药物分析第八章 对氨基苯甲酸酯和酰苯胺类局麻药物的分析课件

第八章 对氨基苯甲酸酯和 酰苯胺类局麻药物的分析 主要内容： 结构与性质 鉴别试验 杂质检查 含量测定 体内药物分析 芳胺类氨基直接与苯环相连的药物 芳烃胺类氨基在烃基侧链上的药物 一、对氨基苯甲酸酯类 （一）基本结构与典型药物 C O OR2NR1 H 第一节 结构与性质 苯佐卡因 盐酸丁卡因 盐酸普鲁卡因胺 盐酸普鲁卡因 （二）性质 1.具有芳伯氨基重氮化-偶合反应。 （盐酸丁卡因除外） 2.具有酯结构易水解 3.具有脂烃胺侧链弱碱性(叔胺氮原子) 与酸成盐，与生物碱试剂反应 5.溶解性游离碱难溶于水，易溶于有机溶 剂；盐酸盐易溶于水，难溶于有机溶剂。 4.具有苯环结构紫外吸收 二、酰胺类 （一）基本结构与典型药物 盐酸利多卡因 盐酸布比卡因 盐酸罗哌卡因（USP） 对乙酰氨基酚（扑热息痛） （二）性质 1.具酰胺结构水解后的重氮化-偶合反应 水解成芳伯氨基，发生重氮化偶合反应 利多卡因、布比卡因、罗哌卡因等因邻位 有2个甲基，受空间位阻的影响，较难水解。 2.具叔胺氮原子弱碱性 能与酸成盐 能与生物碱沉淀试剂反应 3.重金属离子反应酰胺的氮与铜/钴离 子生成配位化合物 4.苯环结构紫外吸收 5.溶解性游离碱难溶于水，易溶于有机溶剂； 盐易溶于水，难溶于有机溶剂。 对氨基苯甲酸酯类： 具有游离的芳伯氨(或仲胺)基， 对位有取代 酰苯胺类： 芳伯氨基被酰化，对位有取代 结构特点 第二节 鉴别试验 （一）重氮化偶合反应 (芳香第一胺类的鉴别反应) 具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基的药物 直接反应（游离芳伯氨基） 苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、 盐酸普鲁卡因胺、对氨基水杨酸钠 苯佐卡因和盐酸普鲁卡因 ChP（2010） 本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录） （通则0301 ） 取供试品约50mg，加稀盐酸1ml，必要时缓 缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L亚硝酸钠溶液 数滴，滴加碱性-萘酚试液数滴，视供试品不同 ，生成由橙黄到猩红色沉淀。 间接反应（潜在芳伯氨基） 对乙酰氨基酚、醋氨苯砜、贝诺酯 对乙酰氨基酚 ChP（2010） 取本品约0.1g，加稀盐酸5ml，置水浴中加 热40分钟，放冷；取0.5ml，滴加亚硝酸钠试液5 滴，摇匀，用水3ml稀释后，加碱性-萘酚试液 2ml，振摇，即显红色。 盐酸丁卡因（芳香第二胺结构） 与NaNO2作用生成乳白色N-亚硝基化合物沉淀 乳 白 色 （二）芳香第二胺反应 （三）与金属离子反应 1. 与铜和钴离子反应 （盐酸利多卡因/布比卡因/罗哌卡因） 2羟肟酸铁盐反应 （盐酸普鲁卡因胺） （四）水解产物反应 酯键水解生成的水解产物 （盐酸普鲁卡因、苯佐卡因） 1. 盐酸普鲁卡因 ChP（2010） 取本品约0.1g，加水2ml溶解后，加10氢氧 化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；加热，变为油 状物；继续加热，发生的蒸气，能使湿润的红色 石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷， 加盐酸酸化，即析出白色沉淀。 2. 苯佐卡因 ChP（2010） 取本品约0.1g，加氢氧化钠试液5ml，煮 沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生 成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。 （五）制备衍生物测定熔点 1.三硝基苯酚衍生物 盐酸利多卡因 ChP（2010） 取本品2g，加水20ml溶解后，取溶液10ml ，加三硝基苯酚试液10ml，即生成沉淀；滤过 ，沉淀用水洗涤后，105干燥，熔点为228 232，熔融时同时分解。 盐酸布比卡因 ChP（2010） 2. 硫氰酸盐衍生物 盐酸丁卡因 ChP（2010） 取本品约0.1g，加5%醋酸钠溶液10ml溶解 后，加25%硫氰酸铵溶液1ml，即析出白色结晶 ；滤过，结晶用水洗涤，在80干燥，熔点约 为131。 （六）光谱法 含有苯环 盐酸布比卡因 ChP（2010） 取本品，精密称定，按干燥品计算，加 0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中含0.40mg的溶 液，照紫外-可见分光光度法测定，在263nm与 271nm的波长处有最大吸收；其吸光度分别为 0.530.58与0.430.48。 1.UV 2.IR 特征性强，专属性好 盐酸普鲁卡因 本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱 （光谱集397图）一致 。 