HIV筛查实验室的质量管理与控制ppt课件

1 HIV筛查实验室的质量管理与控制 2 质量保证 3 一、人员培训 人 员 要求 3名以上 技 术 人 员 至少 1人具有中 级职 称、 2 年以上血清学 检验 工作 经 验 上 岗 要求 上 岗 前必 须 接受技 术 培 训 并 获 得合格 证 书 每年接受复 训 一次 培 训 内容 HIV检测 相 关基 础 知 识 、 检测 技 术 及管理要 求、 实验 操 作、 质 量管 理与控制、 生物安全。 4 使用新方法前 对 人 员进 行培 训 获得 资格 开展相 应 工作 检验 人 员 检测 人 复核人 签发 人 不能一人 同 时 承担 多个角色 ！ 5 二、环境条件 HIV 筛查实验室 实验 室或 检测 区域 应 分 为 清 洁 区、半 污 染区和 污 染区， 应 符合二 级 生物安全 实 验 室（ BSL-2）要求。 配 备 开展 HIV抗体 检测 所需的 设备 ： 生 物安全柜 、 酶 标仪 、洗板机、恒温孵育 箱、离心机、加 样 器、冰箱等。 6 HIV 检测点 须 有 HIV抗体 检测 区域或 专 用 实验 台，能开展 简 便、快速的 检测 。 须 配 备 快速 试验 所必 须 的物品，包括 冰箱、消毒与 污 染物 处 理 设备 、一次 性耗材、安全防 护 用品等。 7 三、样品的采集和保存 尽量避免 溶血 细 菌 污 染 抗凝不完全 假阳性 内源性 HRP 红细 胞破裂 释 放活性物 纤维 蛋白 原干 扰 注：血清置 4 冰箱 5天内完成检测 8 四、检测方法和试剂选择 试剂 国家食品药品监督管理局注册批准、批检合格、在有 效期内，经临床质量评估敏感性和特异性高。 更换试剂批号时应进行 平行实验 。 检测 方法 使用可靠的检测方法，常用： ELISA和快速检 测。 9 五、设备维护与校准 酶 标仪 / 洗板机 加 样 器 温度 计 高 压锅 国家法定部门定期校准（ 每年至少 1次 ） 精密 仪 器 生产厂家校准（ 每年至少 1次 ） 均须做好日常维护及使用记录 蛋白印 迹 仪 流式 细 胞 仪 病 载仪 10 六、文件和文件管理 1.标准操作程序（ SOP） 至少建立 以下 SOP 样品的接收、登记、处理和保存 检测方法和步骤 试剂使用和保存 仪器的使用、维护和校准 质量控制要求及程序 结果解释与报告 保密程序 实验室数据、相关文件记录与保存 不确定样品追踪和处理 实验室安全防护、清理及消毒 11 SOP应 包 括的内容 标题 和 编 号 编 写和修 订 日期 编 写和修 订 人 员 姓名 方法、目的和 应 用范 围 检测设备 试剂 及有效期 安全防 护 相关步 骤 结 果的解 释 和 报 告 附 录 每年修 订 一次 12 2.实验原始记录 原始 记录 表 试剂厂家 测定方法 试剂批号 试剂效期 操作人员姓名 复核人员姓名 检测日期 13 3.结果报告 试剂 盒 质 控品 外部 质 控品 满 足要求 不 满 足要求 分析结果 重新检测 复核人签字 签发人签字 14 4.HIV标本的保存记录 标 本保存 记录 标本类型 贮存量 贮存温度 贮存起始时间 标本保管人 标本复核人 15 5.样品登记和保存 收 样 建立唯一 编码 登 记 相关信息 保存 姓名、性 别 、年 龄 、 检测 日期 16 6.文件存档 实验原始记录、打印数据、 WB试验的反应条带 或照片、样品登记表、样品保存记录表等应妥善存档 保存 10年以上 。 17 质量控制 18 一、实验室质量控制的定义 为达到质量要求所采取的作业技术和活动。定 义 19 二、酶免或发光法抗体检测的室内质量控制 1、室内质量控制的质控品 试剂 盒内 部 对 照 判断试验有效性，但 不能作为室内质控品 。 