版护理9 吸光光度法ppt课件

第九章 吸光光度法 吸光光度法：利用分光光度计测定溶 液在某一波长下的吸光度，以确定溶液中 被测物质含量的分析方法 吸光光度法 可见吸光光度法 紫外吸光光度法 红外吸光光度法 （光源波长） 光源波长：380780nm 光源波长：常用200380nm 光源波长：常用7803105nm 比色分析法：通过比较有色溶液颜色的深 浅来确定其浓度的方法 浓度 颜色 一、吸光光度法概述 （一）吸光光度法的特点 1.灵敏度高：适用于微量组分的测定 2. 试液的浓度下限 10-510- 6molL-1 2. 准确度高: 测定的相对误差 2%5% 3. 简便、快速、仪器简单：一般不需分离干扰 物质，就能直接进行测定 4. 应用广泛：无机离子、共轭双键的有机物 （二）物质对光的选择性吸收 可见光：波长在400760nm范围内，眼能感觉到 单色光：具有一种颜色(单一波长)的光 复合光：不同颜色(不同波长)的单色光组成的光 白光：由红、橙、黄、绿、青、蓝、紫等 单色光按一定比例混合而成的复合光 物质呈现的颜色：取决于透过光的颜色 互补色光：两种单色光按适当比例混合后能组成 白光的单色光。 透过光和吸收光是互补色 CuSO4溶液吸收白光中的黄色光-蓝色 KMnO4溶液吸收白光中的黄绿色光-紫红色 光的互补色 绿 黄 橙 红 紫 蓝 青蓝 青 白光 吸收曲线：入射光的波长（）为横坐标 相应的吸光度（A）为纵坐标 在溶液最大吸收波长处测定吸光度，灵敏度最高 朗伯-比尔定律A = d B 质量吸 收系数 质量浓度 液层厚度 = MB 摩尔吸收系数与质量吸收系数的关系： 吸光度与透光率的关系：A = - lgT 摩尔质量为397gmol-1的物质在最大 吸收波长处摩尔吸收系数=1.82105 dm2mol-1 。称取0.102g含该物质的试样 配成1000mL溶液，在最大吸收波长处用 1cm吸收池测得A=0.456。 计算试样中该物质的质量分数。 解：试样溶液的浓度 试样中该物质的质量分数 用邻菲罗啉法测定铁。Fe2+离子质量浓 度为1.010-3gL-1。用2.0cm吸收池，在 波长508nm处测得吸光度A为0.38，计算 铁()-邻菲罗啉配离子的摩尔吸收系数。 解：Fe2+ 离子的浓度= 配离子的浓度： 配离子的摩尔吸收系数 三、可见吸光光度法 （一）概述 1. 目视比色法：用眼睛比较溶液颜色的深 浅以确定物质含量的方法 标准系列法：配制系列已知准确浓度的标 准溶液加显色剂标准色阶被测溶液同样 处理与标准色阶比较颜色被测溶液与某一 标准溶液颜色一致两者浓度相等 优点：设备简单、操作方便 缺点：准确度不高、标准色阶易变色，常 需临时配制。 2. 光电比色法 使用光电比色计测定溶液的吸光度进行 定量分析的方法 优点：用光电比色计替代人眼，消除主 观误差，提高准确度 缺点：用滤光片获得的单色光纯度较差 ，测定结果的准确度也不高 用分光光度计进行测定的分析方法 （目前普遍使用的分析方法） 优点：单色光的纯度较高；灵敏度、选择 性、准确度比光电比色法好 操作：选择波长为max的单色光为入射光 测出试液的A根据朗伯-比尔定律算出试液 的浓度 注意：采用空白溶液(参比溶液)做对照试验 将空白溶液置于光路中调节仪器 使A=0(T=100%)试液置光路中，读出试液A 3. 吸光光度法 1. 标准比较法 配制与被测溶液浓度相近的标准溶液(Cs) 显色后测得A (As)相同条件下测定待测溶 液的A(Ax)计算待测溶液的浓度(Cx) 注意: 标准溶液与待测溶液的浓度必须相近 (以减少误差) （二）吸光光度法常用的定量分析方法 1.00mL 2.2510-3 molL-1 Fe3+离子 标准溶液，在酸性溶液中用KCNS显色后 稀释至 50.0mL，在波长480nm 处测得吸 光度为0.30。另取1.00mL含Fe3+离子的试 样，在相同条件下测得吸光度为0.41。计 算试样中 Fe3+ 离子的浓度。 解： 配制系列浓度不同的标准溶液最大吸收 波长处测定各溶液的A以标准溶液的浓度为横 坐标，相应的A为纵