇匀， 取上清液，滤过，取滤液，即得。 2.1.4 标准曲线制备 精密称取葛根素对照品 10mg 置 50mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。从上述 溶液中依次精密吸取 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于 10mL 量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，分别精密吸取上述对照品溶液 20ul 注入液相色谱仪中，按上述条件测定峰面 积。以对照品溶液微克数 x 为横坐标，峰面积积分值 Y 为纵坐标绘制标准曲线，计算回归 方程为：Y=8146351.67X+15417.27 ，r=0.9997。表明葛根素在不小于 0.80mg 范围内微克 数与峰面积积分值成良好的线性关系。标准曲线见图 1。 15900000 15950000 16000000 16050000 16100000 16150000 16200000 16250000 1.95 1.96 1.97 1.98 1.99 系 列 1 图 1 葛根素标准曲线 2.2 方法可行性考察 取葛根素对照品溶液，颈复康颗粒供试品溶液在上述色谱条件下进行测定，结果见 图 2 和图 3 。由图可知，葛根素的峰形对称，分离效果良好。 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 min 0 500 mV Detector A:250nm 5.8 03 图 2 葛根素对照品图谱 0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 min 250 mV Detector A:250nm 1.216 2.008 5.822 12.901 22.691 38.194 图 3 颈复康颗粒图谱 2.2.1 精密度实验 精密吸取同一供试品溶液 20uL，重复进样 5 次，测得葛根素峰面积， RSD 为 0.65%(n=5)。测定结果表明，精密度良好。 2.2.2 重复性实验 取同一批已知含量的样品 5 份，按 2.1.3 项下操作制备样品溶液，依法测 定，测得葛根素峰面积值并计算含量，RSD 为 0.71%。 2.2.3 稳定性试验 对于同一批供试品溶液，按含量测定方法，连续 6 次进样，每次间隔 2h ，测定葛根素峰面积，RSD 为 0.35%。结果表明供试品溶液在 12h 内稳定性良好。 2.2.4 样品含量测定 取 5 批样品，各取 0.5g，精密称定，分别按 2.1.3 项下操作制备样品溶 液，分别进样，测定峰面积，计算 5 批样品中葛根素的含量，结果见表 3。 批号 含量（mg/g） 090730 0.8828 091078 0.8726 091079 0.8974 090619 0.8713 090715 0.8826 表 3 样品中葛根素含量测定结果 根据上述测量数据及大生产实际情况综合考虑，我们制定颈复康颗粒中葛根素含量测定限 度为：本品每克颈复康颗粒含葛根素，不得少于 0.80mg。 2.2.5 回收率试验 取已知含量的样品 5 批次，各 1g，精密称定，分别加入葛根素对照品溶 液(0.2mg/ml)0.10mL，按 2.2.3 项下操作，各进样 20uL，按外标法以峰面积计算含量。结果 见表 4。 样品含量 (mg) 加入量 (mg) 测得量 (mg) 回收率(%) 平均回收率 (%) RSD (%) 0.8772 0.2000 1.068 99.00 0.8787 0.2000 1.092 101.50 0.8654 0.2000 1.061 99.50 99.90 1.29 0.8873 0.2000 1.074 98.50 0.8846 0.2000 1.093 101.00 表 4 加样回收率测定结果(n=5) 由表 4 可见，当样品中添加葛根素的量在 0.0250mg0.3000mg 时，样品中葛根素的回收率 在 98.50%101.50%，RSD 为 1.29%。符合分析测试要求。 3 结果 平均回收率为 99.90%，RSD 为 1.29%。理论板数按葛根素峰计算应不低于 2000。线 性范围为在不小于 0.80mg，葛根素的微克数与峰面积积分值成良好的线性关系。 4 结论 采用 HPLC 法测定颈复康颗粒中葛根素的含量，操作简便，结果准确可靠，重现 性好，此法可用于颈复康颗粒的质量控制、稳定性考察和有效期，可为颈复康颗粒质量标 准的建立提供依据。 参考文献 1 王本祥.现代中药药理与临床M. 天津科技翻译出版公司， 2004:1503-1504. 2 国家药典委员会.中华人民共和国药典S. 北京：化学工业出版社，2005 年版一部，143. 3 贺云，潘娓婕，张尊昕等高效薄层色谱双波长扫描法测定颈复康冲剂中葛根素的含 量J陕西师范大学学报( 自然科学版 )，2000，28(2)：123 124. 4 Lu H,Xing DM,Sun H,Jin W and Du LJ.Pharmacokinetics of puerarin in normal and cerebral ischemia reperfusion ratsJ.The Chinese Pharmaceutical Journal ,2002,37:4144. 5 Ma JJ,Li HM,Dong ZY and Pei JM.The pharmaceutical effects and clinic applications on Puerarin.Journal of the Fourth Military Medical University 2002,23:6466. 6 梁振东颈复康颗粒喷雾干燥工艺研究J 中成药， 2001，23. 7 李守拙，李云霞颈复康冲剂中葛根素的含量测定J中国中药杂志，1996，21(2) ： 101102. 8 Xue Na Hao ,Shu