病毒性疾病标本采集要求

病毒性疾病临床标本 采集要求 1 主要内容 n 采集临床标本对于实验室检测的意义 n 临床标本的采集及种类 n 采集技术要求 n 标本采集情况及存在的问题 n 建议、要求 2 一、 临床标本对 实验室监测 的 作用和 意义 n 血清学监测： （ IgM/ IgG ） n 早期诊断 (发热出疹症候群 、脑膜脑炎症候群等 ) n 人群免疫状况评价、疫苗效果评价 n 病毒学监测： 病毒学监测与流行病调查资料结合在一起，可以 : n 追溯病毒传播途径 n 鉴定病毒来源，确定本土还是输入 n 区分疫苗、野毒引起的疑似病例 （麻疹； VDPV等） n 监测病毒的变异，开发新疫苗 3 二、临床标本采集的基本要求 n 标本是进行一起实验室检测的基础 n 标本采集质量（采集时间、部位）影响实验室检测的结果 n 标本采集应根据不同症候群采集不同种类的标本 n 标本具有不再获得性，采集的量应充分满足检测工作需要 n 采集的标本应有明确标示，并包含疾病所有的基本信息 n 标本的采集、运送、保存都应符合生物安全要求 4 临 床 诊 断 标 本种 类 血液 鼻 /咽 拭子 粪 便 尿液 疱疹 液 含漱 液 脑 脊 液 疑似麻疹 疑似 风 疹 （ CRS ） 疑似腮腺炎 疑似水痘 肠 道病毒（ 疑似脊灰） 疑似肝炎 疑似乙 脑 用于病毒学检测疑似病例标本采集种类 5 （一）、麻疹、风疹、腮腺炎标本 的采集要求 三、标本的采集要求 6 0 7 14 21 28 35 42-7-14-21 0 2 4 6 8 10 Rash Onse 出疹 t Days after rash onset 出疹天数 IgG IgM Infection 感染 Relative levels of antibody 相对抗体水平 必要日期 : 最后接种日期 出疹日期 出生日期 IgM sensitivity 70% IgM敏感性 70% virus excretion 排泄病毒 用于 IgM检测的 血清 标本要在初次接触病人时马上采集。 用于病毒分离及核酸检测检测的标本需在岀疹后 5天内采集。 对于岀疹 3天内的血清标本：大约 30% 的病例因未产生 IgM抗体不 能检测到，需要 采集第二份血标本或采用荧光定量 PCR检测病毒 核酸。 麻疹病毒感染人体后抗体动态和病毒的排泄 7 1、合格血标本的基本要求是：出疹后 28日内采集， 血清量不少于 0.5ml，无溶血，无污染； 2 8 条件下保 存、运送。 2、监测病例血标本采集率达到 80%以上；出疹后 3日 内血标本麻疹、风疹 IgM阴性者， 应在出疹后 4-28天内采 集第二份血， 与第一份血采集时间相隔 10-20天。第 2份血 标本的比例达到 80%以上。 3、麻疹、风疹暴发疫情 实验室确诊率达到 90%上。 4、技术要求： 采集病例出疹后 28日内静脉血 2 3ml ，加入到无菌试管中，标明采集日期和病例姓名、编号。 1、血标本的采集、运送、保存要求 （ 2014版麻疹监测方案） 8 5、 1500rpm/20分钟离心机分离血清。如果没有离心机，在 室温下凝固分离血清，或 2-8C 过夜直到血清完全析出。 6、血清标本运送前应可在 2 8 保存 ，如果 7日内不能运送 的，应置 -20 以下保存， 避免反复冻融（会对 IgM抗体的稳定 性产生不利影响）。 7、 全血标本不能冻结。 8、标本送检要符合生物安全条件要求。 1、血标本的采集、运送、保存要求 （ 2014版麻疹监测方案） 9 2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求 （ 2014版麻疹监测方案） 1、采集 出疹后 5天内 病例咽拭子或尿液标本，用于病毒分离 或病毒核酸检测。 2、努力采集 每例散发 监测病例病原学标本。当确认为麻疹或 风疹 暴发疫情时， 应至少采集疫情早期 5例 病例的病原学 标本，病例数小于 5例者应全部采集。 3、麻疹、风疹暴发疫情实验室确诊率达到 90%以上；麻疹、 风疹暴发疫情采集病原学起数占暴发疫情总起数的比例达 到 80%以上。 10 2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求 （ 2014版麻疹监测方案） 4、技术要点： （ 1）出疹当日至出疹后 5日采集。 （ 2）用无菌棉拭子适度用力在 咽后部及 两侧 ，反复擦拭，获得 上皮细胞。 （ 3）把拭子放入有外螺旋盖并装有 2ml 病毒运输液的冻存管中。 （ 4）常用的病毒运输液（ 商用 ）： pH 7.4 7.6的 Hank s液：在 90ml蒸馏 水中加入 10mlHank s，然后加入 10ml牛血清和 0.2ml 0.4酚红溶液 ，过滤消毒。加 1ml青 /链霉素溶液。 分装到无菌管中，于 4 储存备用。 细胞培养液： 含 2 -5%胎牛血清 DMEM 11 2、咽拭子、尿液标本的采集、运送、保存要求 （ 2014版麻疹监测方案） 5、咽拭子等标本采集后 48小时 内能送达 市级实验室者，可在 2 8 保存，否 则 -70 保存 。无 -70 保存条件者， 可在 -20 保存并在 1周内送达。 6、尿液标本采集： 出疹后 5天内，最好 采集晨尿（其他时段也可），用 50ml 无菌离心管采集 30 50ml尿液。采集 后的标本在 2-4C 保存，必需在 24h 内离心处理（ 1500rpm/20min） ,用 3 5ml病毒保存液悬浮沉渣，转移到 咽拭子保存管， -70 保存。 未经离 心处理不得直接冻存。 12 3、腮腺炎疑似病例标本采集 1、血清标本采集同上。 2、采集时间：发病 5天内采集咽拭子、腺管分泌液。 3、方法：咽拭子采集同麻疹。 腺管分泌液采集： 用无菌棉拭子，放患者口腔两边腮腺管开口处 ，放置 10min后，取出放装有病毒保存管中。 4、标本保存、运送要求同麻疹。采集后尽快送省级实验室进行病毒 分离。 13 1、 血清标本：散发病例，每年以市为单位血清标本合格采集数不少于 100份、水疱液标本采集数不少于 10份；若散发病例少于 100例，血清 标本合格采集率应达病例总数的 80%以上。 2、暴发病例，采集暴发早期 5 10例病例血清标本进行确诊，同时还要 采集 3 5例病例水疱液标本，进行病毒分离。 3、 水泡液采集（用于病毒分离及核酸检测）： 选择患者 5 10个 充盈 度较好的水疱，在无菌条件下用注射器抽取疱液，保存于装有 2-3mL 标本保存液标本管中 (同麻疹 )。 4、疱疹液采集后应在 4 条件下 24小时内运送至省级实验室，未能 24小 时内送达的，应置 -70 或以下保存，并于标本采集后 7天内送达省级 实验室。 （二）、水痘 -带状疱疹标本 的采集、运送、保存要求 14 一、 AFP病例标本的采集 1. 麻痹出现后 14天 内采集 ； 双份 大便 ；采集时间至少 间隔 24小时 。 2.每份标本重量 5克 （约为成人的大拇指末节大小）。 3.麻痹时间超过 3个月，可不采集大便标本 。 4. -20 冰箱储存，冷藏运送至实验室 。 （三）、脊髓灰质炎标本采集、 运输要求 15 标本的采集 -2 二、 AFP病例接触者标本的采集 以下情况应采集 AFP病例的 5名接触者（原则上 5岁以下）大 便标本 1.每年 AFP病例大便标本数少于 150份的省。 2.未采集到合格大便标本的 AFP病例。 3.根据临床或流行病学资料高度怀疑为脊灰的 AFP病例。 4.死亡的 AFP病例。 16 标本的采集 -3 三、高变异株 AFP病例、 VDPV病例、输入性 脊灰野病毒病例接触者： 标本采集要求见 输入性脊灰野病毒病例和脊灰疫 苗衍生病毒循环病例应急处理预案 17 脊灰标本的运送 1.采集后 7天内送达省级脊灰实验室 。 2.冷藏运送，运送时冰袋不少于 4个，在送达省脊灰 实验室时应带冰且包装完整。 3.标本的运送同时要符合实验室生物安全有关要求。 4.采集的标本应有完整的登记资料（采样单），一并 送达省脊灰实验室。 18 运输器材 1.单个病例的标本容器应单放在盒或塑料袋内，并做有效 的封闭。 2.用于运输标本的器材每次用过后毁掉或者消毒后再用。 3. Polio标本不能和疫苗同放在一个冷藏器中。 4.用于计免中携带疫苗的冷藏箱可用于标本运输，但不可 再用于装运疫苗。 19 1.血清标本采集： 发病 7天 内采集，血液标本量应 3ml。 如第一份血液标本在发病 7天内采集，且乙脑 IgM抗体检测阴 性，应于 7天后采集第二份血液标本 。 血清装于带螺旋盖的血清管中保存和送检，血清管上贴好写 有患者个人资料的标签 。 血清应低温（ -80 ）保存，避免反复冻融；标本要冷藏运 送（最好用干冰或液氮），同时要符合实验室生物安全和 相关运输管理要求。 （四）、流行性乙型脑炎检测标本的 采集、保存与运输 20 2、脑脊液标本采集： 需要专业的临床医生来完成。 发病 1周内采集，每份 1 2ml 。 低温（ -80 ）保存，避免反复冻融；标本要冷藏运送（最好用干冰 或液氮），同时要符合实验室生物安全和相关运输管理要 3、蚊虫样本采集： 地点： 人房、猪圈、稻田； 时间： 早晨 5点之前和傍晚 7 点之后。 