药学论文开题报告

郑 州 铁 路 职 业 技 术 学 院 毕业论文开题报告 论文题目： HPLCHPLC 法测定伏立诺他有关物质和含量的研究法测定伏立诺他有关物质和含量的研究 系 部： 药 学 系 专 业： 药 学 班 级： 药 学09A1 姓 名： 曹 杰 指导教师： 韩韩 芬芬 2011 年 09月 10 日 课题名称HPLC 法测定伏立诺他有关物质和含量的研究 研究的主要目的和意义 vorinostat (商品名 Zolinza) 是 Merck 公司开发的世界上第一个抑制组蛋白脱乙酰基酶( his2tone deacetylase ,HDAC) 的新型抗癌药物,该药于 2006 年 10 月 6 日获得美国 FDA 批准上市,用于其他药物 治疗时或治疗后仍不能治愈、或恶化、或病情反复情况下的转移性皮肤 T 淋巴细胞瘤。vorinostat 化 学名: N-羟基-N 苯基辛二酰胺;英文名: N-hydroxy-N-phenyloctane-diamide vorinostat 属于组蛋白去乙酰化酶抑制剂类抗肿瘤药物,低浓度( IC50 86 nmolL - 1) 即可以 有效抑制组蛋白脱乙酰酶 HDAC1 、HDAC2 、HDAC3 和 HDAC6 的活性,抑制组蛋白次乙酰化,因而从基因水 平调控细胞周期,阻断癌细胞基因复制,并激活其凋亡基因,达到抑制和杀灭癌细胞的效果。但 vorinostat 的抗癌机制仍在深入研究之中,其具体作用机制尚不完全清楚6 - 7 。两项临床试验证明 了 vorinostat 的安全性和有效性,其中包括 107 名接受其他药物治疗后又复发的 CTCL 患者。按皮肤损 伤改善标准评分等级的判断,接受 Zolinza 治疗的患者中 30 %有所改善,疗效平均持续 168 d。 一些生物学数据已经证明了 vorinostat 在皮肤癌，前列腺癌治疗中的有效性。而且近年研究 vorinostat 不仅可以单独作为肿瘤治疗药物,还可以与其它抗癌药物联合用药, 减少对正常细胞的毒性, 具有增效作用。可与转录调节因子(如 52 杂氮 222 脱氧胞苷、视黄酸、mRNA 转录抑制剂 flavopiridol)51- 53 、凋亡受体配体(如阿霉素、长春新碱、依托泊苷、多烯紫杉醇)54- 56、化 疗药物(如抗代谢药吉西他宾、全反式维甲酸) 57,58以及激酶抑制剂、放射线等联合用药。近年来研 究发现 vorinostat 还可影响到有丝分裂、DNA 复制和修复以及调控非组蛋白的蛋白质乙酰化程度。但是该药用于临床治疗 癌症仍然需要解决一些问题如: 抑制剂对 HDAC 酶系的选择识别作用、选择最佳药用剂量、治疗周期以 及寻找更多可以促进这种药抑制作用的物质等。毋庸置疑,随着对 HDACIs 抗癌机理的深入研究, vorinostat 将会有广阔的应用前景。 伏诺立他目前在国内还没有上市，我们准备仿制该品种，建立该药的质量标准，用建立的标准对原料 和制剂进行有关物质和主药含量进行研究。 采用的研究手段及文献综述 根据破坏试验的结果，结合伏立诺他合成工艺，建立伏立诺他有关物质检查方法，并对其进行方法 学验证。 1仪器与药品 Waters 996 光电二极管阵列检测器，Waters Empower 色谱工作站，试药及其中间体均由南京海纳医 药科技公司提供 2. 色谱条件的建立 2.1 检测波长的选择 取伏立诺他适量,用流动相制成每 1ml 含 15g 的溶液,照分光光度法(中国药典 2005 年版二部附录 A)在 200400 nm 波长范围内扫描测定 2.2 系统使用性试验 色谱柱:Diamonsil C18 ( 250 mm 4. 6 mm, 5m)色谱柱为分析柱;乙腈- 0.1%磷酸溶液（三乙胺 调 PH3.0）为流动相，不断调节流动相比例，梯度洗脱，流速为 1.0 ml min- 1 , 检测波长为 241nm, 柱温 30, 进样量: 20l。 根据合成工艺,伏诺立他成药中可能引入一系列的合成中间体及原料还有杂质，取本品可能带入的杂 质、中间体分别加流动相适量溶解;另取杂质中间体及伏立诺他适量,用流动相制成适宜浓度的溶液,精密 吸取杂质，中间体与吡非尼酮混合溶液各 20 l,分别进样，考察分离度，理论塔板数，及拖尾因子， 再根据具体条件进行调整，选出最适合的条件。 2.3 专属性试验 取供试品,进行高温、光照、酸、碱、氧化破坏试验。 热降解溶液的配制:取本品 20 mg,置 25 ml 量瓶中,置 140高温 4 h 后,用流动相溶解并稀释至刻度; 光降解溶液的配制:取本品 20 mg,置 25 ml 量瓶中,用流动相制成每 1 ml 含吡非尼酮 0. 