生化基本名词定义

一基本名词 1.单试剂:只有 R1 试剂,如:Ca,Mg,ALB,TP,当样本加入到试剂中时，即刻开始反应。 2.双试剂：有1,R2 配套两种试剂，样本首先加入到试剂中参与反应，育温后再加入 R2,再同 反应来达到检测的目的。通常1 与样品反应达到去除干扰或为加入2 后的进一步反应做准备的目的。 3 加样模式：不同的仪器有不同的加样方式： 3.1双试剂加样模式:R1 加入后，加入样品（S） ，开始为下一步加入 R2 后的反应作准备，再经 一定的时间后，加入 R2，开始进行检测所需要的反应。 3.2单试剂加样模式: 先加入 R1，再加入 R2，经过一定的时间再加入样品，再进行检测反应。 4单试剂与双试剂的界限：在某些双试剂,由于各试剂成份及所参与反应的目的的不同,有的双 试剂可以事先混成单试剂,但有的双试剂只能用双试剂通道来做。如： 4.1 R1 用来去干扰的目的:R1 试剂用来清除血清中的干扰物，防止 R2 与血清中的干扰物反应。 如化学氧化法的 TBIL，DBIL，CR（酶） ，LDL-C 等。 4.2 单试剂不稳定：R1,R2 中的成份相互影响发生反应,使试剂中色源提前反应,引起起始吸光度及 吸光度变化率的改变等。 （CHE,GGT） 4.3 仪器自身特点：同时试剂的应用也要考虑到检测仪器的特点，因为有的仪器（如半自动，手 工）它没有双试剂的加样模式，那它只能用单试剂来做，一般双试剂加样模式的仪器也可以单试剂加样 来做，但是单试剂加样的仪器就不一定能做那些只能双试剂模式的检测。 5.标准品：实际上是一个或几个已知浓度的样本，它在检测中作为一个或几个参照物，使以后的所 有的检测都与之比校，以此来得到其它样本的浓度。 6.标准品的定义： 6.1 国际标准品 由 WHO 或相应组织标定的，用肯定的、公认的、准确的物理或化学方法测定的 定值材料。 6.2 国际生物学活性标准品 根据生物学反应由 WHO 或相应组织标定的国际活性单位的材料。 6.3 参考标准血清 国家标准化组织根据国际标准化生产的法定材料。标准品明确赋值，通过校正 后，得到较为规范的标准曲线，以此得到代表检测样品浓度与该样品吸光度之间的函数关系。 7 标准品稳定性的重要性：标准品作为其它样品检测的标准，必须保持它的准确性和稳定性，一 旦标准出现问题，后果很严重。在保存一定时间后，如果标准品的实际浓度降低了，那么定标（校准） 后检测样品时该测值就会偏高，反之，如果标准品实际浓度变高了，那么测定值就会偏低。所以标准品 在运输，储存过程中一定要慎重，以免其变质。 8 质控品：质控血清是已有靶值的血清，并且对它的测定有一定允许的偏差，在每次的常规检验中 加入一份或数份，通过所得结果来了解本次检验的情况。质控血清检验的结果如能控制其误差在一定范 围内，就说明该检验没有发生不允许的误差。如果出现超过允许误差范围的异常结果，提示该检验不合 格，应寻找原因，纠正后，重检待测标本。因此质控血清在质控工作中起重要作用。同样质控品必须要 与试剂的体系一致，如果两种方法学或者两个体系的试剂之间的质控就不一定能够做到相互符合。所以 试剂与质控必须一致使用。 9 实时反应曲线：在自动生化分析仪一定周期的监测下，通过时间与相对应的吸光度值之间的轨 迹，描绘得到的曲线。通过实时反应曲线真实地反应了试剂与样品反应的程度。 10 标准曲线：在标准品定标的反应中，标准曲线就是在线性范围内,标准品吸光度与浓度成比例的 一条线，多点定标常为曲线，一点定标为一直线。它们作为以后样本检测的一种规范。 