艾滋病检测点培训ppt课件

HIV实验室检测培训 1 艾滋病基础知识 -定义 艾滋病（ AIDS）： 由人类免疫缺陷病毒（ HIV） 所引 起的一种以辅助性 T淋巴细胞（ CD4+T淋巴细胞）数量减少导致免疫功能减 退为主要特征的严重传染性疾病。 -来源 20世纪 40-50年代的非洲， HIV病毒可能由猴 子体内的猿免疫缺陷病毒演变而来 2 -流行 最早在美国发现 欧洲 非洲 20世纪 80年代中后期传播到亚洲 -感染的自然发展过程 窗口期 受到 HIV感染到可以检测出艾滋病抗 体的这一段时间 特点：轻微的一过性感冒症状 在窗口期内检测不出抗体 感染（ HIV-1） 2-3周可检出 P24抗原 感染者的血液、精液、阴道分泌物等 体液中，含有大量 HIV 3 无症状潜伏期 8-10年 特点： HIV抗体 + 临床症状出现 平均 10年的潜伏期后出现 艾滋病病人 临床症状出现后 1年发展为病 人 死亡 无抗病毒治疗情况下，半年到 2年的 时间，病人死于艾滋病 HIV抗体（ -） HIV抗体（ +），无症状 HIV抗体 + 有症状 艾滋病 4-8周 810 年 1年 0.52 年左右 个体感染艾滋病病毒后的自然发展过程 4 HIV检测是艾滋病防治的一项 重要保证措施 w 明确 HIV感染者（诊断） 及早医学干预 合宜的治疗指标和效果评估 疫苗效果考评 w 发现 HIV阴性者 做好减少危险（不安全性行为和药瘾者）的咨询 w 开展 VCT的基础 w 流行病学监测和专题研究 w 公共卫生规划（政策形成、保险、控制等） w 职业保护 5 达到保证措施的必要条件 w 贯彻有关 HIV检测的法规（实验室网络、人员 、仪器设备、房屋等条件） w 有效的检测方法和检测试剂 w 常规质量控制和质量保证 6 艾滋病检测工作管理文献 1990. 全国 HIV检测管理规范（试行） 1997.9. 全国艾滋病检测工作规范 2004.8. 全国艾滋病检测技术规范（试行） - “规范 ” 2003. 全国艾滋病检测工作管理办法 - “办法 ” 2004.12全国艾滋病检测技术规范（正式） 2009 全国艾滋病检测技术规范（修订版） 7 HIV感染的实验诊断 w 检测方法 HIV培养，核酸测定， P24抗原检测， 血清抗体测定 w 金标准 血清抗体测定， HIV感染后平均 25天检出，待 12周时 几乎全检出 w HIV抗体检测 两个阶段（筛查和确认） 三个程序（初筛复检确认） 2 3标本（血清，全血，唾液，尿液，滤纸干血） 8 HIV筛查试剂要求和种类筛查试剂要求和种类 - 要求要求 SFDA 注册批准注册批准 中检所中检所 批批检合格批批检合格 CDC 临床评估质量优良临床评估质量优良 使用使用 有效期内有效期内 采供血机构采供血机构 必须使用必须使用 HIV-1/2 - 种类种类 酶联免疫试剂（酶联免疫试剂（ EIA） 颗粒凝集试剂（颗粒凝集试剂（ PA） 其它快速试剂（其它快速试剂（ RT） 9 检测注意事项检测注意事项 - HIV抗体检测工作应该按照全国艾滋病抗体检测工作应该按照全国艾滋病 检测技术规范，在合格的艾滋病检测实验室检测技术规范，在合格的艾滋病检测实验室 进行进行 - 为了减少检测的错误和误差，应采取严格的为了减少检测的错误和误差，应采取严格的 质量保证、质量控制和质量评价措施质量保证、质量控制和质量评价措施 - 注意实验室生物安全防护和职业暴露预防注意实验室生物安全防护和职业暴露预防 - 严格遵守实验室标准操作程序（严格遵守实验室标准操作程序（ SOP），）， 按按 照试剂盒说明书操作，注意防止样品间交叉污照试剂盒说明书操作，注意防止样品间交叉污 染染 10 检测程序检测程序 - 筛查试验筛查试验 - 重复检测重复检测 - 确认试验确认试验 11 HIV抗体筛查 -职责 l 经省卫生行政部门指定验收专家组，验收合格的 HIV筛查 实验室 -方法、试剂 l 酶联免疫实验：第三代双抗原夹心法试剂（ ELISA） l 快速检测 明胶颗粒凝聚实验 斑点 ELISA 斑点免疫胶体金 艾滋病唾液检测卡 12 采集标本 w 血液标本 w 一般采集肘正中静脉血液 3-5ml w 婴幼儿可选择颈外静脉 13 采集标本 w 以肘静脉取血为例。选择适宜静脉，在上臂 扎上压脉带。先用 25g/L碘酊棉签于欲穿刺处 皮肤从内向外做环形消毒，待干后再用 0.75L/L乙醇棉签以同样方式擦去碘迹。 14 采集标本 w 取无菌注射器，按牢针头，使针头斜面与针 筒刻度平行，并查看有无阻塞和漏气。采用 一次性注射器还应注意包装是否密封，有无 过期，否则不得使用。 15 采集标本 w 嘱病人紧握拳头，使静脉显露。左手拇指固 定穿刺部位下端，右手持注射器，使针筒刻 度向上，先以约 30角度沿静脉正面进针， 快速穿过皮肤刺入静脉中央。