致病性弧菌及检测

致病性弧菌及检测致病性弧菌及检测 发布日期：2010-09-01 浏览次数：991 一、致病性弧菌的流行病学1、致病性 在众多的弧菌之中，致病性差距很大。 O1型霍乱弧菌被 WHO 定为国际 一、致病性弧菌的流行病学一、致病性弧菌的流行病学 1、致病性 在众多的弧菌之中，致病性差距很大。O1型霍乱弧菌被 WHO 定为国际检疫菌，而同 时有许多种和生物型根本不具致病性。 生物分类学上的霍乱弧菌有许多血清型致病性很弱、甚至不具致病性。 1995年美国临床微生物手册第六版明确了弧菌属的致病菌为12种，它们的名称及 致病情况如下表所示： 表1. 致病性弧菌及所致疾病 临床表现弧菌种类 胃肠炎创伤感染耳感染败血症 O1型霍乱弧菌 O139型霍乱弧菌 拟态弧菌 河弧菌 副溶血性菌 霍利斯性菌 + + + + + + + + + + + + 溶藻弧菌 弗尼斯菌 创伤弧菌 麦契尼可夫弧菌 海鱼弧菌 辛辛那提菌 鲨鱼弧菌 （+） + + + （+） + + （+） + + （+） + + + + 注：+：常见；+：不常见；+：罕见；带括号者为肠道感染的病因作用尚未确定。 12种致病性弧菌的致病性差别较大，所致疾病的种类和毒性差别较大。在这12种致病 菌中，最重要的，也是出问题最多的 是 O1型霍乱弧菌、非 O1型霍乱弧菌、副溶血弧菌和创伤弧菌。国内外均是如此。美国 FDA 在“食品微生物控制”中特别强调了这 四种菌，欧洲的 NMKL 也对这四种菌提出了特别要求，并有专门方法 NMKL No.156颁布。 2、美国 FDA 对霍乱、副弧、创伤弧菌的认识（见表2） 3、致病性弧菌的控制 弧菌和其它 G-菌一样，是嗜温型菌，生长需较高的温度，高水活度，中性 pH。与其 它不一样的是，生长需要盐，故而十分耐盐， 但轻微热处理很易将其杀灭。 蒸煮控制，防止二次污染，防止时间/温度控制不当（注意冷藏） ，控制产品来源。 二、致病性弧菌的分类学位置和生物学性状二、致病性弧菌的分类学位置和生物学性状 1、致病性弧菌的分类 根据伯杰氏细菌手册第九版的描述，12种致病性弧菌的分类学位置如下表所示： 第5部分 革兰氏阴性兼性厌氧杆菌 弧菌科 弧菌属 致病性弧菌 伯杰氏细菌手册将细菌分为35部分（Group） ，第5部分为革兰氏阴性兼性厌氧杆菌， 包括弧菌科、肠杆菌科、巴斯德氏菌科、 其他属，弧菌科包括弧菌属、发光杆菌属、气单胞菌属、邻单胞菌属和 Enhydrobacter 属。 弧菌属共有37个种（变种） ，其中已明确有12个种对人类有致病作用。弧菌属的种除了 霍乱弧菌和拟态弧菌之外均为海洋性细菌， 即有嗜盐性；即使是这两种菌， Nacl 的存在也能促进生长。 2、致病性弧菌的生物学性状 （1）致病性弧菌的基本特征 根据分类学位置，致病性弧菌首先属于弧菌科，所以具备弧菌科的所有特性：革兰氏 阴性、兼性厌氧， （弧）杆状。 作为弧菌属，可从下列特性与弧菌科的其他四个属区别开来：DNA、G+C、 MOL%:38-51、O/129敏感：+、脂酶：+、 D-甘露醇 发酵：+、端生存鞘鞭毛+（其它没有） （2）致病性弧菌生理生化特性比较 除此之外，12种致病性弧菌各有其不同的生理生化特征（见表3） ，这些特征是检测和 鉴定的依据和基础。 表2.FDA/CFSAN 对弧菌的描述 菌 名 定 义急 性 病 名 病 症感 染 剂 量 诊 断 相 关 食 品 发 病 率 目 标 人 群 食 品 分 析 宿 主 染 病 类 型 创 伤 弧 菌 只感染 人和灵 长类动 物，已 从整个 美国西 海岸及 内陆盐 湖分出， 包括水、 沉积物、 浮游生 物、贝 类 伤 口 感 染、 胃 肠 炎、 原 发 性 败 血 病 16小时 内发病， 健康人 患胃肠 炎，特 殊生理 状况的 人患原 发性败 血病该 病死亡 率大于 50% 健康 人胃 肠炎 感染 剂量 不清， 易感 人群 小于 100个 从 伤 口 腹 泻 物 中 培 养 出 该 菌 牡 蛎、 蛤 蜊、 蟹 等 未 有 大 爆 发， 零 散 的 多， 特 别 是 在 温 暖 月 份 所有人 易患胃 肠炎， “特殊 生理状 况”的 人易患 原发性 败血病 与粪便 分离方 法同， 所有分 离物均 有致病 性， 港 湾 水 域 感 染 副 溶 血 性 弧 菌 可从海 水和河 口湾的 水体、 鱼类、 贝类中 分出 副 溶 血 性 弧 菌 相 关 的 胃 肠 炎 腹泻、 腹部痉 挛、恶 心、呕 吐、头 痛、发 烧、畏 寒，多 为中等 反应 大于 100万， 服解 酸药 的更 低 从 腹 泻 粪 便 中 分 离 出 该 菌 鱼 类、 贝 类 温 暖 月 份 发 生 过 大 爆 发， 单 个 病 例 时 有 发 生 所有食 用了生 的或加 工不当 的鱼类 和贝类 的人 必须验 证分离 物的致 病性 港 湾 水 域 感 染 霍 乱 弧 菌 亚洲多， 沿海和 河口湾 可能有， 霍 乱 脱水、 伴有淘 米水样 便、腹 100万， 有抗 酸性 结核 从 腹 泻 粪 贝 类 饮 料 美 国 73 年 所有人 都有可 能，免 疫系统 由于致 病性的 和非致 病性的 污 水、 人 感 染 O1 型 个例报 道时有 发生 部痉挛、 呕吐、 