四环素类抗生素的分析课件

四环素类抗生素的分析四环素类抗生素的分析 药本药本0808级级 苗露苗露 第三小组 lWhat Ill show you： l四环素发展的三个历史阶段 l四环素发展历史上的四个事件 四环素类抗生素 Tetracyclines ，TCsTCs 四环素类抗生素 Tetracyclines ，TCsTCs l1，药物历史 1500百年前的流传 l2，药物疗效及理化性质 耐药性和坏牙？ l3，典型药物及检测 人畜二次污染！？ l4，药物修饰及其发展 取代基！新活力！ 1 1，15001500百年前的流传百年前的流传 l l 最新研究显示，最新研究显示， 15001500年前的远古努比年前的远古努比 亚人深谙养生之道，亚人深谙养生之道， 他们在啤酒中有意地他们在啤酒中有意地 添加一种物质添加一种物质( (链霉菌培链霉菌培 养基）养基），从而使啤酒富，从而使啤酒富 有大量的四环素，提有大量的四环素，提 高了身体免疫能力。高了身体免疫能力。 谷物制成发酵稀粥，然后掺入带有链霉菌谷物制成发酵稀粥，然后掺入带有链霉菌 的土壤，链霉菌可生成四环素。的土壤，链霉菌可生成四环素。 四环素与人体钙物质结合，可沉积在骨骼四环素与人体钙物质结合，可沉积在骨骼 中，从而易被检测。中，从而易被检测。科学家在紫外线下观测发科学家在紫外线下观测发 现，现，15001500年前努比亚人骨骼中富含四环素。年前努比亚人骨骼中富含四环素。 1 1，15001500百年前的流传百年前的流传 四环素类药物发展史四环素类药物发展史 l l 19481948年年Benj ami n DuggarBenj ami n Duggar从从金霉素链霉金霉素链霉 菌菌（Streptomyces aureofaciensStreptomyces aureofaciens）中发）中发 现了现了第一个四环素类抗生素金霉素第一个四环素类抗生素金霉素（ ChlortetracyclineChlortetracycline）。）。 l l 同年，辉瑞制药的研究部门发现了同年，辉瑞制药的研究部门发现了土霉素土霉素 （Oxyt et racycl i neOxyt et racycl i ne，氧四环素）。，氧四环素）。 l l 2020世纪世纪5050年代，年代，四环素（四环素（TetracyclineTetracycline） 和地美环素和地美环素（DemeclocyclineDemeclocycline）被相继发）被相继发 现。这些天然产物被归类为现。这些天然产物被归类为第一代（第一代（1948-1948- 19571957）四环素）四环素 。 四环素类药物发展第一阶段四环素类药物发展第一阶段 四环素类抗生素 l是放线菌产生的一类 广谱抗生素。包括金 霉素、土霉素、四环 素及半合成四环素类 抗生素。 l具有十二氢化并四苯 基本结构。该类药物 有共同的A、B、C、 D四个环的母核，仅 在5、6、7位上有不 同的取代基。 四环素类药物发展第一阶段四环素类药物发展第一阶段 临床用药：临床用药： l盐酸四环素 l剂型需要，盐酸化 l片剂、胶囊、注射剂 四环素类药物发展第一阶段四环素类药物发展第一阶段 l 金霉素、土霉素、四环素有相似的理 化性质。化学结构中4位的二甲氨基显碱 性，C3，C5，C6，C10，C12，C12a含 酚羟基或烯醇基，显酸性，呈两性。能在 酸性或碱性溶液中溶解。在干燥条件下比 较稳定，但遇光易变色。在酸性、碱性条 件下均不稳定，失去活性。 四环素类抗生素四环素类抗生素 四环素类药物发展第一阶段四环素类药物发展第一阶段 2 2 耐药性和坏牙？耐药性和坏牙？ l l 四环素，高浓度时具杀菌作用。四环素，高浓度时具杀菌作用。 l l 自自2020世纪世纪5050年代开始应用，至今已有年代开始应用，至今已有5050 余年历史。上世纪余年历史。上世纪70-8070-80年代，四环素产年代，四环素产 销处于全盛时期，我国有上百家企业生产销处于全盛时期，我国有上百家企业生产 ，临床用量很大。，临床用量很大。 l l 自自2020世纪世纪8080年代后期起，因细菌耐药性年代后期起，因细菌耐药性 增加以及新的抗生素大量上市等原因，四增加以及新的抗生素大量上市等原因，四 环素产销逐渐萎缩，市场疲软。环素产销逐渐萎缩，市场疲软。 四环素类药物发展第一阶段四环素类药物发展第一阶段 2 2 耐药性和坏牙耐药性和坏牙？ l l 四环素与人体钙物质结合，四环素与人体钙物质结合， 可沉积在骨骼中，从而易被可沉积在骨骼中，从而易被 检测。检测。 l在牙的发育矿化期服用四环 素族药物，可被结合到牙组 织内，使牙着色。1950年， 国外有报道四环素族药物沉 积于牙、骨骼以至指甲等， 而且还能引起釉质发育不全 。国内直至70年代中期方引 起注意，并逐渐停用。 四环素类药物发展第一阶段四环素类药物发展第一阶段 OVER OVER 四环素类药物发展史四环素类药物发展史 l第一代天然四环素天然四环素的广泛使用，耐药性的 问题促成了药物化学家对天然四环素的结结 构修饰构修饰。 l强力霉素（Doxycycline，辉瑞制药 1967年发明）和米诺环素（Minocycline 为代表的半合成的第二代（1965-1972） 四环素问世。 