11 标准曲线与实时反应曲线的关系：标准曲线是针对标准品浓度与吸光度之间的关系而言的， 表示该反应的函数关系式，所有的样品反应都要依据这个关系。而实时反应曲线是对每一个样品来说的， 只表示该样品反应的程度，只是吸光度与时间的一种关系。 一般对一个新的试剂来说，总是先做标准品定标（校准） ，再进行相应的样品检测。 11 多点定标和一点定标：通过多个浓度有一定梯度的标准液来定标（校准） ，规范出标准曲线的 一定的趋势，以此来得到浓度与吸光度的函数。多点定标大多用于非线性校准，得到的标准曲线一般为 二次函数的抛物线类型。只用一个标准品来定标，得到的函数为 Y（浓度）=AX(吸光度)+B，是一条简单 的直线。 13 测试量(Test): 通常在生化分析仪上对病人检测所用的试剂的用量很小,一般总共为 240-350ul 左右,所以根据一盒试剂来说(大约有 150-300mL),就可以换算成多少的测试量。同样可以来说明它有每 mL 可以做多少的人份，一盒可以做多少的 Test,或者多少人份。 14 灵敏度1）为试剂检出被检物质的最低量的能力； 2）临床应用的灵敏度用疾病患者试验阳性的百分率表示 15 特异性 指试剂正确检定不存在的被检物质的能力（无假阳性） ，以无病者试验阴性的百分率表 示。 16 特异性与灵敏度的评价方法：对试剂进行灵敏度与特异性评价，首先需要收集有关的病人血 清，然后用公认的检测该项标志物最可靠的试剂进行测定，以确定其为阳性或阴性。通过对照得到试剂 灵敏度与特异性的指标。 公认方法测定 合计 + abb 受检试剂结果 - cdd 合计a+cb+db+d 表中 a 为真阳性，b 为假阳性，c 为假阴性，d 为真阴性。 被评价试剂的各项性能指标按以下分式计算： 灵敏度(%)=a/(a+c)100% 特异性(%)=b/(b+d)100% 符合率(%)=(a+d)/(a+b+c+d) 100% 一般认为灵敏度或特异性90%为良好。符合率是综合灵敏度和特异性的指标 17 准确度：是指测定结果与真值（或靶值）接近的程度。准确度不能以数字表示，往往用不准确 度来衡量。测定结果与靶值的偏离程度称为偏差，它表示该项检验的不准确度。 绝对偏差=检验的均值-真值（或靶值） 相对偏差=绝对偏差真值（或靶值）100% 18 精密度：是指对同一样本重复测定时，每次测定结果与平均值的接近程度，即重复测定值之间 的符合程度。 19 稳定性 试剂在规定条件下能储存的时间，一般采用破坏性试验即将试剂存放于 37保存，定 期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下降为止，通常认为 37每稳定一天相 当于 4-10保存一个半月。 20 开盖稳定性特例： 20.1 CO2: 试剂在开盖情况下，空气中 CO2 会进入试剂中与试剂发生反应，与试剂中 NADH 反应， 便使空白吸光度达不到特定的要求，引起检测能力的降低。使得测定值偏低。 20.2 ALP，CR（苦）,Mg, HBDH, BUN, 开盖后试剂的 PH 会因为空气中 CO2 的进入，发生改变， 也会引起测定值的偏差。 21.线性范围；试剂在检测样品时，测定值落在此范围内时测值在一定的（可以允许的误码差范围 内）,超过该区间时,则准确度将无法保证，测定值发生较大的偏差。所以线性范围也是试剂优良与否的评 价之一。 22.安全性：指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。 23.经济性：试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本而市场价格比较合理。 