GB 15986-1995 黑热病诊断标准及处理原则

中华人民共和国国家标准黑热病诊断标准及处理原则5986一1995of of 华人民共和国传染病防治法及中华人民共和国传染病防治法实施办法制订本标准。主题内容与适用范围本标准规定了黑热病的诊断标准、治疗方法及防治原则。本标准适用于疫区专业机构开展黑热病防治工作和全国各级各类医疗卫生机构对黑热病患者的诊治。2诊断原则根据流行病学史、临床表现以及寄生虫学检查和血清免疫学方法，予以诊断。3诊断标准3门黑热病黑热病通过白岭叮咬而传播，主要病变发生在内脏，少数特殊病例则以皮肤损害或单纯淋巴结肿大为主要症状，分别称皮肤或淋巴结型黑热病。狗也可患此病，称犬内脏利什曼病，是我国山丘地区黑热病的主要动物宿主，当地人的感染大多来自病犬。在白岭季节内(5进入流行区居住过的人员。脏呈进行性肿大，肝脏轻度或中度肿大，白细胞计数降低，贫血，血小板减少或有鼻在骨髓、脾或淋巴结等穿刺物涂片上查见利什曼原虫，或将穿刺物注入三恩氏(养基内培养出利什曼原虫的前鞭毛体(详见附录A),酶联免疫吸附试验( 接血凝(等方法检测抗体呈阳性反应;或用单克隆抗体斑点一单克隆抗体一抗原斑点试验(及单克隆抗体一酶联免疫电泳转移印斑试验(测循环抗原呈阳性反应(详见附录B)条。确诊病例:床诊断:可发生在黑热病病程中;少数患者无黑热病史，为原发性病例。肢或躯干部有皮肤结节、丘疹和红斑，偶见褪色斑，白细胞计数可增至10 000/嗜酸性粒细胞常在5%以上。疹处吸取的组织液或皮肤组织刮取物的涂片上查见利什蔓原虫。家技术监督局1995一12一15批准1996一07一01实施5986一1995疑似病例:条口确诊病例:疑似病例加3. 2. 3条。临床诊断:. 漠、山丘地带)居住或旅游的成年人中。后、腋窝、腹股沟或滑车上的淋巴结肿大如花生米至蚕豆般大小，较浅，可移动。肝脾不肿大，嗜酸粒细胞增多。似病例:条。确诊病例:处理原则4. 1治疗(详见附录C)4. 锑黑克(五价葡萄搪酸锑钠)六日疗法:成人总量120童总量200 240分6次，每日肌肉或静脉注射一次，6天为一疗程。斯锑黑克三周疗法:成人总量133童总量200分6次，每周肌肉或静脉注射2次，三周完毕一疗程。此法适用于体质差或病情较重的患者。锑黑克的剂量应在六日疗法的基础上加大1/3，改用八日疗法进行治疗。选以下一种方案:戊脱眯4mg/量为60mg/kg;量为85mg/皮肤型黑热病斯锑黑克六日或八日疗法，连续2脱脉疗效较好，每次4mg/肉注射，总量为6080-g/般即可治愈。如皮肤损害仍未完全消失，可再给予一疗程。丘地带的黑热病流行区，应及时使用寄生虫学检查和血清免疫学方法查出感染内脏利什曼病的犬，加以杀灭。在病犬较多的地区，应动员群众少养或不养家犬。仍有黑热病流行的平原地区，经监测如媒介白岭的密度较高，应使用杀虫剂于白岭季节初喷洒住屋和畜舍。在山丘、荒漠地带在白岭季节内查见病人后，可用杀虫剂喷洒病家及其四周半径15歼灭自野外入侵室内的白岭。香，燃点干燥的野艾烟薰驱妙;不露宿，提倡装置细孔纱门纱窗在山丘地带的黑热病疫区内，可在白岭季节内用杀虫剂(如澳氰菊酷等)喷淋犬体，以杀死或驱除前来刺叮吸血的白岭。夜间在荒漠地带野外的执勤人员，应在身体裸露部位涂擦驱避剂。5986一1995附录充件)l. 出骼骨部位，用手指确定骼骨上棘，将该处周围皮肤用碘酒及酒精消毒，一般在局部麻醉下进行。病人年龄不同而异，婴儿及幼童用20号穿刺针，年龄较大的儿童及青年可用5人用17号穿刺针，均需经压力蒸气灭菌。刺入皮肤，然后将针竖起，使与水平线成700过皮下组织及骨膜后，即能觉出针头己触及骨的表面，可用旋转式的动作，将针尖钻入骨内。1. 4按病人年龄大小及胖瘦不同，穿刺的深度为。浅入深，只要放手后针不斜倒，表示针尖已入骨内，可将针轴拔出，接以2得骨髓后，应立即将穿刺针拔出，将骨髓制成徐片以便检查。1. 5骨髓涂片制成后让其自然干燥，用记号笔编号。染色前先用甲醉固定，将吉氏液以水配制成3%的稀释液，染色30在2在涂片上，染色20后用流水轻轻冲洗晾干，即可用光学显微镜(油镜)检查。