l在80年代末第一代四环素类药物退出临床 应用的范围，转投入兽医市场兽医市场。 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 3，人畜二次污染！？，人畜二次污染！？ l l 天然的四环素类抗生素中金霉素因毒性大，天然的四环素类抗生素中金霉素因毒性大， 只作外用。土霉素和四环素现在在临床上也只作外用。土霉素和四环素现在在临床上也 已少用，主要用作已少用，主要用作兽药和饲料添加剂。兽药和饲料添加剂。 l l 四环素类抗生素由于能有效地治疗和预防动四环素类抗生素由于能有效地治疗和预防动 物疾病，被广泛用于畜牧养殖。可是长期滥物疾病，被广泛用于畜牧养殖。可是长期滥 用，造成畜牧产品中的高水平残留。人长期用，造成畜牧产品中的高水平残留。人长期 摄入这样的畜牧产品后，摄入这样的畜牧产品后，TCsTCs不断在体内蓄不断在体内蓄 积，当浓度达到一定量后，就会对人体产生积，当浓度达到一定量后，就会对人体产生 毒性作用毒性作用 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 3，人畜二次污染！？ 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 药物身份 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 药物鉴别药物鉴别 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 药物检查药物检查 l l 酸度酸度 （PHPH） l l 澄清度（可见澄清度（可见 杂质杂质 eg eg：菌：菌 种产物）种产物） l l HPLCHPLC检测四环检测四环 素类抗生素相素类抗生素相 关物质的量。关物质的量。 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 l l 有关物质有关物质 土霉素、4-差向四环素、盐酸金 霉素、脱水四环素、差向脱水四环素的峰 面积分别不得大于对照溶液主峰面积的1/4 （0.5% 减少一半）、1.5倍（3.0%）、1/2 （1.0%）、1/4（0.5% 减少至四分之一） 、1/4（0.5% 减少一半）， l新增加： 其他各杂质峰峰面积的和不得大 于对照溶液主峰面积的1/2（1.0%）。 药物检查药物检查 CHP2010 CHP2010 与与20052005的区别的区别 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 抗生素四项常规检测抗生素四项常规检测 l l 干燥失重干燥失重 l l 杂质吸光度杂质吸光度 l l 热原热原 l l 无菌（生物无菌（生物 制取分离所制取分离所 得抗生素必得抗生素必 须严格限制须严格限制 无菌）无菌） 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 HPLCHPLC测定药物含量测定药物含量 l l 色谱条件色谱条件 与系统适与系统适 应性实验应性实验 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 l l 目的：目的：建立快速检测四环素及其制剂中盐酸四建立快速检测四环素及其制剂中盐酸四 环素含量的测定方法。环素含量的测定方法。 （UV-VISUV-VIS） l l 方法：采用比色法，对经硫酸处理后的样品在方法：采用比色法，对经硫酸处理后的样品在 431 nm431 nm波长处测定吸收值，通过回归方程计算波长处测定吸收值，通过回归方程计算 出对应的含量。结果出对应的含量。结果 此方法在此方法在0 03 33 30 gL 0 gL 的范围内呈良好的线性关系，回归方程：的范围内呈良好的线性关系，回归方程：Y=9Y=9 0510 X-60510 X-682108210；r=0r=099959995。 l l 结论：该方法简单、快捷、靶向性高，重现性结论：该方法简单、快捷、靶向性高，重现性 好，可用于四环素及其制剂含量的快速初筛。好，可用于四环素及其制剂含量的快速初筛。 l l 关键词：四环素；快速检测；含量关键词：四环素；快速检测；含量 快速检测四环素片含量的测定方法快速检测四环素片含量的测定方法 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 l l 标准溶液的制备：标准溶液的制备： l l 精密称取标准品（盐酸四环素）适量精密称取标准品（盐酸四环素）适量( (约约 75 mg)75 mg)，置，置25 ml25 ml容量瓶中，加容量瓶中，加0 01 1 molL molL 的盐酸的盐酸10 ml10 ml溶解后，再加水至刻溶解后，再加水至刻 度，摇匀，再精密量取上述溶液度，摇匀，再精密量取上述溶液1 ml1 ml，加，加 水至水至10 mI10 mI，摇匀，制成，摇匀，制成0 03 gL 3 gL 的溶液的溶液 ，作为，作为标准溶液标准溶液备用。备用。 