24.干扰：血清中某些成份与要求被测定的物质结构相仿，化学性质相似，或者同样可以与试剂成 份发生反应，使检测过程中产生意外的变化，产生误差。如脂血干扰，溶血干扰，脂浊干扰，黄疸干扰。 此类为血清对试剂的干扰。同时也会发生不同的试剂之间的干扰。 24.1 TBA 与胆酸钠：在一些常规的试剂中，如 TG，TCH，GSP 中其成份通常含有胆酸钠，如果 反应杯没有清洗干净，残留的胆酸钠就会与 TBA 试剂反生反应，与血清中的 TBA 相比，使检测的值发 生异常的偏高。 24.2 TP 与铜：在 TP 试剂中有铜离子的存在，同样要是没有清洗干净反应杯的话，残留的铜离子 就会与试剂反应，也使测定的值发生偏高。 24.3 ALP 与锌：在 ALP 试剂中有锌离子的存在，同样要是反应杯没有清洗干净，残留的锌离子就 会与锌试剂反应，也使测定的值发生偏高。 24.4 TBIL 的强氧化与一些酶试剂：化学氧化法的胆红素，其中有氧化力较强的氧化剂，在通 道中如果清冼不完，就会有残余留在反应杯上，如果一些酶试剂在此杯进行下一次检测，残余的氧化剂 就会对这些项目发生干扰。如 TG，TCH，CR，UA 等。 24.5 介质效应 25 交叉污染：某些试剂成份中的酸碱度不同，氧化还原能力各异，相互之间会有反应，而且在多 数情况下全自动生化分析仪通过自动蒸馏水一次冲洗不能解决反应杯内的试剂残余，因此会对下一次检 测造成污染，使用全自动生化仪随机组合检测项目时，某些项目不能随心所欲、必须注意位置的特别设 置。原则是将具相同反应原理放在一起，相同酸碱度反应放在一起；试剂内含有被测成份的和该项目相 隔两个项目位置以上。 26 参数设置：根据试剂本身特定的性质来监测，控制反应，最大限度的得到检测结果的准确性。 27 参考值：以前叫正常值确良通过对该项目正常人群检测的临床数据来制定的，规定出正常人该 项目值的大致范围。由于许多因素（人种，地区，实验室仪器，方法学，各生产厂家的试剂等）都会影 响到正常值的限定。所以建议各医院应根据本地区实际情况建立自己的参考值范围。 28 速率法：在检测反应中，反应检测到的吸光度随时间的变化呈现出有固定梯度的升高或降低。 对低浓度的样品，它的吸光度随时间变化的慢， （速率低） ，而高浓度样品，它的吸光度随时间的快（速 率高） 。 29 终点法：试剂与样品反应之前的吸光度在某一定的水平，开始反应后，在主波长下出现一个最 大的吸光度，得到一个较明显的吸光度的落差，所以通过标准品吸光度变化值可以限定其它样品的浓度。 终点法中的反应时间是指开始反应后，试剂与反应物反应到达一定的稳定点，试剂与反应物不再反应， 吸光度不再随时间的变化而发生改变，既到达了反应平衡。其间所要的时间就是反应时间。 30 试剂空白：严格的试剂空白与正常测定的唯一区别就是其样品是水。而奥林巴斯生化仪由于是 先加 R1 再加样品然后再加 R2，因此就能够把加了样品后的溶液本底也消除掉，这就是两点终点法，有 时把这种含有样品但不含 R2 的溶液本底也叫试剂空白，试剂空白的意义 就在于消除试剂本底的干扰。 试剂空白的吸光度就叫空白吸光度 31 水空白：（杯空白）：以足量的纯水灌注比色杯而测得的 OD 32 空白速率：用速率法的试剂因为某些成份自己会发生较缓慢的变化,所以用水作样品时也会发生 吸光度的变化,所以用水作样品得到的试剂吸光度的变化率即空白速率. 33 空白值：当水作为样品得到空白速率反应在浓度上就是空白值。 34 K 因子：酶活性测定校准问题中有的主张不进行校准而采用固定 K 值，有的以为应该进行校准. 