休克甚 至死亡 病的 更低 便 中 分 离 出 该 菌 各 种 食 品 来 仅 有 80 例 发育不 全，胃 酸少， 营养不 良的更 甚 都存在， 故需做 霍乱毒 素实验 霍 乱 弧 菌 非 O1 型 只感染 人和灵 长类动 物，存 在于美 国海与 河口湾， 称非霍 乱菌和 非凝集 霍乱菌 胃 肠 炎、 非 O1 型 霍 乱 腹泻、 腹部痉 挛、发 烧、 25%的 呕吐、 大便带 血和粘 稠物 猜想 是大 剂量 （大 于100 万） 才能 引起 疫病 从 腹 泻 粪 便 中 分 离 出 该 菌 贝 类 特 别 是 牡 蛎、 各 类 食 品 未 有 大 爆 发， 单 个 病 例 时 有 发 生 所有食 用的个 体，但 肝硬化 和免疫 抑制的 个体可 能引起 严重并 发症如 败血症 很多为 非致病 性的， 需做致 病性实 验，可 用动物 实验做 港 湾 水 域 感 染 表3致病性弧菌的鉴别性状 Nacl 生长产 酸 T C B S m C P C A G S 0 % 3 % 6 % 8 % 1 0 % 42 生 长 蔗 糖 D 纤 维 二 糖 乳 糖 阿 拉 伯 糖 D 甘 露 糖 D 甘 露 醇 氧 化 酶 O N P G VP 试 验 精 氨 酸 二 氢 酶 赖 氨 酸 脱 梭 酶 鸟 氨 酸 脱 梭 酶 O / 1 2 9 1 0 u g O / 1 2 9 1 5 0 u g 明 胶 酶 脲 酶 溶 藻 弧 菌 YN G K A -+ + + - -+ + + -+- + + R S + - 霍 乱 弧 菌 YP K a + +-+ - -+ + + + V- + + S S + - 辛 辛 Yn d n d -+ -+ + - + -+ + +- + - R S - - 那 提 弧 菌 海 鱼 弧 菌 GN G n d -+V - + - -+ -+ -+ V - S S - + 河 弧 菌 YN G K K -+ V -V+ + - + + + + -+ - R S + - 弗 尼 斯 弧 菌 YN G K K -+ + -+ - + + + + -+ - R S + - 鲨 鱼 弧 菌 Yn d n d -+ + -nd+ + - -+ + + - + + R S + + 霍 利 N G N G K a -+ -nd- - + -+ - - n d n d - - 斯 弧 菌 麦 氏 弧 菌 YN G K K -+ V -V+ - -+ + -+ + + - S S + - 拟 态 弧 菌 GN G K A + +-+- - -+ + + + - + + S S + - 副 溶 血 弧 菌 GN G K A -+ + -+- V - + + + - + + R S + V 创 伤 弧 菌 GY K A -+ -+- + + -+ V + + - + + S S + - 嗜 水 YN G K K + + -VV + V VV + + + + V - R R + - 气 单 胞 菌 类 志 贺 邻 单 胞 GN G n d + +-+- - -+ -+ + + S S - - 注：Y：黄色；G：绿色；P：紫色；NG：不生长；nd：不定；K：碱性；A： 酸性；a：微酸；+：80%以上阳性； -：80%以上阴性；V：不同的菌株反应不同；S：敏感；R：抗性 3、霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌的部分生长和耐热参数 表4. 霍乱弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌的部分生长和耐热参数 生长参数热致死参数 温度 参数 菌名 最 低 温度 最 高 温度 最 小 pH 最 大 pH 最 小 QW 最大 含盐量UCUF D 值介质 霍乱弧 菌 N/A45 N/A10N/A6601402.65蟹肉 副溶血 5 444.5110.9310491221.15盐溶 弧菌7液 创伤弧 菌 10N/A4.5N/AN/A8 三、致病性弧菌的检测方法三、致病性弧菌的检测方法 1、具有代表性检验方法简介 （1） 、FDA 的细菌学分析手册 霍乱、付弧、创伤弧菌和其他弧菌（1995 1998修订）分别着重介绍了霍乱弧菌、副溶 血弧菌、创伤弧菌的方法。 用 PCR 方法检测产肠毒素的霍乱弧菌叙述了霍乱肠毒素（cholera Toxin (T)基因 （2） 、AOAC 官方分析方法 牡蛎中的霍乱弧菌：升温富集法（1995.a） 创伤弧菌的脂肪酸气相色谱鉴定法（AOAC.1995.b） 美国 midi 公司生产的 shelock 微生物鉴定系统。 （3） 、ISO 方法 副溶血弧菌的检测方法（ISO8914：1990E） （4） 、NMKL 食品中致病性弧菌的检测和计数（NMKL N0156）介绍了霍乱弧菌、副溶血弧菌、创 伤弧菌、溶藻弧菌的检测程序。 （5） 、不同国家的方法 日本、瑞士等国均有相应检验方法。 2、致病性弧菌的检测方法 以上介绍的方法均是以单一或少数目标菌（NMKL 为四种）为目的的设计的程序。鉴 于国外对出口食品中多种致病性弧菌的要求和重视， 有必要探讨“同一程序同时检测多种弧菌”方法