鉴定分类： 将蚊虫于 -20 冰箱中冷冻半个小时左右，将蚊虫冻晕， 以便分拣；对蚊虫分类时，要在冰排上进行；分类完毕， 50只为一批 ，迅速装入冻存管，并立即放入液氮中保存。 用液氮进行运输 。在蚊虫标本采集的整个过程中都要保持冷链，注 意补充液氮。 （四）、流行性乙型脑炎检测标本的 采集、保存与运输 21 （四）、流行性乙型脑炎检测标本的 采集、保存与运输 4、猪血样本采集： 选择上年 11月份以后出生、尚未经历乙脑流行期的仔猪 30 头作为观察对象。 每头猪从流行季节前的 3月份开始，连续每旬采耳静脉血 一次，直到 10月下旬。 也可采集屠宰场所宰杀的未经过上一次乙脑流行季节的猪 血清，每次不少于 30份，从每年的 3月份开始采集直到流 行季节结束。 低温（ -20 ）保存，冷藏运送。 22 四、标本采集情况、存在的问题 23 市 监测病 例数 年化排除病 例报告发病 率 (/10万 ) 及时性指标 特异性指标 麻疹病毒分离及核酸检 测 48小时完整调查 血清标本 散发病例血标本 采集 咽拭子标本数 病毒分 离 阳性数 核酸 检测 阳性 数病例数 调查率 3日内送达 率 结果 4日内报告率 病例数 采集率 济南 152 1.11 139 91.45 100 98.57 131 90.97 青岛 840 7.77 834 99.29 95.1 95.15 820 99.64 135 47 111 淄博 28 0.46 27 96.43 96.88 96.77 24 100 13 5 11 枣庄 214 5.23 211 98.6 91.04 81.28 200 99.5 48 9 22 东营 27 1.44 24 88.89 96 96 24 88.89 8 2 8 烟台 94 1.54 91 96.81 96.77 97.78 77 96.25 40 9 37 潍坊 242 2.01 234 96.69 94.07 98.67 227 96.19 70 3 35 济宁 149 1.72 131 87.92 87.02 95.83 126 87.5 46 4 32 泰安 150 3.18 139 92.67 92.14 90.3 99 90.83 18 4 5 威海 110 3.75 109 99.09 98.95 96.81 79 84.95 71 27 56 日照 149 2.00 142 95.3 92.68 77.97 92 77.97 84 33 49 莱芜 13 0.68 12 92.31 100 100 7 87.5 2 临沂 31 0.44 28 90.32 85.71 80 25 89.29 2 德州 224 4.98 211 94.2 99.53 100 192 95.52 28 3 21 聊城 38 0.35 33 86.84 100 100 28 84.85 7 1 7 滨州 37 0.71 30 81.08 90.91 83.33 24 82.76 2 1 1 菏泽 41 0.22 27 65.85 55.17 52.94 25 83.33 合计 2539 2.26 2422 95.39 94.28 93.5 2200 94.5 573 148 395 2015.1-5麻疹检测指标完成情况 24 四、标本采集情况、存在的问题 25 四、标本采集情况、存在的问题 26 年份 病 例 数 血 标本 采集数 采集 率 （ %） 不同时间采集数 3天内 4-28天 28天 2014 5486 5356 97.63 64211.99% 467087.19% 120.20% 2015.1- 5 3239 3060 94.47 588 19.22% 2462 80.46% 8 0.26% 2014-2015.5麻疹血清标本采集情况 27 年份 病例 数 咽拭子 时间分布 采集数 采集 率（ %） 岀疹 5天 2014 5486 1835 33.45 131471.60% 43729.23% 2015.1-5 3239 1283 39.61 106783.16% 21016.84% 2014-2015.5全省麻疹疑似病例 咽拭子标本采集情况 28 存在问题 1、麻疹 标本的采集情况： 近年来麻疹疑似病例标本采集率、合格标本采集率以及采集质 量有很大改善，但咽拭子病原学标本整体采集率仍较低，岀疹 5 天后采集的咽拭子仍占较高的比例，采集合格咽拭子标本工作 需要进一步加强。 麻疹血清标本、咽拭子标本同时采集的