白血病免疫分型课件

白血病的免疫分型 北京大学血液病研究所 刘艳荣 一.急性白血病FAB分型：1976年提出,以形态为基础。 ALL AML M0 微小分化型急性髓细胞白血病, 原始细胞30% M1 急性髓细胞白血病未分化型, 原始细胞90% M2 急性髓细胞白血病部分分化型，原始细胞30-89% M3 急性早幼粒细胞白血病，异常早幼粒细胞30% M4 急性粒单核细胞白血病，原始细胞30%，单核20-80% M5 急性单核细胞白血病，原单+幼单30% M5a 未分化型，原单细胞80% M5b 部分分化型，原单细胞30%，有核红细胞50% M7 急性巨核细胞白血病，原巨核细胞30% L1 以小细胞为主，大小一致 L2 以大细胞为主，大小不一 L3 以大细胞为主，大小一致 二.急性白血病的MIC分型：1985-1986提出 MIC：Morphology Immunology Cytogenitics 80年代免疫学研究的进展，单克隆抗体的大量涌现， 利用特异的单抗可以明确区分ALL、AML及进一步 鉴定亚型，对研究白血病的生物学特性，指导临床 治疗及判断预后起着重要的作用 三.免疫分型的作用： 1.区分ALL、AML：形态、组化难以诊断的病例（不典型、 治疗后） 2.将ALL分为B、T细胞及根据细胞发育阶段分为几种亚型 3.对M0、M6 、M7具有诊断意义： M0：形态似ALL、组化（-）, 髓标志+, T,B- M6：GlyA+，CD71+ M7：CD41+，CD61+（IIb/IIIa） 四.正常血细胞分化发育过程中免疫标志变化特点及 白血病细胞免疫标志特点 常用各系血细胞CD抗原 1.T系：CD1-CD8（CD6不用） 2.B系：CD10，CD19-CD24，FMC7 3.髓系：CD11b,CD13-CD16，CD33，CD64 4.干祖：CD34，CD117，CD38，HLA-DR (一）. 正常B细胞标志： CD19 CD22 TdT CD34 CD10 CD20 FMC7 CD23 I期 ： + + + + + II期： + + - - + -/+ III期： + + - - - + 期： + + - - - + + + 泛B标志：CD19，HLA-DR，cCD79a/CD22 幼稚B标志：CD34，TdT， CD10， 成熟B标志：CD23，FMC7 B-ALL的分型 亚型 CD19 CD34 TdT CD10 CyIg SmIg 急性早期B前体细胞白血病 + + + - - early B-precursor ALL 急性前B细胞白血病+-/+ + + + - Pre B-ALL 急性B细胞白血病 +- - - -/+ + B-ALL 意义：Common B-ALL 预后相对较好，CD34+B-ALL比CD34- 预后好，但CD34+患者伴Ph1+预后差。B-ALL预后相对 差，但随化疗方案改进，预后有所改善。 CD7 CD2 CD5 CD34 CD1a CD3c/m CD4 CD8 I期 ： + + + + +/- II期： + + + - + +/- III期： + + + - + +/+ + + 期： + + + - - +/+ +/- +/- 泛T：CD2，CD5，CD7， cCD3 幼稚T：CD34，TdT，CD1a, CD4/8， 成熟T：CD3，CD4，CD8 (二）.正常T细胞标志：根据在胸腺内发育阶段分4期 T-ALL的分型 分型 CD7 CD2 TdT CD3c/m 急性早期T前体细胞白血病 + - + + early T precursor ALL 急性T细胞白血病 + + - + T-ALL T-ALL特点： 1. 幼稚T细胞数量增多：CD34+，TdT+ 2. 泛T标志丢失 3. CD4/8双+或CD4/CD8单阳 意义：儿童：ALL发病率占肿瘤的25%， B-ALL 预后比T-ALL相对好 成人：ALL 发病率20% T-ALL 预后比B-ALL 好。 (三).正常粒细胞标志 全粒细胞标志：CD13，CD33， cMPO 幼稚粒细胞：CD34，CD117，HLA-DR， 成熟粒细胞：CD15，CD11b，CD10，CD64 cMPO CD13 CD34 CD117 HLA-DR CD33 CD11b CD15 CD64 CD10 幼稚粒 + + + + + + - - - - 成熟粒 + + - - - + + + + + (四).正常单核细胞标志： 全单核细胞标志：CD33，CD13，HLA-DR 幼稚单核细胞标志：CD34，CD117， 成熟单核细胞标志：CD14，CD64 HLA-DR CD33 CD13 CD34 CD117 CD14 CD64 幼稚单 + + + + + - - 成熟单 + + + - - + + (五).