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绿茶和红茶对由 N-亚硝基二 乙胺 （ NDEA ） 和 4-甲基 -1,3-吡啶基 -1-丁 酮 (NNK)引 起 的肿瘤的抑制作用 1 Inhibition of N-Nitrosodiethylamine-and 4-(Methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1- butanone-induced Tumorigenesis in A/J Mice by Green Tea and Black Tea Zhi Yuan Wang,Jun-Yan Hong,Mou-Tuan Huang,Kenneth R.Reuhl,Allan H.Conney,and Chung S.Yang Cancer research,1992,52:19431947. 2 摘要 介绍 材料与方法 结果 讨论 目录 3 摘要 NDEA 灌胃法给予 NDEA（ 10mg/kg） 共 8周 结束灌 胃 16周 后 杀死 90%以上的小鼠患有 贲门 肿瘤和肺肿瘤。 平均每只小鼠体内包 含了 8.3个 贲门 肿瘤 和 2.5个肺肿瘤。 绿茶浸提液 肿瘤发病率和多 样性降低 NNK 0.6%去咖啡 因绿茶或红 茶 浸提液 红茶：肿瘤多样性降低但 并未降低发病率 绿茶：肿瘤多样性及发病 率均降低 4 介绍 简介 绿茶 高温条件下蒸和干燥新鲜茶叶 黄烷（醇）类 红茶 压碎处理，发酵 茶黄素，茶玉红精和其他的 低聚物 流行病学关于茶叶和癌症的研究 至今都没有一个一致的结果 。 早期关于用灌胃的方法或给动物注射茶 叶提取物的方法来研究茶叶致癌性的实 验，结论都存在争议。 用绿茶提取物做灌胃实验，研究了绿茶提取物对 NDEA诱导的 贲门 肿瘤和肺肿瘤，以及去咖啡因绿茶 和红茶提取物对 NNK诱发 A/J小鼠的肺肿瘤的影响。 5 材料与方法 材料： NDEA购买于西格玛化学公司（圣路易斯，莫） NNK购买于 Chemsyn 科学实验室（堪萨斯州） 绿茶（火药品牌）中国国家本土产品与动物加工制品进出口集团公司（ 浙江，中 国），购买于纽约 KUMKU公司。 去咖啡因绿茶粉和红茶粉是从去咖啡因的茶叶中用脱水干燥的方法提取 出来的，由托马斯 .J.林普顿公司提供的。 1.25%绿茶浸提液的制备： 绿茶叶（ 12.5g） 500mL的沸腾的去离子水中 15 分钟 用冰浴冷却至室温 再煮沸。茶叶用 500毫升干净沸腾的去离子水泡一段 时间，再次煮沸。 0.63%绿茶浸提液的制备： 用 1.25%的绿茶浸提液以 1:2的比例混合而成 0.6%去咖啡因茶叶浸提物的制备： 去咖啡因的绿茶或红茶粉（ 0.6g） 100mL55 去离子水中，配制出浓度为 0.6%的去咖啡因茶叶提取物。 6 材料与方法 实验动物： 雌性 A/J小鼠， 56周大，用于全程实验的小鼠均购买于杰克逊实验 室（ Bar harbor,ME） 10只 饲养条件： 202 。 5010%的空气湿度。 12 小时白昼和 12小时黑夜循 环。所有小鼠喂食 AIN- 76A饲料，购买于 Teklad Co.(Madison,WI)。 7 材料与方法 NDEA诱导肿瘤 采用 Wattenbery模型 实验一 第二组：只喂茶叶 第一组：只喂水 消极控制组 第三组：积 极控制组 用填喂法喂食 NDEA （ 20mg/kg ）每周一次，共 8 周。 第四组： 1.25%的绿茶 浸取液作为唯一饮水源 ，在 NDEA 实验开始前 2 周喂食，直到 NDEA实验 结束后 1周停止填喂。 