见回血后，右 手固定注射器，用左手缓缓抽出注射器针栓 ，至所需血量后，解除压脉带，放松拳头， 以消毒棉签压住穿刺孔，拔出针头。 16 采集标本 w 取下针头，将血液沿管（瓶）壁缓慢注入容 器内，待血液自行凝固。血块收缩后，即可 分离出血清。如需全血或血浆，则将血液注 入事先准备的抗凝管（瓶）中，轻轻混匀， 防止凝固，即为抗凝血。经适当离心可分离 出血浆。血清和血浆的主要差别是，血清中 无纤维蛋白原。 w 采样完毕后应同时填写 采样登记表采样登记表 17 标本处理 w 将采集好的血液标本放入离心机 3000转 /分离 心 5分钟 w 取出标本，用移液器（或一次性滴管）将血 清移入血清储存管中（ 1.5ml） w 检测完毕后将血清储存管盖紧，放入冰箱冷 冻室保存至少 2个月 18 胶体金快速检测技术 19 一、原理 w 本品采用胶体金免疫层析技术，在玻璃纤维膜上预 包被金标记 HIVgp 160和 gp3 6抗原，在硝酸纤维膜检 测线和质控线上分别包被 HIVgp41、 gp3 6混合抗原和 抗 HIVgp41抗体，当检测进行时，样品中 HIV抗体可与 金标记的 HIV抗原结合形成复合物，由于层析作用 ,使 复合物沿试纸条向前移动。若样品中含有可被检测的 HIV抗体，则与检测线预包被的 HIV抗原结合形成 “金 标记 HIV抗原 -HIV抗体一 HIV包被抗原 “复合物凝聚显 色；若样品中没有 HIV抗体或 HIV抗体的含量低于检测 限时，则不形成复合物而不显色。 20 二、试剂盒组成 1. HIV(1 2)抗体胶体金试纸条板 50人份 盒， ( 5条 ) lO袋。 2. 说明书 1份。 3. 稀释液 l份， 4ml瓶。 21 三、操作步骤 根据试剂盒说明书进行操作！ 一般操作步骤： w 1将密封袋打开，取出所需试纸条 板。 w 2样本检测：取 4 O ul待检样本加在试 纸条板的加样区，再在近加样区上方加 1 滴稀释液。 w 3 3 0分钟内观察并记录试验结果。 22 四、结果判断 w 阳性结果：在试纸条板的检测窗 和质控窗位置上各出现一条紫红色条 带。 w 阴性结果：仅在试纸条板的质控 窗位置上出现一条紫红色条带。 w 无效结果：在试纸条板的检测窗 和质控窗位置上均未出现紫红色条带 为试验无效。 23 五、实验结果判断示意图 24 六、注意事项 1被检样品、试剂应在室温 2 O 左右平衡 30分钟 后检测。被检品应为新鲜样品。如发现试纸条板 密封袋破损则需废弃。 2高血脂和高胆红素样品对检测结果无显著性影响 ，但溶血样品，尤其是大量溶血样品对检测结果有 显著影响。 3当质控窗与检测窗上均不出现紫红色条带时，应 重新测试，如果问题仍然存在，应立即停止使用此 批号产品并与当地供货商联系。 25 七、胶体金快速试剂实物 26 HIV检测中的保密的认识 w HIV检测前后咨询中获得的隐私 w HIV检测结果 w 与专业人员的讨论 w 在各种场合中对受检者的讨论 （包括会议） w 档案记录与保存 w 受检者，家属，朋友和单位 w 传报医院 w 匿名检测系统能确保保密，但不利于医学管理 27 初筛结果处理初筛结果处理 - 初筛（初筛（ -） 出具出具 “HIV抗体阴性抗体阴性 ”报告报告 初筛（初筛（ +） 可出具可出具 “HIV抗体待复检抗体待复检 ”的的 报告，报告， 但不能出具阳性报告但不能出具阳性报告 。 - 送复检送复检 填写填写 复检检测单复检检测单 ，两人签字，两人签字 重新采集受检者的血样重新采集受检者的血样 原样和新样连同送样单原样和新样连同送样单 HIV筛查实验室筛查实验室 确认实验室确认实验室 筛查实验室复检筛查实验室复检 做好检测前后咨询做好检测前后咨询 28 样 品 筛查检测 一阴一阳均阳性反应 阴性报告送初筛实验室 进行复检 重复检测 均阴性反应 阳性反应 原有试剂另一 种筛查试剂 筛查试剂 阴性反应 检测点筛查试验流程图 29 重复检测重复检测 - 职责职责 HIV筛查实验室筛查实验室 或或 HIV确认实验室确认实验室 筛查实验室拟作复检，加强自我质量控制筛查实验室拟作复检，加强自我质量控制 - 试剂试剂 选择：两种不同原理或厂家选择：两种不同原理或厂家 品种：品种： 酶联免疫试剂酶联免疫试剂 快速检测试剂快速检测试剂 30 重复检测结果处理 -复检（ -）出具 “HIV抗体阴性 ”报告 复检（ +） 可出具 “HIV抗体待复查 ”的报告 ，但不能出具阳性报告。 -送确认 填写复查送样单，两人签字 原样或新样连同送样单送确认实验室 31 确认实验 - 职责 确认实验室 -检测方法 免疫印迹实验（ WB） 线性免疫实验（ LIA） 免疫荧光实验 （ IFA） 32 确认结果解释