2淋巴结穿刺2门一般均选择腹股沟部位，其他部位的淋巴结如属肿大，亦可用作穿刺。洗净的左手拇指和食指捏住一个淋巴结，向上提起，并使其固定于两指之间，注意穿刺部位不得污染。右手取高压消毒的针头，先穿过皮肤，然后刺入淋巴结内，待数秒钟后即可将针头拔出，无需用针筒抽吸。于所获的液体量甚少，应仔细们戎涂片。见1. 3皮肤刮片检查局部皮肤消毒后，以洗净的左手拇指和食指捏住皮肤结节，使其固定于两指间，再用灭菌干燥手术刀轻轻切开皮肤，刮取切口两侧的皮肤组织，制成涂片，染色镜检。4三恩基的制备:琼脂14. 化钠6. 馏水900入烧瓶中加热熔化，分装试管，每管3稍冷却后每试管加入相当1/3量的去纤维兔血，均匀混合后斜置待冷。冷却后每管加入。5冷藏备用。5原虫培养:在严格的无菌操作下，把抽吸到的骨髓、淋巴液注入培养基内，或切取皮肤黑热病患者的小块皮肤组织投入三恩基内，置22温箱内培养，15天后用白金耳取少量培养液置显微镜下检查，如查见利什曼原虫的前鞭毛体，即可确定诊断。5986一1995附录充件)一般以病人血清作试验。婴、幼儿病例因采血不便，可用滤纸干血滴法。集经三恩氏(培养10天左右的利什曼原虫前鞭毛体，离心沉淀(3 15上清液，加生理盐水冲匀，再经离心洗涤3次后，用含。尔马林。. 2的磷酸盐缓冲盐水(定，置冰箱内心沉淀，弃上清，再用释至每个视野5010。个鞭毛体，滴于玻片上，电扇吹干。此抗原片，可置冰箱中备用。滤纸上圈画1. 2圈内滴入2滴(相当于20病人耳垂血，晾干后放入装有干燥剂的塑料袋内，置冰箱保存待查。3从滤纸上剪下干血滴，以。. 2, . 2的当于1:20血清的稀释度(如被检样本为血清，则作1:20稀释)，置冰箱内过夜。试验时继续作倍比稀释至1:320或1:640，把不同稀释度的血清或干血滴浸泡液分别滴在抗原片上，置湿盒内于37020的以续用蒸馏水洗一次，电扇吹干。1. 4分别滴加1:10稀释的荧光标记的羊抗人湿盒内于37前清洗，电扇吹卜待检以盖玻片，在荧光显微镜或用6性者虫体的胞浆及鞭毛呈黄绿色荧光，轮廓清楚，而核及动基体一般不显荧光。血清)和正常人干血滴(或血清)浸泡液及于正常人血样在1:20稀释时亦偶可出现“+”，故以“+”为阳性标准，并以1:20(即1:20+)为最低阳鞭毛体可溶性抗原):收集利什曼原虫前鞭毛体，以生理盐水离心洗涤3次，按压积体积加10倍量的。柳汞生理盐水，在冰浴中超声处理2次，每次l 复冻融5次，经4 清液存一201. 后每孔加血清稀释液()O. 2批设一个阴性对照，一个阳性对照)，每孔1匀置37 C 5放25室温，则需10 2. 2. 3温育后，倾去稀释血清，用洗涤液()连续洗8次，空千。孔。. 237内5 用洗涤液洗8次，再用蒸馏水洗一次，空干。2. 2. 6加入已加3%过氧化氢(四甲基联苯胺(底物液，每孔。应5可观察结果。视判断:按每批的阳性对照及阴性对照判断结果。阳性为鲜蓝色，阴性基本无色。5986一1995分光光度计比色判断:不用过氧化氢(止，选用595P/N)2. 1判为阳性(尸一患者的光密度值;3间接血凝法(1取培养10生理盐水洗涤，按压积量加4倍生理盐水，于冰浴中用150 W ,18 300s，以4,0. 075的醛化:用健康人“O型红细胞加10倍生理盐水离心48二醛1004化红细胞再用生理盐水和蒸馏水或去离子水各洗5次，最后稀释成15%，另加万分之一硫柳汞防腐，置冰箱内保存。2,0. 75离心洗3次，配成5%的细胞悬液加等量万分之一的揉酸溶液，置37水浴中3035倍量上述的用红细胞悬液，然后以此红细胞悬液加等量. 4的37水浴中致敏45加摇动，2 2的后以含有1%正常兔血清的. 2的用。第一孔内加等量待检血清，混匀并倍比稀释成2- , 2-=.每一浓度血清。. 025 7V”井内，再加等量致敏红细胞摇匀，置于湿纱布盒内，经室温1时用参考阳性和阴性血清作对照。凡患者血清稀释度达2凝集者为阴性反应。别取2. 