H7N9禽流感病毒实验室检测ppt课件

人感染 H7N9禽流感实验室检测 1 2 病例定义 l 人感染 H7N9禽流感疑似病例与确诊病例定义 参照 人感染 H7N9禽流感诊疗方案（ 2013年 第 2版） （卫发明电 2013 17号）。 3 标本采集、运送 l 当医务人员怀疑病人感染 H7N9禽流感病毒时 ，应当尽早采集其上、下呼吸道标本（尤其是 下呼吸道标本）和发病 7天内急性期血清以及 与急性期血清采集时间间隔 2-4周的血清等。 4 标本采集、运送 对符合卫生部发布的 人感染 H7N9禽流感疫 情防控方案（第二版） 中规定的病例定 义的病人进行采样。 上呼吸道标本（如咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取 物、咽漱液和鼻洗液） 下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组 织标本） 5 标本采集、运送 血清标本：发病 7天内急性期血清以及间隔 2-4 周的恢复期血清 尸检标本 环境标本：禽类粪便、笼具涂拭标本和环境污 水等标本 6 标本采集 要求 呼吸道标本：发病早期采样，采集的呼吸道标本每 份分为 3 管，每份不少于 1ml。 血清标本：每份分为 2管，每管不少于 0.5ml。 7 标本采集、运送 l 标本采集、包装、运送等应当严格按照 可感 染人类的高致病性病原微生物菌（毒）种或样 本运输管理规定 （卫生部第 45号令）等生物 安全相关规定执行。 8 标本采集、运送： l H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照人间传染的病 原微生物名录中高致病性禽流感病毒进行管理。 9 实验室检测 l 有条件开展核酸检测的医疗机构要对呼吸道标 本开展 H7N9病毒核酸检测，进行病例诊断， 并指导早期应用抗病毒药物；没有条件开展核 酸检测的医疗机构应当尽快利用快速抗原检测 试剂进行甲型流感病毒抗原检测，并将甲型流 感病毒抗原检测阳性的标本送当地流感监测网 络实验室进一步开展 H7N9病毒核酸检测。 10 实验室检测 11 流感样病例强化监测 l 尚未发生人感染 H7N9禽流感病例的地区，在 既往流感样病例监测工作基础上，要提高监测 强度。增加标本采集和检测数量，南方省份每 家流感监测哨点医院每周采集流感样病例和人 感染 H7N9禽流感相关病例标本 20份，送当地 流感监测网络实验室开展检测。 12 13 相关技术文件 14 人感染 H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略 标本采集 为进行病例诊断，医疗机构应尽早采集病人的 相关临床样本。采集的临床标本包括病人的上 呼吸道标本（如咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物 、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如气管 吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等 。 15 人感染 H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略 l 应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤 其是下呼吸道标本）和发病 7天内急性期血清 以及间隔 2-4周的恢复期血清。如病人死亡， 应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体 解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组 织）标本。医疗机构采集的呼吸道标本每份不 少于 3ml。血清标本每份分为 2管，每管不少 于 0.5ml。 16 人感染 H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略 l 对人感染 H7N9禽流感确诊病例可能暴露的禽 类饲养或交易等场所，由疾控机构采集禽类粪 便、笼具涂拭标本和环境污水等标本，技术要 求参考 职业暴露人群血清学和环境高致病性 禽流感监测方案（ 2011年版） 。（ /jkzt/crb/rgrgzbxqlg_5 295/rgrglgyh/） 17 人感染 H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略 18 人感染 H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略 19 人感染 H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略 20 当地流感监测网络实验室收到标本后 24 小时 内，立即对呼 吸道标本开展甲、乙型流感病毒通用引物， H5、 H7亚型 的检测。 若当地流感监测网络实验室检测结果为 H5、 H7核酸检测 阳性 时，应当于 12小时 内将其中 2管呼吸道相关原始标本 送至省级疾控中心流感网络实验室。 若当地流感监测网络实验室检测到 甲通阳性，不能分亚型 的标本 ，要 12小时 内送省级疾控中心流感网络实验室。 人感染 H7N9禽流感病毒标本采集 及实验室检测策略 21 l 标本分装： 流感网络实验室收检的呼吸道标本每份分为 3管，每 管应不少于 1ml。 1管用于检测，另外 2管用于复核和 病毒分离。 标本储存应在 -70 或以下温度，避免反 复冻融。 人感染 H7N9禽流感病毒标本采集及实 验室检测策略 22 H7N9禽 流感病毒检测方法： 23 H7N9禽 流感病毒检测方法： l Realtime PCR检测方法： 引物探针、阳性对照由国家流感中心和四川省疾控中心统 一下发 请认真阅读引物探针说明。 24 H7N9流感病毒检测方法 l 将新合成的引物探针在开盖前短暂离心 l 用 RNase Free Water溶解，管上标记为 Xul/100pmol ,引 物加上 X的 2.5倍体积的水，探针加上 X的 5倍体积的水， 变成为使用浓度。 l 引物 /探针未溶解前（干粉状态） 4 保存。 引物 /探针溶解之后 -20 或 -20 以下保存（注意：反复 冻融易导致引物 /探针降解，建议分装保存）。 25 人感染 H7N9禽流感强化监测实施方案 l 适用范围 l 本方案适用于各地在已发生人感染 H7N9禽流 感确诊病例的县（区）开展强化监测工作。仅 发现动物或环境 H7N9禽流感病毒检测阳性结 果的地区可参考此方案，自行决定是否开展强 化监测工作。 26 人感染 H7N9禽流感强化监测实施方案 l 发生人感染 H7N9禽流感确诊病例的县（区） ，应当从病例确诊后次日开始在所有二级及以 上医疗机构门急诊开展为期 2周的流感样病例 （ ILI）和住院严重急性呼吸道感染（ SARI） 强化监测。 27 人感染 H7N9禽流感强化监测实施方案 .严重急性呼吸道感染（ SARI）病例 （ 1） 5岁以上儿童及成人。 新收入院患者具有以下 4项临床表现： 急性起病； 腋下体温 38 ； 咳嗽或咽痛； 气促（呼吸频率 25次 /分钟）或呼吸困难 正在住院治疗的患者如出现上述 4项临床表现，也视 为严重急性呼吸道感染病例。 28 人感染 H7N9禽流感强化监测实施方案 （ 2） 5岁及以下婴幼儿。 新收入院患儿具有以下临床表现： 急性起病； 咳嗽或呼吸困难； 伴以下症状或体征之一： A气促：呼吸频率大于 60次 /分钟（ 2个月的婴儿）；呼吸频率大于 50次 /分钟（ 2-11月龄婴儿）；呼吸频率大于 40 次 /分钟（ 1-5岁）。 B拒食或呛奶。 C严重呕吐。 D抽搐。 E嗜睡或昏迷。 F胸壁凹陷或平静时喘鸣。 正在住院治疗的患儿如出现上述临床表现，也视为严重急性呼吸道感染 病例。 29 人感染 H7N9禽流