快速检测四环素片含量的测定方法快速检测四环素片含量的测定方法 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 l l 标准曲线精密量取上述标准溶液标准曲线精密量取上述标准溶液 0.050.05、0.10.1、0.150.15、0.20.2、 0.250.25、0.30.3、0.40.4、0.5 m10.5 m1 分别置分别置10 ml10 ml容量瓶中，分别加入浓容量瓶中，分别加入浓 硫酸硫酸0.45 ml0.45 ml，振荡，振荡5 min5 min，再加水，再加水 稀释至刻度，摇匀，冷却至室温。稀释至刻度，摇匀，冷却至室温。 l l 以空白溶剂为参比，于以空白溶剂为参比，于431 nm431 nm波长处测定吸收值。以波长处测定吸收值。以 吸收值为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。吸收值为纵坐标，以浓度为横坐标，绘制标准曲线。 l l 通过线性回归，标准曲线方程为：通过线性回归，标准曲线方程为： r r：0.9995 0.9995 结果显示结果显示 本品溶液在本品溶液在0 03 33 gL 3 gL 的范围内呈良好的线性关系。的范围内呈良好的线性关系。 快速检测四环素片含量的测定方法快速检测四环素片含量的测定方法 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 l l 样品的测试：取本品样品的测试：取本品1 1片，去除包衣，研成细粉片，去除包衣，研成细粉 ，置，置100ml100ml量瓶中，加量瓶中，加0 01 mol/L 1 mol/L 的盐酸的盐酸10 ml10 ml ，振摇溶解后，加水至刻度，摇匀，滤过，精，振摇溶解后，加水至刻度，摇匀，滤过，精 密吸取续滤液密吸取续滤液50ml50ml，加浓硫酸，加浓硫酸0.45ml0.45ml，振荡，振荡5 5 minmin后，加水至后，加水至10 ml10 ml，冷却至室温。，冷却至室温。 l l 于于431 nm431 nm波长处测定吸收值。然后将测得的吸波长处测定吸收值。然后将测得的吸 收值依回归方程计算得对应的浓度值，同法测收值依回归方程计算得对应的浓度值，同法测 定定3 3片，取其平均值与样品标示量进行比较，来片，取其平均值与样品标示量进行比较，来 判别含量是否符合要求。判别含量是否符合要求。 l l 结果：重现性好，结果：重现性好，RSDRSD为为1 10 0 快速检测四环素片含量的测定方法快速检测四环素片含量的测定方法 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 快速检测四环素片含量的测定方法快速检测四环素片含量的测定方法 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 快速检测四环素片含量的测定方法快速检测四环素片含量的测定方法 四环素类药物发展第二阶段四环素类药物发展第二阶段 Thats all Thats all l l 此方法快速检测含量的适用前提是该产品已鉴此方法快速检测含量的适用前提是该产品已鉴 定为真品。常规的实验环境下，重现性好。尽定为真品。常规的实验环境下，重现性好。尽 管当前检测四环素的方法管当前检测四环素的方法 有很多，但是适应快有很多，但是适应快 速初筛要求的目前还没有。速初筛要求的目前还没有。 l l 而该法在配备一台便携式精密比色计的情况下而该法在配备一台便携式精密比色计的情况下 ，运用经验证的标准曲线，就可以走出实验室，运用经验证的标准曲线，就可以走出实验室 ，装备于当前的快速检测车，一般就可以在，装备于当前的快速检测车，一般就可以在20 20 rainrain左右的时间里初筛出可疑产品。左右的时间里初筛出可疑产品。 四环素类药物发展史四环素类药物发展史 l l 直到直到1993 1993 年，年，9-9-叔丁基甘氨醯氨基米诺叔丁基甘氨醯氨基米诺 环素（环素（TigecyclineTigecycline，替加环素）的发明，替加环素）的发明 ，从而产生了第三代强效抗耐药的甘胺醯，从而产生了第三代强效抗耐药的甘胺醯 四环素。同时自四环素。同时自20052005年以来，随著临床年以来，随著临床 研究人员发现四环素及其衍生物的许多新研究人员发现四环素及其衍生物的许多新 用途，四环素及其衍生物的发展也由此进用途，四环素及其衍生物的发展也由此进 入了新的阶段入了新的阶段 。 四环素类药物发展第三阶段四环素类药物发展第三阶段 l替加环素 是一种新型的广谱活性 静脉注射用抗生素， l对有抗药性的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 也有活性，是甘氨酰四环素类中的首个药 品，美国食品药品管理局（FDA）于 2005年6月批准上市的新药。 四环素类药物发展第三阶段四环素类药物发展第三阶段 4 4，取代基，新活力！，取代基，新活力！ l(4S,4aS,5aR,12aS)-4,7-双(二甲氨基)-9-( 叔丁基氨基)乙酰胺基-3,10,12,12a-四羟 基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八 氢并四苯-2-甲酰胺 4 4，取代基，新活力！，取代基，新活