室内 质 控品 监控检测的重复性。可只设弱阳性质控，以试剂盒临界值的 23倍 为宜。 20 3、 室内质控血清的制备 收集阳性血清 （无溶血、黄疸、脂肪 ） 56 、 30min灭 活 3000r/min离心 15min 正常人血清或 10%小牛 血清 PBS溶液稀 释 测 量 值 分装， -20 冻 存 21 4、 质量控制方法 u Levey-Jennings质控图 使用累积和技术或趋势分析技术的图形提供系 统偏移和漂移的状况。 22 质 控 图 参数 在不同的批次 检 测 取得的至少 20个数据 至少做 5个批次的 检测 ，每个批次 中不少于 4个 质 控品 检测结 果 平均 值 标 准 差 变 异系数 控制限 样本量足够 样本量较少 23 质控的规定和使用 目前很多质控规则已被采用，最常用的是 12S和 13S规则。 24 告警（ 12S）：当外部对照的 S/CO值超过 2S范围时，系统处于 告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若 将 12S做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。 警告 : 12S规则违 背 25 失控（ 13S）：当外部对照的 S/CO值超过 3S范围时，系统处于 失控状态，本次结果不能被接受。 失控 : 13S规则违 背 26 位移：连续几次（ 3-5次）外部质控都落在均值的一侧。提示试 验条件发生了较大改变。 发 生位移 27 出现以下情况也应该应该暂停实验，找出原因。 连续 两次同 一方向超出 2S 28 连续 四次同 一 方向超出 1S 29 失控原因的处理和分析 处理 出 现 数据 违 背 控制 规则 填写 失控 报 告 单 上交 实验 室主 管 是否 发 出 检验 报 告 决定 30 失控原因的分析 立即 重新 测 定同 一 质 控品 用新 的 质 控品 重 测 失控 项 目 检 查 仪 器状 态 检 查 试 剂 联 系 仪 器厂 家 排除人 为 或偶然 误 差 排除 质 控品 变 质 或 污 染 失控 失控 失控 失控 31 u“ 即刻法 ” 质控 样本量较少，无法绘制 “ L-J” 质控图时，前 20 个数据可采用 “ 即刻法 ” 。该方法只需 3个测定值即 可开始进行质控。 32 先将测定值从小到大排列， X1最小， Xn最大； 计算 X和 S； 计算 SI上限 值和 SI下限 值。 SI上限 =（ X最大 - X） /S， SI下限 =（ X - X最小 ） /S； 对照 SI值表，检查是否失控。 33 SI值表 n n3s n2s n n3s n2s 3 1.16 1.15 12 2.55 2.29 4 1.49 1.46 13 2.61 2.33 5 1.75 1.67 14 2.66 2.37 6 1.94 1.82 15 2.71 2.41 7 2.10 1.94 16 2.75 2.44 8 2.22 2.03 17 2.79 2.47 9 2.32 2.11 18 2.82 2.50 10 2.41 2.18 19 2.85 2.53 11 2.48 2.23 20 2.88 2.56 34 当 SI上限 和 SI下限 n3s时说明该值已在 3s范围之 外，属 “ 失控 ” 。 注： “ 即刻法 ” 只能在前 20次内使用，超出即可采用 L-J质控图法。 35 三、快速法抗体检测质控 1、试剂内对照 在质控窗口内出现质控带，该质控带是试剂自 带的内部过程质控，说明实验室操作全部完成并且实 验所用材料处于工作状态。清洁的检测区背景是内部 阴性过程质控。如实验完成后未出现红色质控带，说 明试剂盒内质控无效，该试验结果无效，样品须重