第三节 特殊杂质检查 一、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查 来源：水解产物 方法：HPLC 杂质对照品法 对氨基苯甲酸 取本品，精密称定，加水溶解并定量稀释制 成每lml中含0.2mg的溶液，作为供试品溶液；另取对氨基 苯甲酸对照品，精密称定，加水溶解并定量制成每lml中 含 1g的溶液，作为对照品溶液；取供试品溶液lml与对照 品溶 液9ml混合均匀，作为系统适用性试验溶液。照高效 液相色谱法（附录VD)试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂；以 含0. 1%庚烷磺酸钠的0. 05mol/L磷酸二氢钾 溶液（用磷酸 调节pH值至3.0)-甲醇（68 :32)为流动相； 检测波长为 279nm。取系统适用性试验溶液101，注入液 相色谱仪，理论板数按对氨基苯甲酸峰计算不低于2000， 盐酸普鲁卡因峰和对氨基苯甲酸峰的分离度应大于2.0。取 对照品溶液l0 1, 注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使 主成分峰髙约为满量程 的20%。精密量取供试品溶液与对 照品溶液各10 1 ，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。 供试品溶液色谱图中如有与对氨基苯甲酸峰保留时间一致 的色谱峰，按外标法以峰面积计 算，不得过0.5%。 Q1 Q2 Q3 Q4 离子对试剂，调整对氨基苯甲酸和盐酸普 鲁卡因峰型及分离度。 精密量取本品适量，用流动相定量稀释制成每lml中约含 盐酸利多卡因2mg的溶液，作为供试品溶液； 精密量取lml ，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，为对照溶液；另 取2 ,6-二甲基苯胺对照品，精密称定，加流动相 溶解并稀释 制成每lml中约含0.8 g的溶液，作为对照品溶液。照含量测 定项下的色谱条件，取对照溶液20 l ，注入液相 色谱仪， 调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程 的 20%;再精密量取上述三种溶液各20 l ，分别注入液相色 谱 仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3.5倍，供试品溶液 的色谱图中如有与2,6-二甲基苯胺保留时间一致的色谱峰， 其峰面积不得大于对照品溶液主峰面积（0.04%),其他单个杂 质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%),其他各 杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%)。 二、盐酸利多卡因注射液中2,6-二甲基苯胺 及其他杂质的检查 Q1 Q2 Q3 三、盐酸氯普鲁卡因注射液中有关物质和 光解产物的检查（自学） HPLC-MS 四、盐酸罗哌卡因的对映体纯度检查 （自学） 毛细管电泳 第四节 含量测定 一、亚硝酸钠滴定法 1.原理 芳伯氨基，在酸性条件下与NaNO2定量 发生反应，生成重氮盐，根据消耗NaNO2量， 计算含量。 含潜在芳伯氨基药物，如芳酰氨基、硝基 等，可先水解或还原，得芳伯氨基后，再进行 测定。 酸的种类 药物结构 反应温度 滴定速度 亚硝酸钠 滴定法 2.测定的主要条件 酸的用量 （1）酸的种类 重氮化反应速度 HBrHClH2SO4、HNO3 在盐酸存在下，重氮化反应的历程为： NaNO2+HClHNO2+NaCl HNO2+HClNOCl+H2O （1）K1 （2）K2 K1 300 K2 加入KBr，可增大被测溶液中NO+的浓度，所 以能加快重氮化反应速度。 加入适量KBr加速反应 （2）酸的用量 加入盐酸作用： 重氮化反应速度加快； 重氮盐在酸性溶液中稳定； 防止生成偶氮氨基化合物而影响测定 结果。 芳胺:盐酸 1:2.56 酸度不足 未反应的芳胺与生成的重氮盐产生 偶氮氨基化合物 酸度过大 游离芳伯氨的量减小(成盐), 影响重 重氮化反应速度, 使反应速度减慢。 加入过量盐酸加速反应 （3）药物结构 碱性强游离的少 碱性弱游离的多 a.当在苯环上特别是氨基的邻位或对位上有吸 电子取代基时，如-SO3、-COOH、-NO2等可 使氨基的碱性降低，重氮化反应速度加快。 b.当在苯环上有供电子取代基时，反应速度降 低。 游离芳伯氨基浓度越高反应速度越快 （4）反应温度 反应速度加快 2.5倍。 重氮盐分解速度 加快2倍,亚硝酸 钠滴定液逸失速 度加快 重氮化反应宜在低温下进行 室温：1030 升高10 （5）滴定速度 在30C以下，滴定管 尖端插入液面下2/3处 ，在不断搅拌下快速 加入大部分标准溶液 。