m蛋白的鉴定及实验分析

M M 蛋白的鉴定及实验分析蛋白的鉴定及实验分析 【关键词】M 蛋白；免疫球蛋白；分析 IdentifyandExperimentalAnalysisofMProtein Keywords:Mprotein;Immuneglobin;Analysis M 蛋白细胞大量增殖产生的具有相同氨基酸顺序和蛋白 质结构的免疫球蛋白分子或其片段,临床上常见于多发性骨 髓瘤、原发性巨球蛋白血症、重链病、原发性淀粉样变性、 意义未明的单克隆丙种球蛋白血症等淋巴细胞或浆细胞克 隆增殖性疾病1 。M 蛋白是单克隆免疫球蛋白的缩写,也 称副蛋白、骨髓瘤蛋白、M 成分。对此病只有采取较好实验 室方法与正确实验分析相结合，才能为临床提供可靠依据。 1 血清区带电泳技术 是临床实验室对蛋白质进行的一种剖析技术。它可以 对血清或其他体液中异常蛋白质进行筛选。它是以区带电 泳为基础在一种合适的支持介质琼脂糖上进行的电泳。 血清蛋白质在给定的 pH 条件下主要根据其所带电荷数将其 分离成各种片段。 正常人血清的区带电泳结果和扫描图像 从左至右的 5 个区带依次为白蛋白及 1、2、 和 球蛋白区。有时在慢电泳时 球蛋白可分为 1 球蛋白 和 2 球蛋白。白蛋白区的成分包括白蛋白、前白蛋白和 部分 1 脂蛋白;1 区包括 1 抗胰酶蛋白、1 脂蛋白、 c 球蛋白;2 区包括触珠蛋白、铜蓝蛋白、2 巨球蛋白 等;1 区包括转铁蛋白、补体3、Ig、血结素等;2 区包括3、Ig; 区包括 Ig、Ig、CRP 等。 多克隆免疫球蛋白增殖性疾病 各类 Ig 均增加,相应的其他区带会减少,多见于肝硬化、 慢性肝炎和系统性红斑狼疮等,由于 和 区大量增殖, 导致两区之间的间隙消失,成为 桥,亦称 联,扫描 时 消失,出现一高而宽的 峰。 免疫缺陷症时会出现无 峰或低 峰。 蛋白血症 特点是区带窄而浓,扫描峰高而尖,基底部窄,在 区 高与宽的比例2, 区则1,其他区带明显减少。 蛋白量少时常被其他蛋白掩盖 可用稀释血清的方法解决,在进行血清区带电泳时,有 时会出现假性蛋白条带,此时则需要进行免疫电泳和免疫 固定检测以资甄别。出现假性蛋白条带的情况包括:当血 液凝固不完全,血清中含有纤维蛋白原；血管内溶血时血清 内血红蛋白结合珠蛋白含量增高;缺铁性贫血时血清转铁蛋 白浓度升高；某些应急状态下 球蛋白浓度增加及先天性 高脂蛋白血症;双白蛋白血症、白蛋白变异、白蛋白结合青 霉素等药物后电泳行为改变。 2 免疫球蛋白检测 正常人产生免疫球蛋白的浆细胞是多克隆性质合成的 免疫球蛋白除 5 种不同重链外，还只有 和 轻链，并 且 / 比是恒定2 ，M 蛋白疾病是骨髓中异常浆细胞极 度增生所引起的一种恶性疾病,早期可无临床症状,起病缓 慢,有的病例临床表现极不典型,易引起漏诊和误诊。因此 血清免疫球蛋白也是 M 蛋白综合诊断的标准之一。Ig 定量 常用方法有单向免疫扩散法、速率散射浊度测定法、火箭 免疫电泳法。其中以速率散射浊度测定法最为准确,且采用 自动化方法使操作方便，速率散射比浊法定量检测 Ig 的意 义在于确定蛋白所属 Ig 类别及数量，速率动态散射比浊 法是抗原抗体结合反应在每一个单位时间内的速度,连续测 定各单位时间的反应速度即为动态观察,该法具有速度快、 敏感度高、精确度高、稳定性好的优点。一般 M 蛋白所属 Ig 含量均显著升高，其他类 Ig 则正常或显著降低。 3 尿本周氏蛋白 本周氏蛋白是单克隆游离免疫球蛋白轻链,它是 或 轻链的合成超过重链时轻链游离于血清中,分子量为 45KD,容易从尿中排出本周氏蛋白,多来源于骨髓浆细胞 的恶性增生,是由于合成紊乱,在生成和分泌完整的免疫球 蛋白分子时的过量轻链。本周氏蛋白又称凝溶蛋白,具有 特殊的热沉淀性质,在 pH 的条件下,加热至 5060时出 现沉淀,继续加热至 90后又重新溶解,再冷却时又可出现 沉淀。过去检测方法中,是利用本周氏蛋白的这种特殊的 热沉淀性质检测尿本周氏蛋白的。这种方法由于存在特 异性和灵敏度差的缺点,其结果也受诸多因素的影响:例如 沉淀变化需要肉眼观察,由于操作过程中人为影响因素较多,敏 感度较低,常导致判断有误差;尿液混浊、尿液中含有过多 的其他蛋白以及实验过程中受温度变化等可影响其结果。 本实验可以看出,热沉淀反应法应不再作为本周氏蛋白的 筛选。同时也不能确定轻链的型别。 4 免疫固定 免疫固定电泳是抗原在载体上电泳后直接用抗血清作 用于蛋白,进行抗原抗体反应,使抗原在电泳位置上被固定。 免疫固定后的区带,应为单一免疫复合物沉淀带,根据抗血 清的不同,可判定未知蛋白为何种成分。在研究蛋白时, 免疫固定电泳至少要应用 6 种抗血清,一是抗全血清抗体, 其他 5 种分别为 、 和 的抗血清。免疫固 定电泳不只对分型有意义,同时还可对患者进行早 期诊断,优于骨髓细胞检查,因为骨髓细胞形态检查往往要 在患者中晚期多部位多次骨穿,并要瘤细胞10%才可诊 断,而免疫固定电泳可弥补这方面的不足3 。 在实际工作中,往往需要结合几种不同的方法和技术结合， 可以使绝大部分的蛋白血症患者得到明确诊断。值得一 提的是,要对 M 蛋白阳性的患者做出正确的诊断,还应将 蛋白鉴定的结果与临床资料相结合。 【参考文献】 1 RobertP,Kathyh,Judyc，etofkappaandLambalightchaindy ratenepbeloetryJ.Chinchem,1986，32:1141. 2陆慧琦，屠小卿，徐铃铃.应用综合实验诊断 M 蛋白病J.中国免疫学杂志，XX，16（7）：387