8 mg 的溶液, 置紫外灯光下 48 h; 酸降解溶液的配制:取本品 20 mg,置 25 ml 量瓶中,加 2molL - 1 盐酸溶液 5 ml,放置 4 h,用 2 molL - 1 氢氧化钠溶液调至中性,加流动相稀释定容; 碱降解溶液的配制:取本品 20 mg,置 25 ml 量瓶中,加 2molL - 1 氢氧化钠溶液放置 4 h,溶液颜色 变黄,另加 2 molL - 1 盐酸溶液调至中性,加流动相稀释定容; 氧化破坏溶液的配制:取本品 20 mg,置 25 ml 量瓶中,加过氧化氢 5 ml,避光放置 4 h,用流动相稀释 定容。照高效液相色谱法,取上述各溶液各 20l 进样,记录结果，进行分析 2.4 线性范围： 精密称取伏立诺他对照品约 15 mg,置 50ml 量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,作为贮备液。 分别精密量取贮备液 1、2、3、4、5 ml 置 10 ml 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀。分别取溶液 20l 分别注入色谱仪,记录色谱图,量取峰面积,由溶液浓度(C) 对峰面积(A)线性回归。 2.5 检测限：取空白基线一段,计算其噪音峰高,再将伏立诺他样品溶液用流动相稀释适当浓度进样, 使其峰高为噪音峰高的 3 倍,记录检测限。 2.6 精密度试验 2.6.1 进样精密度：取标准曲线项下高、中、低三种浓度的溶液,分别重复进样 5 次,以峰面积来考 察精密度。 2.6.2 中间精密度：选择不同人员,分别测定同一批样品的含量。 2.7 重复性试验：分别取同一批样品, 6 份,精密称定,照样品测定项下操作,计算含量。 2.8 稳定性试验：照标准曲线项下的方法配制高、中、低三种浓度 的溶液,分别于 0、1、2、4、6、8 h 测定。考察其稳定性 2.9 含量测定：取本品适量,精密称定,用流动相制成每 1ml 含 50g 的溶液,作为供试品溶液,精密量 取 20l,注入液相色谱仪,记录色谱图,量取峰面积;另取经干燥至恒重的伏立诺他对照品适量,同法测定, 按外标法以峰面积计算,即得。 2.10 有关物质测定：取本品适量,精密称定,用流动相制成每 1 ml 含 0.5mg 的溶液,作为供试品溶液; 精密量取供试品溶液 1 ml,置 100 ml 量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀,作为对照溶液。精密量取对照 溶液 20l,注入液相色谱仪,调节检测灵敏度,使主成分色谱峰的峰高为满量程的 10% 25%;再精密量取 供试品溶液和对照溶液各 20l,分别注入液相色谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的 4 倍。供试品 溶液色谱图中如有杂质峰,最大单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的 1 /2 ( 0.5% ) ,各杂质峰 面积总和,不得大于对照溶液主峰面积( 1% )。 参考文献： 【1】胡 杨，陈国华，吴 燕，杨尚彦.伏诺立他的合成J.中国医药工业杂志，2009，40（7）：481- 482. 【2】黄小平，徐江. 组蛋白去乙酰化酶抑制剂类抗癌药 VorinostatJ.化工中间体，2009，06：11- 13. 【3】Sakajiri S, Kumagai T, Kawamata N, et al. Histone deacetylase inhibitors profoundly decrease proliferation of human lymphoid cancer cell lines J. Exp Hematol, 2005,33(1): 53-61. 【4】Robert A.Parise, Julianne L.Holleran, Jan H.Beumera, Suresh Ramalingama, Merrill J. Egorin. A liquid chromatographyelectrospray ionization tandem mass spectrometric assay for quantitation of the histone deacetylase inhibitor, vorinostat (suberoylanilide hydroxamicacid, SAHA),and its metabolites in human serumJ. Chromatography B, 840 (2006) 108205 进程安排： 20112011 年年 6 6 月月 7 7 日日-2011-2011 年年 7 7 月月 3131 日查阅资料，整理数据；日查阅资料，整理数