微生物学检验课件细菌形态学检查

细菌形态学检查 南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心 n教学对象：高等医学院校卫生检验专业学生 n实验课时：4学时 n课程类型：专业实验课 n课程要求：必修 n每组人数：1人 实验目的和要求 n掌握革兰染色法的原理、方法及结果判断。 n掌握显微镜油镜的使用与保护、细菌涂片制备 的方法。 n熟悉不染色标本检查法。 n学会观察细菌的基本形态和特殊结构。 n了解实验室规则及注意事项。 实验内容 n实验室规则及注意事项。 n显微镜的使用与保护。 n细菌不染色标本检查。 n细菌涂片及革兰染色。 n细菌基本形态、特殊结构观察。 一、实验室规则及注意事项 n不得在实验工作区内吃、喝及抽烟，以及装卸 隐形眼镜和上妆等。实验用的冰箱中不得储存 饮料、食物。 n在实验操作时请穿好实验防护衣及其它合适的 防护服。实验室中不宜穿凉鞋、露趾鞋。操作 感染性、有毒物质或动物时，必须戴手套。不 宜将实验衣、手套或其它个人防护装备穿着到 实验室以外的场所。 n实验工作台应每日清理，若有污染发生应立即 进行消毒；所有设备在使用后均必须及时清理 和处理，以保持无污染状态。 n所有污染物玻璃器皿、动物笼、实验装置等 ，必须先经过消毒处理 (如：高压蒸气灭菌或 化学杀菌处理)，再行清洗或重复使用。废弃 物需经适当之废弃物处理流程处置。 n在接触传染性物质、化学物质和动物后脱掉手 套，切记洗手。 n严格无菌操作，树立良好无菌观念。 n在遇到不能处理的问题时，请立即与本实验室 人员联系以便及时采取相应的处理或消毒措施 。 二、显微镜的使用与保护 n普通光学显微镜用油镜放大1000倍，一 般细菌均能清楚看到。 n暗视野显微镜用于检查不染色的活细菌 和螺旋体的形态及运动观察。 n相差显微镜主要用于检查不染色活细菌 的形态及某些内部结构。 显微镜油镜的使用(一) n低倍镜对光，将光线调至最强程度(聚光器提高 ，光圈全部开放)。 n转动粗调节器使镜筒上升，滴香柏油1小滴(不 要过多，不要涂开)于接物镜正下方标本上。 n转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。 n俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器 使油镜头徐徐下降浸入香柏油内，轻轻接触玻 片为止。 显微镜油镜的使用(二) n慢慢转动粗调节器，使油镜头徐徐上升至见到标本 的物象为止。 n转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。 n左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本 。 n标本观察完毕后，转动粗调节器将镜筒升起，取下 标本玻片。立即用擦镜纸将镜头上的香柏油擦净。 显微镜的保护(一) n显微镜在从木箱中取出或装箱时，右手紧握镜 臂，左手稳托镜座，轻轻取出。不要只用一只 手提取，以防显微镜坠落，然后轻轻放在实习 台上或装入木箱内。 n显微镜放到实习台上时，先放镜座的一端，再 将镜座全部放稳，切不可使镜座全面同时与台 面接触，这样震动过大，透镜和微调节器的装 置易损坏。 显微镜的保护(二) n显微镜须经常保持清洁，勿使油污和灰尘附着 。如透镜部分不洁时，用擦镜纸轻擦，如有油 污，先将擦镜纸蘸少许二甲苯拭去。 n显微镜用完后，取下标本片，经聚光器降下， 再将物镜转成“八”字形，转动粗调节器使镜 筒下降，以免接物镜与聚光器相碰。 三、不染色标本检查 n应用：主要用于观察活菌的动力和运动 方式。 n常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映 光法。 1、压滴法 载玻片 细菌悬液 盖玻片 2、悬滴法 镜检 盖玻片 细菌悬液 凹玻片 四、细菌涂片制备和革兰染色 n细菌标本经染色后，除能清楚看到细菌 的形态、大小、排列方式外，还可根据 染色反应将细菌进行分类。 （一）涂片制备 n涂片： n干燥： n固定：通常用火焰加 热固定，将已干燥的 涂片在火焰中迅速通 过3次，以手背皮肤接 触玻片不烫为佳。 涂片干燥固定 染色 水洗、吸干 镜检 制备涂片标本染色 （二）革兰染色 n最经典、最常用的染色方法。 n通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和 G-菌两大类。 1、染色原理 n细胞壁通性学说：与肽聚糖结构有关。 n化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁 盐有关。 n等电点学说：与细菌所带电荷有关。 2、染色方法 结晶紫液 初染 卢戈碘液 媒染 95乙醇 脱色 稀释复红 复染 1min 水洗、甩干 30S1min 水洗、甩干 1min 水洗、甩干 影响革兰染色的关键步骤是脱色。 2、染色方法 3、革兰染色结果 n紫色革兰阳性菌 n红色革兰阴性菌 革兰阳性菌革兰阴性菌 4、影响革兰染色的因素 n操作因素 n涂片的厚薄；脱色时间的长短。 n染液因素 n卢戈碘液放置时间过长；95乙醇挥发；结晶 紫与草