45，室温放置301. 2将滤膜浸入标准缓冲液(0. 三轻甲基氨基甲烷)(. 4. 0. 25%明胶，1:10。稀释)内，4过夜。记兔抗鼠1:1 000)，温内反应30馏水洗涤终止反应。缘清晰，直径较正常人血清反应为大者则判为阳性反应。未出现棕色斑点，与正常对照血清反应相近者为阴性反应。为更精确阅读结果，可待滤膜干燥后用岛津双波长 460读光密度面积积分(of 阂值1.。以上者为阳性反应;阐值1。为阴性反应。2酶标记单克隆抗体斑点一2. 2门以戊二醛二步法标记提纯的单克隆抗体制备成1230保存备用。2. 2将待测血清依次作倍比稀释至1:8。吸取2阴干。2. 3滴有血清的硝酸纤维(置于标准缓冲液(0. . 4 0. 25%明胶,，室温摇床洗涤4次，每次l 2. 4洗涤后加1:100稀释的温摇床2h，标准缓冲液洗涤6次，每次l 2. 5加底物4洗中止反应。6目测以出现蓝灰色斑点者为阳性反应。阴性则无蓝灰色斑点或仅有血清痕迹。2. 7每次试验均需设有阳性及阴性对照。2. 份待检血清各取50. 4的 上清加0. 2乙二醇(00),4 以50% B 15986一1995后沉淀物加502. 3. 2十几烷基硫酸钠一聚丙烯酞胺凝胶电泳(术:实验使用10%分离胶(. . 250%十二烷基硫酸钠(00甲基乙二胺(50%过硫酸胺0缩胶(浓缩液0. . 625,0,3. 80 0 o 川_,10% 5待胶板聚合完成后，每槽上样处理血清2制板插入电泳槽中，2003- 3电泳转移将胶膜覆盖在硝酸纤维膜上对正，排除气泡。开动电源，电流为200压为153. 4转移后硝酸纤维膜用标准缓冲液(. 4，三次，每次1000稀释的1270C 夜，标准缓冲液洗三次，统显色l 洗中止反应。3. 6目测特异性条带，以130kD,录充件)C，抗黑热病治疗初治病人:采用斯锑黑克六日疗法或对重症黑热病患者的三周疗法，应尽可能作静脉注射，把斯锑黑克从静脉缓缓注入。在用六日疗法治疗过程中，如病人出现高热、鼻停针数日，待症状缓解后再继续注射，药物总量可与先前注射的合并计算。2未治愈病人:患者经一个疗程斯锑黑克治疗后半个月复查时，如体温仍高于正常，白细胞计数未见增加，脾肿依旧，原虫并不消失，应认为治疗无效，可加大斯锑黑克的剂量，比原剂量增加1/3，采取八天八针疗法进行第二个疗程3复发病人:黑热病经治疗后体温已恢复正常，一般情况和血象都有好转，脾肿亦见缩小，穿刺检查不复能找到利什曼原虫，但相隔数月后(一般在半年内)体温上升，脾肿复见增大，骨髓涂片上又查见原虫，即为复发。仍可用斯锑黑克治疗，应在原剂量基础上加大1/34抗锑病人:经锑剂三个疗程以上仍未痊愈的病人。临床上称为抗锑性黑热病病人，可采用以下两种芳香双眯类药物进行治疗。戊院眯(在每次注射前把药物先溶解于无菌蒸馏水内配成4%的溶液，作肌肉注射，每次4mg/日一次，连续15天为一疗程，总剂量为60mg/药物注射过程中，注射局部可产生红肿等反应，可用局部热敷法以减轻反应。偶尔发生血压下降出现脉搏增速、眩晕、心悸等反应，注射肾卜腺素即可消失轻眯茂(每次临用前先用少量蒸馏水把药物溶解，再用I%5%溶液，缓慢肌肉注射，或将药物溶于50%的葡萄糖液内，使成2%的溶液，作静脉注射，每1一次，每次剂址为2 3mg/剂量为85mg/香双眯剂在水溶液内不稳定，容易变质，增加毒性，每次注射都必须用新鲜溶液。1贫血:患者如有中等度贫血，在治疗期间应给予铁剂，严重贫血者，除给予铁剂外，可进行小量多次输血，待贫血有所好转后再用锑剂治疗洗净鼻腔，寻找出血点，然后用棉花浸以1:1 000肾上腺素液,3%麻黄素置流血处，或用明胶海绵覆盖在出血部位。卧床休息，预防感冒，给予营养丰富和高热量的食物，如鸡蛋、猪肝、豆腐等，每日口服足量的多种维生素，以利病体的恢复。发肺炎的病人，不宜使用锑剂或芳香双眯类药物治疗。肺炎若发生在抗黑热病治疗过程中，应立即停止注射，先用抗菌素治疗，待肺炎症状消失后，再用抗黑热病药物治疗。2急性粒细胞缺乏症:应立即用青霉素治疗，以防止继发感染。如