常用 K 值有以下几种： 34.1.理论 K 值：根据理论摩尔消光系数（）来计算，如 NADH 为 6.22103。 34.2.实测 K 值：由于仪器波长的精密及径宽度不同，而应根据实测 值来设定 K 值 34.3.厂家给的 K 值：厂家生产试剂盒说明书上提供的 K 值（有的厂家提供 6.3103） 34.4 校准 K 值：通过校准物直接校准得到的 K 值 35 校准模式：用它来规范吸光度与浓度之间的函数关系式，比如线性：一点校准（Y=KX+b） ，二 点(Y=aX+b,通过水来计算得到 b,通过标准品来得到 a.)。非线性：多点校准（Logit-log(3P), Logit-log(4P), spline）等,用二次函数或指数来描绘校准的曲线与公式。 36 线性范围与试剂样本比：对一些需要通过校准的试剂而言，如果改变试剂与样品的比例，线 性范围也会相应的发生变化。比如，同一 TG 试剂的样本与试剂比由原来的 1：100 改成 1：200 后，那么 它的线性高值就可相应的达到原来的 2 倍。同理，如果把比例变为 1：50 则线性范围也相应地变成为原 来的一半。所来试剂样本比与线性范围成相应的比例。 37 前带效应： 在免疫比浊法中，多点定标有时会出现高浓度的标准品得到吸光度反而比前一点 标准的吸光度还要低，这样便出现了前带 效应。如图，第五点标准品浓度 8 得到的 吸光度比前一点浓度 6 的吸光度要低。产 生前带的原因就是抗体的效价不够高，反 应能力不足。出现前带效应后，就会使得 高浓度样品的检测值偏低，无法检测出高 浓度样品的真实浓度。 38 乳胶增强免疫浊度：胶乳增 强免疫浊度测定（Latex enhanced trubidimetric Immunoassay LETIA）是近 年来免疫检测领域出现的一种新的免疫检 测技术。 LETIA 的基础是胶乳凝集试验。其原理是包被了抗原或抗体的胶乳微粒（免疫胶乳） ，与标本中相应 混合系统形成一定浊度，浊度增加的程度与标本中被检物浓度成正比关系，在一定波长下进行浊度测定， 即可测出标本中被检物的含量。 一般情况下，抗原抗体反应后形成免疫复合物，可用浊度法定量测定，但形成抗原一抗体复合物需 要较长时间。如把可溶性抗原或抗体通过适当方法，如物理吸附或化学交联法包被于胶乳微粒表面，由 于这种微粒是化学性能稳定的固相载体，不溶性抗原抗体复合物可快速地在载体表面之间形成，提高 了抗原抗体反应的敏感性，固此称之为。 39 影响的主要因素是： （一）包被胶乳微粒的抗原或抗体的纯度对测定的敏感性和特异性有直接影响。不纯的抗原或抗体 将导臻前带现象，线性范围狭窄和非特异反应。因此采用单克隆抗体和亲和层析技术纯化抗原或抗体是 提高 免疫胶乳敏感性和特异性的主要方法 （二）由于测定用的波长与粒径大小有关；因此粒径的均一性是影响测定精度一个重要因素。在合 成胶乳时应严格控制各种理化条件，使合成的粒径精确地控制在 0.1-0.2m,并具有稳定的化学性能； （三）缓冲液和稀释液应选择最适和电解质浓度，并应加入适当的保护剂，以提高免疫胶乳的 稳定性。 40 胶乳凝集试验。其原理是包被了抗原或抗体的胶乳微粒（免疫胶乳） ，与标本中相应混合系统 形成一定浊度，浊度增加的程度与标本中被检物浓度成正比关系，在一定波长下进行浊度测定，即可测 出标本中被检物的含量。 0 2 4 6 8 0 2 4 6 8 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0246810 吸光度 标准