成熟粒、单核细胞主要区别： 成熟粒细胞：CD33+ HLA-DR- CD14- CD64+dim 成熟单核细胞：CD33+ HLA-DR+ CD14+ CD64+ 正常BM各系细胞比率： 淋巴：20-30%：T：70%，B：20%，NK：10%； 单核：2-6%；粒细胞：40-60%；有核红：50% FCM的主要测定指标：FSC，SSC，FL1，FL2，FL3（FL4） FSC：反应细胞的大小。SSC：反应细胞内颗粒性。 FCM设门法： FSC/SSC： 缺点： 不能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开 CD45/SSC：CD45是WBC抗原，RBC、Plt为阴性。 CD45在成熟细胞表达强，幼稚细胞表达弱， 在淋巴、单核及粒细胞表达强度不同。 优点：能将淋巴、单核及幼稚细胞区分开。 特异分析白血病细胞免疫表型 FCM标记方法： 单标：一种单抗/tube: FL1,FSC,SSC(三参数） 双标：(两种单抗/tube/)：FL1,FL1,FSC.SSC（四参数） 三/四标：(三种单抗/tube)(四种单抗/tube)：FL1-FL3/4,FSC,SSC CD45 CD5 CD19CD64 CD34 CD11b CD117 Side scatter CD64 CD11b Side scatter CD45 CD7 CD117CD34 CD5 CD19 HLA-DR CD11b CD117 Pre-B-ALL, CD45 CD7 CD19CD117 CD34 CD11b CD7 Side scatter CD117 CD11b CD10-,CD34- CD45 CD7 CD8 CD117CD3 CD34 CD38 HLA-DR CD7 Side scatter Side scatter CD45 CD20 CD117 CD34 CD19 CD34 HLA-DR CD5 HLA-DR CD10 CD117 CD33CD33CD38 CD23CD23Lamda Forward Scatter AML-M0:R3细胞表达CD34,CD38,CD117,HLA-DR,CD33 CD45 CD5 CD64 CD34 HlA-DR CD117 Side scatter CD64 CD11b CD34 CD7 CD33 CD19 CD10CD7 CD13CD33 Forward Scatter CD14 Side Scatter AML-M1:R3细胞表达CD117,CD7,CD34,CD33,HLA-DR,CD13,CD64 CD45 CD5 CD14 CD34 HlA-DR CD117 Side scatter CD64 CD11b CD19 CD7 CD33 CD10 CD10 CD7 CD13CD33 Forward Scatter CD64 Side Scatter AML-M2:R3细胞表达CD117,CD34,CD19,HLA-DR,CD33,CD64,CD13 CD64 Side scatter CD45 CD64CD34 CD5 CD19 HLA-DR CD11bCD117 CD45 CD5 CD19 CD64 CD34 HlA-DR CD117 Side scatter CD64 CD11b CD7 CD33 CD10CD7 CD45 CD5 CD64 CD34 CD11b CD117 Side scatter CD64 CD11b CD34 CD19 CD13HLA-DR Forward Scatter CD14 Side Scatter AML-M4:R3表达CD117,CD34,CD33,HLA-DR,CD64,CD13;R414.35% CD45 CD5 CD14 CD34 CD11b CD117 Side scatter CD64 CD11b CD10 CD13 HLA-DR Forward Scatter CD14 Side Scatter AML-M5:R3,R4表达CD117,CD34,CD33,HLA-DR,CD11bCD64,CD13,CD14 CD19 CD33 CD10 CD7CD7 CD64 CD45 CD64CD34 CD5 CD19 CD11b CD11b GlyA CD45 CD5 CD19 CD64 CD34 CD117 Side scatter CD64 CD11b CD11b GlyA GlyA CD45 CD5 CD19 CD64 CD34 CD11b CD64 CD11bCD117 干祖细胞标志：T祖细胞 B祖细胞 髓祖细胞 CD34 + + + TdT + + - CD117 -/+ - + HLA-DR +/- + + CD38 + +/-