第五组： 饮用水中 添加绿茶， NDEA实 验结束后一周开始 喂食，直到实验结 束。（实验周期： 从开始 NDEA实验起 26周后结束）。 第六组： NDEA实 验开始前 2周喂食 绿茶，直到实验结 束。 8 材料与方法 NDEA诱导肿瘤 采用 Wattenbery模型 实验二 实验员给予小鼠低剂量的 NDEA（ 10mg/kg ） 。小鼠被分为 9组，与第一次实验相似， 不同之处在于用了 两种浓度 的绿茶浸取液： 0.63%和 1.25%。饮用水中绿茶的浓度从第 一天开始逐步从 25%（第一天）提高到 50% （第三天）， 75%（第五天）， 100%（第 七天），自开始 NDEA实验起 24周后结束 该 实验。 9 材料与方法 NNK诱导肿 瘤 采用 Hecht模型 第一组：只喂水 第二组：只喂 0.6%的去咖啡因绿茶 第三组：只喂 0.6%的去咖啡因红茶 第四组为积极控制组 第五组：将 0.6%的去咖啡因绿茶作为唯一饮水源 NNK实验开始前两周喂食， NNK实验结束后再喂食 1周 第六组：将 0.6%的去咖啡因红茶作为唯一饮水源 NNK实验开始前两周喂食， NNK实验结束后再喂食 1周 第七组：在饮用水中加入 0.3%的去咖啡因绿茶 NNK实验开始后 1周喂食，直至实验结束 （实验周期： NNK实验开始后 16周结束）。 第八组：在饮用水中加入 0.6%的去咖啡因绿茶 NNK实验开始后 1周喂食，直至实验结束 。 第九、第十组与第七、第八组相似，不同是换成红茶 茶叶对 NNK诱导 肿瘤抑制效果实验 10 材料与方法 病理学分析 实验结束 后，小鼠 需要被全 部杀死 将胃移除 10%的缓冲福尔 马林溶液注入到胃 显微镜下 观察 肿瘤直径大于 0.5mm 脱水后嵌 入石蜡 苏木精荧光桃红染色 统计学分析。统计比较多组中肿瘤增生，利用方差分析，用 Newmankeuls范围检测，用 x2比较同组小鼠肿瘤发病。 11 结果 初始 始发后 进入实验 12 结果 初始 始发后 进入实验 13 结果 14 结果 15 结果 16 结果 17 讨论 在 NDEA模型中，用绿茶浸取液做灌胃处理，明显地 减少 了 肺肿 瘤 多样性 和 肺肿瘤发病率 以及贲门肿瘤的多样性 。但对于 贲门 肿 瘤的发病率并没有明显减少 。 在 NNK模型中，用去咖啡因的绿茶和红茶提取液，对 肿瘤 多样 性 有非常明显的 抑制作用 ，但对 肿瘤发病率并没有显著抑制 。在 始发后阶段，去咖啡因绿茶提取液对于肿瘤的 多样性 和发病率的 抑制作用要比去咖啡因红茶的 强很多 。 剂量反应关系只在部分实验中得到观察。在开始阶段或始发后阶 段给予小鼠绿茶浸取液， NDEA诱导肿瘤受到抑制。然而， 进入 实验阶段，绿茶的作用就不那么明显了 ，原因尚不明确。 18 讨论 茶叶提取物的成分对于癌症的抑制作用目前尚不明确。表 3的结果显示， 抑制肿瘤并不是咖啡因在起作用 。表 3证明红茶的儿茶酚含量比绿茶的要 低很多，但在抑制肿瘤方面的表现 并不逊于绿茶 。 新陈代谢排出 NNK也许是抑制肿瘤的机理之一 。 绿茶和红茶中提取出的 乙酸乙酯提取多酚 成分抑制了 NNK氧化成为氮氧 化物，酮和醇以及醛酮。另一些机理，例如 第二阶段酶捕捉最终致癌物 ， 都被认为是茶叶起到得作用。然而， NDEA和 NNK诱导癌变的 机理 仍需要 做研究。 茶叶中的抗氧化成分或许是 保护细胞免受氧化损伤 （脂质过氧化、 DNA 单键断裂、 8-羟基脱氧鸟苷生成）的重要角色。这些物质的生成可能引起 初始阶段和始发后阶段癌变。 ( )儿茶素 被 报道 可抑制大鼠肝细胞内 NNK诱发的单键断裂 。 EGCG可抑制在海拉细胞中由 TPA诱发