(约80%90%) 目的：防止 亚硝酸的挥 发和分解 提出液面后缓缓滴定 至终点 目的：避免 终点提前 先快后慢 3.指示终点的方法 永停法（DEAD STOP）（中国药典） 电位法 外指示剂法 内指示剂法 （1）永停法（DEAD STOP） 永停滴定装置 在两个铂电极间外加10200mV电压，并且在 回路中串联一个灵敏的电流计。 终点前：线路中无电流， 电流计指针指零 。 终点时：溶液中存在微过 量的HNO2，电极发生氧化 还原反应，电流计指针偏转， 不回零。 阳极： 阴极： （2）电位法 USP 电极：甘汞-铂电极 终点：稍过量的NaNO2使电位产生突跃 （3）外指示剂法 KI-淀粉试纸 2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O （4）内指示剂法 取本品约0.6g，精密称定，照永停滴定法 ，在1520，用亚硝酸钠滴定液(0.1mol/L) 滴定。每1ml 亚硝酸钠 滴定液(0.1mol/L) 相当 于27.28mg 的C13H20N2O2.HCl。 盐酸普鲁卡因的含量测定 ChP（2010） 二、非水溶液滴定法 1.原理 药物分子结构中含有弱碱性氮原子 2.溶剂 冰醋酸-醋酐 3.滴定液 高氯酸（0.1mol/L） 4.指示剂 结晶紫（常用） 5.讨论： 盐类的滴定（置换滴定） BHA- +HClO4 BH+ClO4-+HA 强酸滴定液置换与游离碱结合的弱酸 2BHX+Hg（Ac）2 2BHAc+HgX2 2BHAc+HClO4 BH+ClO4-+HAc 药物为氢卤酸盐，加入醋酸汞，消除氢卤 酸的影响。 革除汞盐的方法：加入醋酐溶液，增强药物碱性； 醇溶液中，用氢氧化钠滴定；改用其他方法。 BP2007、USP30与ChP2005共同收载品种的革 除汞盐情况： 共 计计 加汞盐盐法 HClO4滴定 除汞盐盐法 HClO4滴 定 NaOH滴定 （含醇制 ） HPLC法其它 BP20076532238 1（旋光）； 1（硫氰氰酸铵铵 滴定） USP30523615 1（亚亚硝酸钠钠 滴定） ChP20058888 胡昌勤, 程奇蕾, 李亚萍.解读中国药典2010 年版化学/抗生素药品质量标准的变化J.齐鲁药 事,2011,30(1):33 o非水滴定法由于具有重现性好、操作方便等特 点多年来一直被广泛作为化学药品原料的含量 测定方法。其中多种方法中需要用到各类汞盐 。鉴于汞对环境的污染作用, 中国药典 2010年版的非水滴定法中已全面革除汞盐。具 体做法包括: 对BP收载并且已经完成革除汞盐 的品种, 借鉴BP方法, 用国内样品对方法进行复 核; 对需要自建方法的品种: 凡可溶于或略溶 于醇类溶剂的样品, 可首先考虑采用NaOH 滴 定法; 其次考虑采用加乙酸酐的HC lO4电位滴 定法; 如上述2种方法均不适用, 对季胺盐类药 物可试用Ag-NO3 滴定法, 或修订为高效液相色 谱法。 示例：P250 盐酸布比卡因 ChP（2015） 取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸20ml 与醋酐20ml溶解后，照电位滴定法（通则 0701)，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定， 并将滴定的结果用空白试验校正。每lml 高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于 32.49mg 的 C18H28N2O HCl。 盐酸丁卡因 ChP（2015） 取本品约0.25g,精密称定，加乙醇50ml振 摇使溶解，加0.01mol/L盐酸溶液5ml，摇匀， 照电位滴定法（通则0701)，用氢氧化钠滴定液 ( 0.lmol/L)滴定，两个突跃点体积的差作为滴定 体积。每lml氢氧化钠滴定液（0.lmol/L)相当 于 30.08mg 的 C15 H24 N2O2 HC1。 第一等当点是滴定溶液中游离的酸根； 第二等当点则是滴定溶液中键合的酸根。 三、紫外分光光度法 注射用盐酸丁卡因的含量测定 四、HPLC法 盐酸利多卡因注射液 o精密量取本品适量（约相当于盐酸利多卡因 100mg），置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度 ，摇匀，精密量取20l注入液相色谱仪，记录色 谱图；另取利多卡因对照品约85mg，精密称定 ，置50ml量瓶中，加1mol/L盐酸溶液0.5ml使溶 解，用流动相稀释至刻度，摇匀，同法测定。按 外标法以峰面积计算，并乘以1.156，即得。 标示量：2ml:20mg 标示量% 计算公式 维生素C片(规格100mg)的含量测定：取20片， 精密称定，重2.1020g，研细，精密称取 0.4012g片粉，置100量瓶中，加稀醋酸10mL与 新沸过的冷水至刻度，振摇，使维生素C溶解 ，用干燥滤纸迅速滤过，精密量取续滤液 50mL，加淀粉指示液1mL，用